朱田密

(湖北省中醫(yī)院藥事部，湖北 武漢　430061)

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薄層色譜法鑒別“復(fù)方甲亢片”中的甲巰咪唑

朱田密

(湖北省中醫(yī)院藥事部，湖北 武漢430061)

摘要：目的建立一種鑒別復(fù)方甲亢片中甲巰咪唑的新方法。方法采用薄層色譜法，將供試品用濃氨試液潤(rùn)濕，用乙酸乙酯提取，經(jīng)硅膠GF254薄層層析，在紫外光燈254 nm下觀察以及用稀碘化鉍鉀試液顯色，與甲巰咪唑?qū)φ掌飞V對(duì)照。結(jié)果復(fù)方甲亢片色譜中甲巰咪唑斑點(diǎn)清晰，陰性無(wú)干擾。結(jié)論該方法可用于對(duì)中西藥復(fù)方制劑復(fù)方甲亢片中西藥成分甲巰咪唑進(jìn)行鑒別，從而替代原質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中的試管化學(xué)反應(yīng)鑒別法。

關(guān)鍵詞：甲巰咪唑/分析；色譜法,薄層；復(fù)方合劑

復(fù)方甲亢片(鄂藥制字Z20111106)為湖北省中醫(yī)院醫(yī)療機(jī)構(gòu)制劑，是根據(jù)湖北省中醫(yī)院陳如泉教授的經(jīng)驗(yàn)方，以炙黃芪、白芍等益氣養(yǎng)陰中藥為主配以少量西藥甲巰咪唑組成的中西藥復(fù)方制劑[1-3]。具有滋陰益氣，清熱平肝的功效，用于治療甲狀腺功能亢進(jìn)癥。臨床應(yīng)用30年中，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)逐步提高，但是現(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中對(duì)西藥成分甲巰咪唑的鑒別仍然模擬2005年版以前《中國(guó)藥典》對(duì)甲巰咪唑化學(xué)藥的試管化學(xué)反應(yīng)鑒別法[4-5]，即樣品提取液與二氯化汞試液、亞硝基鐵氰化鈉試液以及三硝基苯酚試液分別反應(yīng)產(chǎn)生相應(yīng)的現(xiàn)象。由于復(fù)方制劑中成分多，為純化出甲巰咪唑進(jìn)行試管反應(yīng)，步驟很復(fù)雜，反應(yīng)現(xiàn)象也不如單純西藥典型。并且，實(shí)驗(yàn)方法所用的二氯化汞是劇毒試劑，對(duì)操作人員健康有害，又嚴(yán)重污染環(huán)境。因此，有必要對(duì)此鑒別方法進(jìn)行改進(jìn)。研究發(fā)現(xiàn)，能用薄層色譜法(TLC)鑒別復(fù)方甲亢片中的甲巰咪唑，方法簡(jiǎn)便、快速、效果好。

1儀器與試藥

KQ-500VDE型雙頻數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；HWS-26電熱恒溫水浴鍋(上海齊欣科學(xué)儀器有限公司)；ZF-7型暗箱三用紫外線分析儀(上海嘉鵬科技有限公司)。復(fù)方甲亢片(湖北省中醫(yī)院制劑中心生產(chǎn)，批號(hào)為20150616，20150909，20151029)；缺甲巰咪唑的陰性樣品(湖北省中醫(yī)院制劑中心提供)；甲巰咪唑?qū)φ掌?中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)為100030-200504)；薄層層析硅膠GF254(青島海洋化工有限公司)，硅膠GF254預(yù)制板(青島海浪硅膠干燥劑有限公司)；濃氨溶液、乙酸乙酯、無(wú)水乙醇、環(huán)己烷、甲醇、碘化鉀、堿式硝酸鉍等試劑均為分析純。

2方法及結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1供試品溶液的制備取復(fù)方甲亢片5片，除去糖衣，研細(xì)，加濃氨試液3 mL潤(rùn)濕，加乙酸乙酯15 mL，超聲處理30 min(80 KHz，300 W)，濾過(guò)，濾液蒸干，殘?jiān)訜o(wú)水乙醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。

2.1.2陰性對(duì)照溶液的制備取缺甲巰咪唑的陰性樣品，按“2.1.1”同法制成陰性對(duì)照溶液。

2.1.3對(duì)照品溶液的制備取甲巰咪唑?qū)φ掌?，加無(wú)水乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

2.2薄層板的制備薄層層析硅膠GF254，用0.5%羧甲基纖維素鈉溶液作為黏合劑，手動(dòng)鋪板，鋪成厚度0.5 mm的薄層板，平放晾干，105 ℃干燥30 min，備用。

2.3薄層層析參照《中國(guó)藥典》2015年版四部的薄層色譜法(通則0502)試驗(yàn)[6]，吸取“2.1”項(xiàng)下制備的供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各5 μL，對(duì)照品溶液2 μL，分別點(diǎn)于上述薄層板上，以環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(3∶5∶0.8∶0.2)作為展開劑，展開，取出，晾干，在紫外光燈254 nm下檢視。供試品色譜中，在與甲巰咪唑?qū)φ掌飞V相應(yīng)的位置上，顯相同黑暗斑點(diǎn)；再噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜中，在與甲巰咪唑?qū)φ掌飞V相應(yīng)的位置上，顯相同紅色斑點(diǎn)，見(jiàn)圖1。

注：1.缺甲巰咪唑陰性樣品；2.甲巰咪唑?qū)φ掌罚?～5.供試品。

圖1復(fù)方甲亢片中甲巰咪唑的薄層色譜鑒別圖

3討論

薄層色譜法鑒別甲巰咪唑在國(guó)外藥品標(biāo)準(zhǔn)中已有先例：《英國(guó)藥典》和《歐洲藥典》收載甲巰咪唑(硫酮式)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)都采用了薄層色譜鑒別法[7-8]?！吨袊?guó)藥典》收載甲巰咪唑(硫醇式)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)未采用薄層色譜鑒別法，卻也將薄層色譜用于與甲巰咪唑有關(guān)的雜質(zhì)檢查[9]。薄層色譜法鑒別混合物中的目標(biāo)成分具有優(yōu)勢(shì)，本研究將薄層色譜法應(yīng)用于中西藥復(fù)方制劑中甲巰咪唑的鑒別，獲得滿意效果。

本方法的建立依賴于甲巰咪唑的兩個(gè)性質(zhì)特征：(1)甲巰咪唑能使GF254薄層板面發(fā)生熒光猝滅。這是由于甲巰咪唑的紫外最大吸收波長(zhǎng)位于252 nm[9]，對(duì)緊鄰的254 nm紫外光也有強(qiáng)烈吸收，導(dǎo)致GF254薄層板熒光背景出現(xiàn)暗斑;(2)甲巰咪唑是含氮有機(jī)化合物，與生物堿類似，在薄層板上遇稀碘化鉍鉀試液顯紅色斑點(diǎn)?；谶@兩個(gè)現(xiàn)象，經(jīng)過(guò)系統(tǒng)的研究考察，包括供試品提取方法、點(diǎn)樣量、檢視條件、展開系統(tǒng)、薄層板規(guī)格、溫濕度的考察(見(jiàn)“3.1～3.6”)，建立了該鑒別方法。經(jīng)過(guò)數(shù)批樣品驗(yàn)證，方法可行。

3.1提取方法考察設(shè)計(jì)4種方法提取供試品，分別為濃氨試液潤(rùn)濕后乙酸乙酯超聲提??；水潤(rùn)濕后乙酸乙酯超聲提??；直接用乙酸乙酯超聲提取；直接用無(wú)水乙醇超聲提取。結(jié)果：直接用乙酸乙酯沒(méi)有提取出甲巰咪唑；直接用無(wú)水乙醇提取出微量的甲巰咪唑；經(jīng)濃氨試液或水潤(rùn)濕后用乙酸乙酯都能提取出甲巰咪唑，但水潤(rùn)濕帶入的雜質(zhì)較多，故選擇濃氨試液潤(rùn)濕。結(jié)果見(jiàn)圖2。

注：1.甲巰咪唑?qū)φ掌罚?.濃氨試液潤(rùn)濕后乙酸乙酯提?。?.水潤(rùn)濕后乙酸乙酯提??；4.乙酸乙酯提??；5.無(wú)水乙醇提取。

圖2供試品提取方法考察薄層色譜圖(日光)

3.2點(diǎn)樣量考察將供試品溶液分別點(diǎn)樣1、2、4、6、8、10 μL，將對(duì)照品溶液分別點(diǎn)樣1、2 μL。結(jié)果供試品溶液點(diǎn)樣4～8 μL均合適，對(duì)照品溶液點(diǎn)樣2 μL合適，見(jiàn)圖3。

注：1～2.甲巰咪唑?qū)φ掌啡芤?1、2 μL)；3～8.供試品溶液(1、2、4、6、8、10 μL)。

圖3點(diǎn)樣量考察薄層色譜圖(日光)

3.3檢視條件選擇考察3種檢視條件，將展開后的GF254薄層板分別置于紫外光燈254、365 nm下檢視以及噴以稀碘化鉍鉀試液后在日光下檢視。結(jié)果：甲巰咪唑在365 nm下不顯熒光斑點(diǎn)，在254 nm下顯示清晰的暗斑，用稀碘化鉍鉀試液顯色后立即呈現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，見(jiàn)圖4。

注：1.缺甲巰咪唑陰性樣品；2.甲巰咪唑?qū)φ掌罚?～5.供試品。

圖4檢視條件考察薄層色譜圖

注：1.缺甲巰咪唑陰性樣品；2.甲巰咪唑?qū)φ掌罚?～5.供試品。

圖5展開系統(tǒng)考察薄層色譜圖(左圖：254 nm;右圖：日光)

注：1.缺甲巰咪唑陰性樣品；2.甲巰咪唑?qū)φ掌罚?～5.供試品。

圖6薄層板規(guī)格考察薄層色譜圖(左圖：254 nm;右圖：日光)

注：1.缺甲巰咪唑陰性樣品；2.甲巰咪唑?qū)φ掌罚?.供試品。

圖7溫濕度考察薄層色譜圖(左圖：254 nm;右圖：日光)

3.4展開系統(tǒng)考察考察4種展開系統(tǒng)，分別為三氯甲烷-甲醇-濃氨試液(20∶1∶1)，三氯甲烷-丙酮-濃氨試液(5∶2∶0.03)，乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(10∶0.4∶0.2)，環(huán)己烷-乙酸乙酯-甲醇-濃氨試液(3∶5∶0.8∶0.2)。第1種展開系統(tǒng)在254 nm下陰性樣品有干擾；第2種展開系統(tǒng)斑點(diǎn)略拖尾；第3種展開系統(tǒng)斑點(diǎn)圓整，但色譜背景較模糊；第4種展開系統(tǒng)分離效果最佳,色譜圖見(jiàn)圖5。

3.5薄層板考察采用自制薄層板(厚度0.5 mm)和預(yù)制板(厚度0.2～0.25 mm)試驗(yàn)，結(jié)果都能取得良好效果,色譜圖見(jiàn)圖6。

3.6溫濕度考察在不同溫濕度環(huán)境中試驗(yàn)(溫度介于9～32 ℃，濕度介于21%～79%)，按本方法展開色譜，結(jié)果均能得到清晰的斑點(diǎn),色譜圖見(jiàn)圖7。

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Identification of thiamazole in fufang jiakang tablets by thin-layer chromatography

ZHU Tian-mi

(DepartmentofPharmacy,HubeiProvincialHospitalofTraditionalChineseMedicine,Wuhan,Hubei430061,China)

Abstract:ObjectiveTo establish a new method for identification of thiamazole in fufang jiakang tablets.MethodsThin-layer chromatography(TLC) was used.Wetting the sample with ammonia solution,then extracted with ethyl acetate,developed on TLC silica gel GF254plate,examined under ultraviolet light at 254 nm,sprayed with dilute potassium iodobismuthate solution,and compared with the chromatography of thiamazole standard.ResultsThe spot of thiamazole in fufang jiakang tablets on TLC was clear and the negative test showed no interference.ConclusionsThe method can be used to identify thiamazole in the Chinese-Western combination preparation of fufang jiakang tablets,thereby substituting the chemical reaction identification test in current drug quality standard.

Key words:Methimazole/analysis;Chromatography,thin Layer;Drug combinations

基金項(xiàng)目:湖北省中醫(yī)院2014—2015年度科研專項(xiàng)計(jì)劃項(xiàng)目(JDZX2014Y24)

doi:10.3969/j.issn.1009-6469.2016.06.016

(收稿日期：2015-12-24,修回日期:2016-03-16)