羅偉，冀林華，崔森，馬曉靜，馮婷婷，殷玉娟

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院 血液科，青海 西寧 810001)

當(dāng)歸片對(duì)白血病患者血清葉酸、VB12及EPO的影響

羅偉Δ，冀林華，崔森，馬曉靜，馮婷婷，殷玉娟

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院 血液科，青海 西寧 810001)

目的 探討當(dāng)歸片對(duì)白血病患者血清葉酸、維生素B12(VB12)、促紅細(xì)胞生成素(erythropoietin，EPO)及脾臟特異性免疫的影響及其意義。方法 選取青海大學(xué)附屬醫(yī)院已確診為白血病的患者42例，采用隨機(jī)數(shù)字表法將患者隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，對(duì)照組21例，予臨床常規(guī)方法治療，實(shí)驗(yàn)組21例，在臨床常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用當(dāng)歸片4片/次，每天3次口服。4周為1個(gè)療程，共治療2個(gè)療程。治療結(jié)束后比較2組患者的血清葉酸、VB12及EPO水平、脾臟特異性免疫。結(jié)果 與對(duì)照組相比，治療后實(shí)驗(yàn)組血清VB12、EPO水平較低，葉酸水平較高(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組VB12和EPO、葉酸和VB12以及葉酸和EPO之間呈正相關(guān)(r=0.889，r=0.847，0.844；均P=0.000)。與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組淋巴細(xì)胞增殖、人白細(xì)胞(位點(diǎn))DR抗原[human leukocyte antigen(locus)，HLA-DR]比例較高，caspase-3細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)較低(P<0.05)。結(jié)論 當(dāng)歸片能有效調(diào)節(jié)白血病患者血清VB12、EPO、葉酸水平，提高脾臟特異性免疫功能。

白血??；當(dāng)歸片；葉酸；維生素B12；促紅細(xì)胞生成素

白血病(ICD-10:C91～C95)系造血系統(tǒng)的一種惡性疾病，是一種預(yù)后較差，病死率較高的惡性腫瘤[1]。流行病學(xué)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，白血病約占癌癥總發(fā)病率的5%，在我國(guó)白血病發(fā)病率約為2.76/10萬(wàn)，以急性白血病多見(jiàn)[2]，死亡率為4.1/10萬(wàn)，其中男性發(fā)病率約為女性1.3倍，且兒童期好發(fā)，在14歲以下兒童組惡性腫瘤發(fā)病的1/3[3]。臨床治療以化療、分子靶向治療等抗白血病治療為主，但化療會(huì)給患者帶來(lái)胃腸功能受損以及凝血功能抑制等副作用，降低了患者生存質(zhì)量。當(dāng)歸多糖是提取自傘形科植物當(dāng)歸根的有效成分[4]，其制劑為當(dāng)歸片，研究發(fā)現(xiàn)其對(duì)機(jī)體免疫系統(tǒng)、造血系統(tǒng)具明顯作用以及對(duì)抗腫瘤、抗放射性損傷的具有良好療效[5]，臨床已有將當(dāng)歸片應(yīng)用于肝癌、乳腺癌等惡性腫瘤治療的報(bào)道，但當(dāng)歸片應(yīng)用于治療白血病的文獻(xiàn)并不多見(jiàn)。葉酸和VB12是造血的重要原料，而紅細(xì)胞生成素(erythropoietin，EPO)濃度水平能夠直接反映造血功能[6]。因此，本研究通過(guò)探討當(dāng)歸片對(duì)白血病患者血清葉酸、VB12、EPO水平以脾臟特異性免疫的影響，為白血病患者的治療提供新的思路和方法。

1 資料與方法

1.1 一般資料 病例選擇2012年10月～2014年1月于青海大學(xué)附屬醫(yī)院以白血病為診斷而收入院的患者42例，采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組。實(shí)驗(yàn)組21例，男性13例，女性8例，年齡15～50歲，平均(32.2±6.8)歲；病程1～3月，平均(1.67±0.45)個(gè)月；其中急性淋巴細(xì)胞白血病(acute lymphocytic leukemia，ALL)7例，急性髓系白血病(acute myelogenous leukemia，AML) 4例，慢性淋巴細(xì)胞性白血病(chronic lymphocytic leukemia，CLL)6例，慢性髓細(xì)胞性白血病(chronic myelocytic leukemia，CML)4例。對(duì)照組21例，男性12例，女性9例，年齡14～48歲，平均(31.7±6.5)歲；病程1～3月，平均(1.62±0.43)個(gè)月；其中ALL6例，AML4例，CLL7例，CML4例。2組研究對(duì)象年齡、性別、病程和病理分型等一般情況比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，基線可比。本研究獲得本院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

納入及排除標(biāo)準(zhǔn)：根據(jù)中國(guó)慢性髓性白血病診斷與治療指南(2013年版)[7]中的診斷標(biāo)準(zhǔn)而擬定以下納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合白血病的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②患者首次入院并診斷為白血?。虎蹮o(wú)其他導(dǎo)致凝血功能障礙疾病者；④患者年齡均在10～55歲，病程在1～3個(gè)月；⑤X線、超聲等檢查無(wú)心、肝、腎等器質(zhì)性病變者；⑥患者對(duì)當(dāng)歸片無(wú)過(guò)敏者；⑦患者或其家屬同意并自愿參與本實(shí)驗(yàn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①不愿參與本研究或不符合納入標(biāo)準(zhǔn)者；②既往患有精神神經(jīng)障礙疾病者；③患有乙肝、艾滋病等具有傳染性較強(qiáng)疾病者；④合并有嚴(yán)重肝、腎功能不全疾病患者；⑤患有心肌梗死、心力衰竭、肺心病、呼吸衰竭等重大原發(fā)疾病者；⑥年齡低于10歲或超過(guò)55歲者；⑦患有精神類疾病不能配合研究者。

1.2 方法

1.2.1 治療方法：所有ALL和CLL患者均采取常規(guī)(長(zhǎng)春新堿+潑尼松)方案化療：注射用硫酸長(zhǎng)春新堿(上海醫(yī)藥集團(tuán)有限公司華聯(lián)制藥廠，國(guó)藥準(zhǔn)字H33020421)隔7天靜注1次，每次2 mg，醋酸潑尼松片(天津力生制藥股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H12020123)1 mg/kg，每天1次口服。所有AML和CML患者均采取常規(guī)(柔紅霉素+阿糖胞苷)方案化療：注射用鹽酸柔紅霉素(深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H44024361)45 mg/m2隔3天靜推1次，注射用鹽酸阿糖胞苷(浙江海正藥業(yè)股份有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20054695)150 mg/m2隔7天靜脈滴注1次。所有患者均接受抗感染、成分輸血等對(duì)癥治療。實(shí)驗(yàn)組患者在與對(duì)照組相同的常規(guī)治療基礎(chǔ)上加用當(dāng)歸片(武漢太福制藥有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z42021841)，4片/次，每天3次口服，以4周為1個(gè)療程，共治療2個(gè)療程。治療結(jié)束后隨訪觀察1年，記錄2組患者生存率以及死亡率。

1.2.2 觀察指標(biāo)：血清指標(biāo)采集：所有研究對(duì)象均于治療前、治療8周后，采集空腹肘靜脈血4 mL，置于真空采血管中，于室溫下用水平離心機(jī)以3000 r/min轉(zhuǎn)速離心20 min，分離血清，行放射免疫法測(cè)定血清中葉酸、VB12及EPO濃度水平(試劑及DXI-800全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光免疫分析儀由Beckman公司提供)。

脾臟特異性免疫功能檢測(cè)方法：2組患者在治療前后抽取空腹肘靜脈血10 mL，2000 r/min離心5 min后，取上清，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)采用Selectra E全自動(dòng)生化分析儀(上海玉研科學(xué)儀器有限公司)檢測(cè)淋巴細(xì)胞(A值)、人白細(xì)胞(位點(diǎn))DR抗原[human leukocyte antigen(locus)，HLA-DR]及半胱氨酸天冬氨酸特異性蛋白酶(cysteine-containing aspartate-specific proteases，caspase-3)細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)，試劑盒由武漢博士德生物技術(shù)有限公司提供。

2 結(jié)果

2.1 2組患者血清葉酸水平比較 與治療前相比，2組患者葉酸水平升高(P<0.05)，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組治療后葉酸水平較高(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 2組患者血清葉酸水平比較±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.2 2組患者血清VB12水平比較 與治療前相比，2組患者VB12水平降低(P<0.05)，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組治療后VB12水平較低(P<0.05)。見(jiàn)表2。

表2 2組患者血清VB12水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.3 2組患者血清EPO水平比較 結(jié)果顯示，與治療前相比，2組患者EPO水平降低(P<0.05)，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組治療后EPO水平較低(P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 2組患者血清EPO水平比較

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

2.4 實(shí)驗(yàn)組血清葉酸、VB12及EPO之間的相關(guān)性 實(shí)驗(yàn)組VB12和EPO、葉酸和VB12以及葉酸和EPO之間呈正相關(guān)(r=0.889，r=0.847，0.844；均P=0.000)。

2.5 2組患者治療前后脾臟特異性免疫功能情況比較 治療后實(shí)驗(yàn)組患者淋巴細(xì)胞增殖高于治療前，2組HLA-DR比例均高于治療前(P<0.05)、caspase-3細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)均低于治療后(P<0.05)，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組淋巴細(xì)胞增殖、HLA-DR比例較高，caspase-3細(xì)胞陽(yáng)性指數(shù)較低(P<0.05)。見(jiàn)表4。

表4 2組患者脾臟特異性免疫功能變化比較±s)

*P<0.05，與同組治療前比較，compared with the same group pre-treatment；#P<0.05，與對(duì)照組治療后比較，compared with control group post-treatment

3 討論

白血病的發(fā)病多與病毒感染和免疫功能異常等生物因素、X線電離輻射等物理因素、多年接觸苯等化學(xué)因素、遺傳因素等相關(guān)[8]，且隨著當(dāng)今環(huán)境污染加重，尤其是室內(nèi)外環(huán)境污染的加重，白血病的發(fā)病率亦呈逐年上升趨勢(shì)。當(dāng)歸多糖是提取自傘形科植物當(dāng)歸根的有效成分，其制劑為當(dāng)歸片。祖國(guó)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，當(dāng)歸具有補(bǔ)血、活血、調(diào)經(jīng)止痛等功效，用于治療月經(jīng)不調(diào)、閉經(jīng)、腹痛、崩漏、血虛頭痛、眩暈等癥，是臨床較為常用的中藥之一[9]。國(guó)內(nèi)者研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸多糖具有激活補(bǔ)體活性，可去除自由基、調(diào)節(jié)免疫力，在抗腫瘤方面也顯示顯著療效[10]，，臨床上可應(yīng)用于治療心血管疾病、貧血、腎病綜合癥、痛經(jīng)、更年期綜合征等疾病。

本研究結(jié)果顯示，治療前2組患者血清中葉酸、VB12、EPO水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。治療后，2組患者血清VB12、EPO水平均較治療前降低，葉酸水平較治療前升高(P<0.05)，提示2種治療方法均可降低患者血清VB12、EPO水平，升高葉酸水平。實(shí)驗(yàn)組患者血清VB12、EPO水平較對(duì)照組降低明顯(P<0.05)，提示當(dāng)歸片能夠明顯降低患者血清VB12、EPO水平。VB12和葉酸是人體主要的造血原料。葉酸是DNA合成過(guò)程中的重要輔酶，研究指出，當(dāng)機(jī)體缺乏葉酸和維生素B12時(shí)，可以引起DNA合成障礙，出現(xiàn)了核發(fā)育遲緩、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)異常，使細(xì)胞大而幼稚畸形，出現(xiàn)巨幼紅細(xì)胞性貧血[11]。在本研究中，治療前2組患者血清葉酸水平均較低，而治療結(jié)束后則有所升高，其原因可能是在白血病發(fā)病期間，由于白血病細(xì)胞的過(guò)度增殖，導(dǎo)致大量DNA合成，大量葉酸被利用從而導(dǎo)致患者血清葉酸水平降低，而經(jīng)過(guò)治療后，白血病細(xì)胞被大量清除，機(jī)體葉酸水平能夠逐步恢復(fù)至接近正常水平。研究發(fā)現(xiàn)，葉酸、鐵蛋白可作為白血病的一種病情監(jiān)測(cè)指標(biāo)，動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)AL病程中血清葉酸、鐵蛋白水平變化，有助于間接了解白血病的生物學(xué)行為特性及病情進(jìn)展情況，初步預(yù)測(cè)化療的效果，進(jìn)行病情評(píng)估及預(yù)后判斷，早期發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)，指導(dǎo)化療方案及時(shí)調(diào)整；具有較好的實(shí)用價(jià)值[12]。維生素B12是人體組織代謝過(guò)程中必需的維生素，是人和其它哺乳動(dòng)物維持生長(zhǎng)和促進(jìn)紅細(xì)胞生長(zhǎng)的重要因子，具有廣泛的生理作用，參與體內(nèi)甲基轉(zhuǎn)換及葉酸代謝，促進(jìn)神經(jīng)髓鞘中脂蛋白的形成，保持中樞神經(jīng)和外周髓鞘神經(jīng)纖維的功能完整[13]。VB12不僅具有促進(jìn)紅細(xì)胞發(fā)育和成熟的作用，還具有提高葉酸利用率、維護(hù)神經(jīng)髓鞘代謝與功能的作用。在本研究中，2組患者治療前血清VB12水平均較高，其原因可能與白血病患者單核巨噬細(xì)胞活力增強(qiáng)釋放或細(xì)胞破壞過(guò)多而產(chǎn)生。EPO是一種紅細(xì)胞生長(zhǎng)刺激因子，主要由腎臟產(chǎn)生，能夠直接反映機(jī)體造血功能。低氧和貧血是導(dǎo)致血清EPO增高的主要原因，本研究中2組患者治療前血清EPO明顯高于正常值，其原因可能是疾病活動(dòng)階段，白血病患者骨髓內(nèi)白血病細(xì)胞急劇增殖，正常紅系造血功能受到抑制，導(dǎo)致患者貧血和缺氧，從而引起血清EPO升高，而當(dāng)實(shí)驗(yàn)組患者應(yīng)用當(dāng)歸片治療后，白細(xì)胞增殖受到抑制，從而缺氧得到相應(yīng)緩解，血清EPO水平隨之降低。結(jié)果中得到白血病患者血清VB12和EPO之間呈正相關(guān)，國(guó)內(nèi)已有學(xué)者報(bào)道，白血病患者血清VB12和EPO之間具有一定相關(guān)性[14-15]，與本研究結(jié)果達(dá)到一致性。

本研究結(jié)果顯示，當(dāng)歸片具有調(diào)節(jié)脾臟特異性免疫功能的作用。研究指出[16]，白血病患者體內(nèi)脾臟淋巴細(xì)胞大量凋亡，本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，當(dāng)歸片能有效減少淋巴細(xì)胞的凋亡，增加淋巴細(xì)胞的增殖，提高免疫水平。結(jié)果中顯示當(dāng)歸片治療后淋巴細(xì)胞增殖明顯優(yōu)于對(duì)照組(P<0.05)。HLA-DR是抑制免疫細(xì)胞間相互作用從而控制免疫應(yīng)答強(qiáng)度的作用，因此在一定程度上通過(guò)調(diào)節(jié)HLA-DR的表達(dá)水平能夠達(dá)到調(diào)節(jié)免疫平衡的目的。有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)研究指出[17]，當(dāng)歸片能促進(jìn)60Co 受照射小鼠 ConA誘導(dǎo)的胸腺T淋巴細(xì)胞增殖的恢復(fù)，而且還能升高小鼠外周血白細(xì)胞和血小板計(jì)數(shù)，并得出當(dāng)歸片能顯著促進(jìn)放射損傷小鼠的紅細(xì)胞免疫粘附功能和造血功能，這一結(jié)論也可能是白血病患者脾臟特異性免疫功能升高的原因之一。

本研究通過(guò)對(duì)42例白血病患者的血清中葉酸、VB12、EPO水平、脾臟特異性免疫功能的變化，證實(shí)當(dāng)歸片對(duì)白血病患者的治療具有一定的意義。在未來(lái)的研究中，本課題組將對(duì)當(dāng)歸片對(duì)白血病患者治療的藥理作用進(jìn)行深入研究，為本實(shí)驗(yàn)所得出的結(jié)果做出進(jìn)一步的論證和分析。

[1] 劉玉琴，趙鳳菊，陳萬(wàn)青，等.中國(guó)2009年白血病發(fā)病和死亡資料分析[J].中國(guó)腫瘤，2013，22(7)：528-534.

[2]黃治虎，陳寶安，歐陽(yáng)建，等.我國(guó)白血病流行病學(xué)調(diào)查的現(xiàn)狀和對(duì)策[J].臨床血液學(xué)雜志，2009，22(2)：166-167.

[3]潘秀丹，潘紹凡，李洵.兒童白血病死亡分布特征及變化趨勢(shì)[J].中國(guó)腫瘤，2004，13(11)：709-711.

[4]劉云.當(dāng)歸多糖的提取及含量測(cè)定[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐，2003，17(1)：49-53.

[5]胡小平，李玉云，李先何，等.當(dāng)歸多糖的成分及藥理學(xué)研究新進(jìn)展[J].中藥材，2004，27(1)：70-72.

[6]萬(wàn)理，魏濤，張偉，等.葉酸與維生素B12在強(qiáng)化促紅細(xì)胞生成素促進(jìn)早產(chǎn)兒造血中作用的研究[J].中華兒科雜志，2009，47(3)：216-217.

[7]中華醫(yī)學(xué)會(huì)血液學(xué)分會(huì).中國(guó)慢性髓性白血病診斷與治療指南(2013年版)[J].中華血液學(xué)雜志，2013，34(5)：426-432.

[8]孫曉東，柴憶歡，曹幼甫，等.兒童白血病發(fā)病因素調(diào)查研究[J].中國(guó)航天醫(yī)藥雜志，2003，5(6)：1-3.

[9]楊懷智，張中和.當(dāng)歸的抗炎鎮(zhèn)痛作用[C]//中醫(yī)雜志創(chuàng)刊五十周年紀(jì)念會(huì)暨全國(guó)中醫(yī)藥發(fā)展高級(jí)論壇，2005.

[10] 孫元琳，顧小紅，李德遠(yuǎn)，等.當(dāng)歸多糖對(duì)急性輻射損傷小鼠外周血淋巴細(xì)胞的保護(hù)作用[J].中華放射醫(yī)學(xué)與防護(hù)雜志，2006，26(4)：369-370.

[11]李科成，付琴，于明華，等.巨幼細(xì)胞性貧血細(xì)胞形態(tài)學(xué)診斷分析[J].中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新，2010，7(3)：132-133.

[12]高紹華，李寶軍.急性白血病化療前后血清葉酸、鐵蛋白水平變化及其臨床意義[J].武警后勤學(xué)院學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2009，18(5)：446-447.

[13]戴偉國(guó).中國(guó)維生素B12前景展望[J].上海醫(yī)藥，2004，25(8)：371.

[14]陳琦，任明強(qiáng)，羅世惜.急慢性白血病患者血清EPO與TPO水平的動(dòng)態(tài)測(cè)定及臨床意義[J].廣東醫(yī)學(xué)，2007，28(10)：1658-1660.

[15]劉琰，劉息平，曹祥山，等.血清維生素B12水平與急性白血病的關(guān)聯(lián)[J][J].腫瘤，2008，28(12)：1074-1076.

[16]朱景德.慢性粒細(xì)胞性白血病患者脾臟的淋巴細(xì)胞[J].國(guó)外醫(yī)學(xué).內(nèi)科學(xué)分冊(cè)，1975(9)：16.

[17]洪艷，劉君炎.當(dāng)歸多糖對(duì)放射損傷小鼠細(xì)胞免疫的調(diào)節(jié)作用[J].武漢大學(xué)學(xué)報(bào)：醫(yī)學(xué)版，2001，22(1)：26-28.

(編校：王儼儼)

Effect of angelica tablets on serum folate, VB12 and erythropoietin in patients with leukaemia

LUO WeiΔ, JI Lin-hua, CUI Sen, MA Xiao-jing, FENG Ting-ting, YIN Yu-juan

(Department of Hematology, Affiliated Hospital of Qinghai University, Xining 810001,China)

ObjectiveTo investigate the effect of angelica tablets on serum folate, VB12, erythropoietin (EPO) levels and the specific immune function of spleen in patients with leukaemia.Methods42 patients with leukemia in the Affiliated Hospital of Qinghai University were randomly divided into experimental group and control group with random digital table. 21 cases in control group

routine treatment method, 21 cases in experimental group received angelica tablets of 4 tablets per times, three times per day, orally. All patients were treated for two courses with one course of two weeks. The serum folate, VB12, EPO levels and the specific immune function of spleen were compared between two groups pre-and post-treatment.ResultsCompared with control group, the serum VB12 and EPO levels post-treatment were lower and folate level was higher (P<0.05). There were positive correlation between serum levels of VB12 and EPO, between folate and VB12, between folate and EPO (r=0.889，r=0.847，0.844；allP=0.000). Compare with control group, the lymphocyte proliferation and HL A-DR ratio were higher and the positive cells index of caspase-3 was lower in experimental group (P<0.05).ConclusionAngelica tablets could regulate serum levels of VB12, EPO and folic acid levels and improve the specific immune function of spleen effectively in patients with leukemia.

leukemia; angelica tablets; folate; VB12; erythropoietin

羅偉，通信作者，男，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：內(nèi)科學(xué)血液病、慢性高原病，E-mail：2042152632@qq.com。

R552

A

1005-1678(2016)01-0056-04