褚麗萍，劉金劍，楊翠紅，黃帆，劉鑒峰，張玉民

(北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院&中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所，天津 300192)

阿霉素前藥納米粒/姜黃素聯(lián)合遞送系統(tǒng)的構(gòu)建及其抗腫瘤研究

褚麗萍，劉金劍，楊翠紅，黃帆，劉鑒峰，張玉民Δ

(北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院&中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所，天津 300192)

目的 以酸敏感阿霉素前藥納米粒為基礎(chǔ)，通過負(fù)載姜黃素構(gòu)建聯(lián)合遞送系統(tǒng)，從而在提高抗腫瘤細(xì)胞增殖效果的同時降低由阿霉素引起的心肌細(xì)胞毒性。方法 利用阿霉素(doxorubicin，DOX)的氨基與醛基化聚乙二醇(PEG-CHO)的醛基進(jìn)行席夫堿反應(yīng)得到PEG-DOX前藥聚合物，通過疏水作用將疏水性抗腫瘤藥物姜黃素(curcumin，Cur)負(fù)載到PEG-DOX的疏水內(nèi)核中，最后通過納米沉淀技術(shù)得到同時負(fù)載兩種藥物的前藥納米粒PEG-DOX/Cur NPs。通過核磁(1H-NMR)對PEG-DOX前藥進(jìn)行結(jié)構(gòu)表征，利用動態(tài)光散射(DLS)和透射電鏡(TEM)對PEG-DOX/Cur NPs的粒徑和形貌進(jìn)行表征；利用反相高效液相色譜法(RP-HPLC)研究PEG-DOX/Cur NPs在酸性條件下的藥物釋放行為；利用MTT法研究 PEG-DOX/Cur NPs的腫瘤細(xì)胞(H1975)增殖抑制效果以及評價PEG-DOX/Cur NPs對心肌細(xì)胞(H2C9)的毒性；通過H2C9細(xì)胞內(nèi)的氧化自由基(ROS)水平檢測(2′,7′-二氯熒光素二乙酸鹽法，DCFH-DA法)揭示PEG-DOX/Cur NPs對DOX心肌細(xì)胞毒性改善的機(jī)理。結(jié)果 PEG-DOX/Cur NPs為直徑約90 nm的均一的球形結(jié)構(gòu)，在酸性條件下能夠同步釋放DOX和Cur；MTT結(jié)果表明PEG-DOX/Cur NPs的H1975細(xì)胞增殖抑制效果優(yōu)于DOX和PEG-DOX NPs(P<0.05)，且PEG-DOX/Cur NPs對H2C9細(xì)胞的毒性明顯低于DOX和PEG-DOX NPs(P<0.05)；H2C9細(xì)胞ROS含量檢測結(jié)果表明PEG-DOX/Cur NPs處理的心肌細(xì)胞具有最低的ROS水平(P<0.05)，由此說明PEG-DOX/Cur NPs較低的心肌細(xì)胞毒性可能源于Cur引起的胞內(nèi)ROS的降低所致。結(jié)論 基于DOX前藥納米粒負(fù)載Cur構(gòu)建聯(lián)合遞送系統(tǒng)在實(shí)現(xiàn)了理想的腫瘤細(xì)胞增殖抑制效果的同時，明顯的降低了由DOX引起的心肌細(xì)胞毒性，實(shí)現(xiàn)了聯(lián)合治療的效益最大化。

納米粒前藥；阿霉素；姜黃素；聯(lián)合治療；心肌毒性

據(jù)世界衛(wèi)生組織組織統(tǒng)計，全世界每年約有400多萬人死于癌癥，癌癥已躍居死亡率的首位[1]。如何抗癌已成為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)科技的重大挑戰(zhàn)之一。在各種腫瘤治療中，由于小分子化療藥物對殺死腫瘤的高效性，成為了必不可少的選擇。然而，由于其本身的物理化學(xué)特性導(dǎo)致的生物利用度差、血液/腎清除速率高、特異性差、腫瘤蓄積濃度低、毒副作用大，以及易產(chǎn)生腫瘤多藥耐藥等問題嚴(yán)重限制了其臨床應(yīng)用[2]。納米藥物遞送系統(tǒng)的提出明顯的改善了化療制劑的水溶性、生物利用度、藥代動力學(xué)特性，一定程度上提高了抗腫瘤效率及降低了對機(jī)體的毒副作用[3-6]。傳統(tǒng)的納米載體藥物僅僅負(fù)載一種藥物，由于其緩慢的釋放藥物并不能夠從根本上改善抗腫瘤效果，以及徹底解決對機(jī)體的毒性反應(yīng)[7-9]。因此，本實(shí)驗(yàn)設(shè)計了一個能夠同時遞送兩種化療藥物的前藥納米粒，即疏水抗腫瘤藥物1直接作為疏水內(nèi)核，與合適尺寸的親水段聚乙二醇(PEG)通過化學(xué)鍵合起來，二者通過親疏水作用組裝成具有一定形態(tài)的功能性前藥納米載體；前藥納米載體中的疏水內(nèi)核(疏水性抗腫瘤藥物1)通過與疏水性抗腫瘤藥物2的疏水作用，將藥物2包覆在前藥納米載體中，實(shí)現(xiàn)了對兩種藥物的同時遞送。與聯(lián)合單體藥物治療比較，能夠徹底的降低系統(tǒng)毒性或其他副作用。此多藥物遞送系統(tǒng)保證有充足的藥物能夠到達(dá)腫瘤部位，確保聯(lián)合治療的協(xié)同效應(yīng)以及改善抗腫瘤活性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑:端基醛基功能化的聚乙二醇(mPEG2000-CHO)購自于北京鍵凱科技有限公司；姜黃素(curcumin)和鹽酸鹽阿霉素(DOX-HCL)購自浙江海正藥業(yè)有限公司；2′,7′-二氯熒光素二乙酸鹽(DCFH-DA)購自于美國sigma-aldrich公司；其它生化試劑均購自于希恩思生化科技有限公司。小鼠肺癌細(xì)胞(H1975細(xì)胞)和小鼠心肌細(xì)胞(H2C9細(xì)胞)由南開大學(xué)楊志謀教授惠贈。

1.1.2 主要儀器:動態(tài)光散射粒度儀(DLS，Zetasizer Nano ZS90，Malvern Instruments，美國)；透射電鏡(TEM；Tecani G2 F20系統(tǒng)，美國)；1H核磁共振波譜儀(VARIAN Unity Plus 400 MHz，Varian Instruments，美國)；反相高效液相色譜儀(RP-HPLC，Waters，美國)；全波長酶標(biāo)儀(VARIOSKAN FLASH，Thermo scientific，美國)。

1.2 方法

1.2.1 PEG-DOX的合成及表征：通過DOX的氨基與mPEG2000-CHO的醛基反應(yīng)形成席夫堿鍵，得到DOX前藥聚乙二醇-阿霉素(PEG-DOX)。稱取300 mg mPEG2000-CHO和80 mg DOX-HCL，共溶解于3.0 mL無水二甲基亞砜(DMSO)中，加入30 μL三乙胺(Et3N)催化該反應(yīng)，40 ℃油浴條件下反應(yīng)24 h，得到具有酸敏感的PEG-DOX。隨后利用透析方法逐次地將未反應(yīng)的DOX-HCL和DMSO透析出來，得到PEG-DOX水溶液，通過真空凍干48 h得到PEG-DOX凍干粉。通過1H核磁共振波譜儀對PEG-DOX進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)表征。

1.2.2 PEG-DOX/Cur NPs和PEG-DOX NPs的制備及表征：稱取10 mg PEG-DOX凍干粉和2 mg Cur充分溶解溶于2.0 mL N,N-二甲基甲酰胺(DMF)內(nèi)，通過納米沉淀技術(shù)緩慢地滴于8.0 mL磷酸鹽緩沖液(PBS，pH7.4)中，震蕩12 h后利用透析的方法除去有機(jī)溶劑DMF。得到基于DOX前藥納米粒的聯(lián)合遞送系統(tǒng)PEG-DOX/Cur NPs。PEG-DOX NPs的制備方法同上。通過DLS測定PEG-DOX NPs和PEG-DOX/Cur NPs的粒徑，利用TEM對其納米形貌進(jìn)行表征。

1.2.3 體外藥物釋放：取2份2.0 mL PEG-DOX/Cur NPs溶液裝入分子截留量為3500的透析袋內(nèi)，分別置于裝有50 mL PBS(pH 7.4和pH 5.0)的燒杯內(nèi)，37 ℃恒溫震蕩，在不同孵育時間取5.0 mL透析液，通過RP-HPLC檢測不同時間DOX和Cur的釋放量并繪制釋放曲線。

1.2.4 體外抗腫瘤試驗(yàn)用含10%胎牛血清，100 U/mL青霉素和100 μg/mL鏈霉素的 RMPI1640培養(yǎng)小鼠肺癌細(xì)胞系H1975細(xì)胞，置于37 ℃、 5% CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。取對數(shù)生長期細(xì)胞以每孔5×103個接種于96孔板內(nèi)培養(yǎng)24 h，向各孔中分別加入一系列濃度梯度(按照DOX濃度為0.2、0.39、0.78、1.56、3.125、6.25、12.5和25 μg/mL和Cur濃度為0.08、0.16、0.312、0.625、1.25、2.5、5和10 μg/mL)的DOX-HCL、Cur、PEG-DOX NPs和PEG-DOX/Cur NPs，培養(yǎng)箱內(nèi)孵育24 h后向孔內(nèi)加入20 μL MTT溶液(5 mg/mL)，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后向孔內(nèi)加入150 μL DMSO溶液，充分震蕩后利用酶標(biāo)儀檢測570 nm下各孔的吸光值。每個濃度設(shè)置6個復(fù)孔，根據(jù)公式細(xì)胞生存率=實(shí)驗(yàn)組吸光值/對照組吸光值×100%。計算每個濃度下的細(xì)胞生存率并繪制生存率曲線。

1.2.5 心肌細(xì)胞毒性:心肌細(xì)胞毒性試驗(yàn)采用小鼠心肌細(xì)胞系H2C9細(xì)胞，細(xì)胞培養(yǎng)方法和MTT試驗(yàn)步驟同1.2.4。每個濃度設(shè)置6個復(fù)孔。

1.2.6 心肌細(xì)胞ROS水平檢測:采用2′,7′-二氯熒光素二乙酸鹽(DCFH-DA)作為探針檢測經(jīng)不同藥物處理后的心肌細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生ROS的水平。該方法的原理為：DCFH-DA分子本身沒有熒光，能夠自由的穿過細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，然后被細(xì)胞內(nèi)的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能夠穿透細(xì)胞膜，所以探針被裝載到細(xì)胞內(nèi)。細(xì)胞內(nèi)的ROS可以將DCFH氧化成具有熒光信號的DCF，細(xì)胞內(nèi)ROS的含量與DCF的熒光強(qiáng)度成正比。按照1.2.4中所述方法培養(yǎng)H2C9細(xì)胞，取對數(shù)生長期細(xì)胞接種于24孔板內(nèi)，培養(yǎng)過夜后分別將DOX-HCL、Cur、PEG-DOX NPs和PEG-DOX/Cur NPs(按照DOX濃度為20 μg/mL，Cur濃度為8 μg/mL)加入到孔內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)24 h，隨后向每孔加入20 mM DCFH-DA溶液，繼續(xù)培養(yǎng)1 h，用PBS清洗細(xì)胞2-3次后利用酶標(biāo)儀檢測細(xì)胞內(nèi)DCF的熒光強(qiáng)度，每個濃度設(shè)置6個復(fù)孔。激發(fā)波長和發(fā)射波長分別為485 nm和525 nm。標(biāo)準(zhǔn)化熒光強(qiáng)度的計算公式為：實(shí)驗(yàn)組熒光強(qiáng)度值/對照組熒光強(qiáng)度值×100。

2 結(jié)果

2.1 PEG-DOX的合成及結(jié)構(gòu)表征 在Et3N催化作用下合成PEG-DOX單體，通過圖1的核磁數(shù)據(jù)比較分析，反應(yīng)后mPEG2000-CHO的醛基(CHO)峰消失和DOX-HCL的氨基(NH2)，證明席夫堿鍵(C=N)成功通過CHO與NH2合成，得到PEG-DOX單體。

圖1 DOX-HCL(A)，mPEG2000-CHO(B)和PEG-DOX單體(C)的核磁圖譜分析Fig.1 1H NMR spectra of DOX-HCL (A), mPEG2000- CHO (B) and PEG-DOX (C)

2.2 PEG-DOX/Cur NPs和PEG-DOX NPs的粒徑及形貌表征 通過納米沉淀技術(shù)和透析得到PEG-DOX NPs和PEG-DOX/Cur NPs。表征結(jié)果見圖2，通過DLS和TEM表征得到二者均為形貌均一的球形結(jié)構(gòu)，粒徑分別為64.2和88.4 nm。

圖2 PEG-DOX NPs(A)和PEG-DOX/Cur NPs(B)的DLS和TEM表征結(jié)果Fig.2 Hydrodynamic size distributions and TEM images of PEG-DOX NPs (A) and PEG-DOX/Cur NPs (B)

2.3 藥物釋放曲線 通過透析方法結(jié)合RP-HPLC檢測PEG-DOX/Cur NPs在不同條件下的DOX和Cur的釋放速率。結(jié)果見圖3，表明DOX和Cur在正常生理?xiàng)l件下均穩(wěn)定的裝載到前藥納米粒內(nèi)，釋放率低于10%；在模擬腫瘤環(huán)境的酸性條件下(pH 5.0), DOX和Cur均表現(xiàn)出較靈敏、快速的同步釋放，在24 h時釋放率高達(dá)70～80%。

圖3 PEG-DOX/Cur NPs中DOX和Cur在不同條件下的釋放曲線Fig.3 DOX and Cur release profiles of PEG-DOX-Cur NPs under different pH values.

2.4 體外抗腫瘤試驗(yàn) 各個受試藥物對H1975細(xì)胞的增殖抑制能力結(jié)果見圖4。相對于DOX-HCL，PEG-DOX的腫瘤細(xì)胞增殖抑制能力稍差，但差異無統(tǒng)計學(xué)意義；而Cur 負(fù)載后的PEG-DOX/Cur NPs因可以同時遞送DOX和Cur實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的聯(lián)合殺傷，顯著增強(qiáng)了PEG-DOX對H1975細(xì)胞的增殖抑制能力。在DOX濃度為1.56 μg/mL和Cur濃度為0.625 μg/mL時，F(xiàn)值為15.057，細(xì)胞生存率PEG-DOX/Cur NPs(56.1±10.2%) vs. PEG-DOX NPs (79.0±4.2%)的P值為0.01。

圖4 不同藥物對H1975細(xì)胞的生存率影響的比較(n=6)Fig.4 Cytotoxicity of free DOX, Cur, PEG-DOX NPs and PEG-DOX/Cur NPs against H1975 cells (n=6)

2.5 心肌細(xì)胞毒性 據(jù)文獻(xiàn)報道[10-11]DOX在代謝過程中可誘導(dǎo)活性氧自由基(ROS)的產(chǎn)生。而ROS可通過線粒體依賴性的細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)引起心肌細(xì)胞凋亡。對正常心肌細(xì)胞H2C9的毒性結(jié)果見圖5，與DOX-HCL和 PEG-DOX相比，PEG-DOX/Cur NPs同時遞送DOX和Cur，但其對H2C9細(xì)胞的毒性明顯降低(P<0.05)。在DOX濃度為1.56 μg/mL和Cur濃度為0.625 μg/mL時，F(xiàn)值為61.688， H2C9細(xì)胞的生存率PEG-DOX/Cur NPs(92.0±3.6%)相對于DOX(61.8±7.9%)和PEG-DOX NPs(56.5±5.6%)的P值分別為0.01和0.01。

圖5 不同藥物對心肌細(xì)胞的生存率影響的比較(n=6)Fig.5 Cytotoxicity of free DOX, Cur, PEG-DOX NPs and PEG- DOX/Cur NPs against H2C9 myocardial cells(n=6)

2.6 心肌細(xì)胞ROS水平檢測 因Cur具有清除ROS的能力，為了進(jìn)一步確證DOX的心肌毒性是否是由其在心肌細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的ROS所介導(dǎo)以及研究PEG-DOX/Cur NPs降低DOX心肌細(xì)胞毒性的機(jī)理，本研究進(jìn)行了不同藥物處理的心肌細(xì)胞內(nèi)ROS水平檢測。如圖6所示，經(jīng)DOX-HCL 和PEG-DOX處理的心肌細(xì)胞顯示出了較高的ROS水平；而經(jīng)PEG-DOX/Cur NPs處理的心肌細(xì)胞ROS水平明顯降低，F(xiàn)值21.577，PEG-DOX/Cur NPs (67.0±3.3%)相對于DOX (162.4±25.9%)和PEG-DOX NPs(109.4±16.4%)的P值分別為0.01和0.027。由此說明在PEG-DOX/Cur NPs遞送系統(tǒng)中，DOX產(chǎn)生的ROS可能被Cur徹底清除，從而DOX的心肌細(xì)胞毒性得到了明顯的改善。

圖6 不同藥物處理后H2C9細(xì)胞內(nèi)ROS的含量的比較(n=6)Fig.6 The differences of ROS in the H2C9 cells treated by free DOX, Cur, PEG-DOX NPs and PEG-DOX/Cur NPs(n=6)

3 討論

基于嵌段共聚物作為納米遞送系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)了對多個藥物的聯(lián)合遞送，然而由于其復(fù)雜的遞送體系降低了藥物的釋放效率，導(dǎo)致其聯(lián)合治療或協(xié)同治療的效果并不明顯[12]。本文中利用抗腫瘤藥物DOX直接作為疏水內(nèi)核組裝的前藥載體，通過疏水作用負(fù)載Cur制備PEG-DOX/Cur NPs，在到達(dá)酸性條件的腫瘤時，PEG-DOX/Cur NPs能夠通過響應(yīng)性解體，實(shí)現(xiàn)同步遞送和高效釋放DOX和Cur，實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的聯(lián)合治療。

體外抗腫瘤結(jié)果表明，單獨(dú)的PEG-DOX NPs 顯示了比 DOX-HCL 較溫和的細(xì)胞毒性，這是由于納米結(jié)構(gòu)與小分子藥物被腫瘤細(xì)胞攝取的機(jī)制不同所導(dǎo)致的[13]。即納米粒子首先通過細(xì)胞內(nèi)吞進(jìn)入細(xì)胞，在細(xì)胞內(nèi)開始?xì)饔眠€需通過一個釋放過程。而小分子藥物直接通過被動擴(kuò)散進(jìn)入細(xì)胞，然后直接發(fā)揮抗腫瘤作用。而通過Cur負(fù)載到PEG-DOX NPs 構(gòu)建聯(lián)合遞送系統(tǒng)PEG-DOX/Cur NPs 之后，由于DOX 和Cur的不同抗腫瘤機(jī)制[10,11,14]，二者在細(xì)胞內(nèi)實(shí)現(xiàn)共同釋放后實(shí)現(xiàn)了對腫瘤細(xì)胞的聯(lián)合殺傷，即顯示了比單獨(dú)藥物 (DOX-HCL 或Cur) 更強(qiáng)的細(xì)胞毒性。

由于文獻(xiàn)報道DOX在代謝過程中可誘導(dǎo)活性氧自由基(ROS)的產(chǎn)生。而ROS可通過線粒體依賴性的細(xì)胞凋亡信號轉(zhuǎn)導(dǎo)引起心肌細(xì)胞凋亡[10,11]。本文中DOX-HCL對正常H2C9心肌細(xì)胞造成了較強(qiáng)的細(xì)胞毒性。PEG-DOX NPs由于上段所述的不同于DOX-HCL的進(jìn)入細(xì)胞的機(jī)制，其顯示了相對較弱的細(xì)胞毒性。姜黃素作為天然的抗氧化藥物能夠很好清除體內(nèi)的ROS[15]。通過共負(fù)載DOX 和Cur在取得理想的抗腫瘤效果的同時，Cur通過其天然的抗氧化活性降低由DOX化療誘導(dǎo)產(chǎn)生的ROS水平，提高心肌細(xì)胞的生存率[16]。心肌細(xì)胞內(nèi)ROS含量的檢測進(jìn)一步驗(yàn)證了PEG-DOX/Cur NPs能夠降低心肌細(xì)胞內(nèi)ROS的水平，進(jìn)而降低對心肌細(xì)胞的毒性作用。

本課題制備的前藥納米粒系統(tǒng)PEG-DOX/Cur NPs在細(xì)胞水平上的研究結(jié)果表明，通過聯(lián)合治療實(shí)現(xiàn)了較理想的抗腫瘤效果的同時，也明顯的降低了由DOX引起的心肌毒性，實(shí)現(xiàn)了聯(lián)合治療的效益最大化。

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(編校：譚玲)

Construction of a co-delivery system based on doxorubicin prodrug nanoparticle and curcumin and its application in anti-tumor study

CHU Li-ping, LIU Jin-jian, YANG Cui-hong, Huang Fan, LIU Jian-feng and ZHANG Yu-minΔ

(Institute of Radiation Medicine, Chinese Academy of Medical Science and Peking Union Medical College, Tianjin 300192, China)

ObjectiveTo construct a joint delivery system by loading curcumin, acid sensitive adriamycin nanoparticles as the basis, as to improve the anti-tumor cell proliferation activity and simultaneously decrease the cardiotoxicity induced by doxorubicin.MethodsThe PEG-DOX conjugate was synthesized by schiff base reaction between the amino of doxorubicin and the aldehyde group of aldehyde functionalized polyethylene glycol, the hydrophobic curcumin was loaded by PEG-DOX conjugate through the hydrophobic interaction between curcumin and the core of PEG-DOX conjugate, and then the prodrug nanoparticle PEG-DOX/Cur NPs was obtained by nanoprecipitation technique. The structure of PEG-DOX conjugate was confirmed by1H NMR. The diameter and morphology of PEG-DOX/Cur NPs were detected by dynamic light scattering (DLS) and transmission electron microscope (TEM), and the DOX and Cur release kinetics under physiological and acidic condition were detected by reversed-phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC) method. The in vitro combined antitumor effects and the cardiotoxicity of PEG-DOX/Cur NPs were evaluated by MTT method. The reactive oxygen species (ROS) within the myocardial cells was estimated by 2′,7′-dichlorofluorescin diacetate (DCFH-DA) method.ResultsThe PEG-DOX/Cur NPs showed spherical structure with diameter of about 100 nm with a narrow PDI. The PEG-DOX/Cur NPs could release DOX and Cur, simultaneously. The MTT results showed that PEG-DOX/Cur NPs had the best cytotoxicity on H197 cells and the lowest cardiotoxicity on H2C9 cells. Compared with DOX and PEG-DOX/Cur NPs, H2C9 cells administrated by PEG-DOX/Cur NPs showed the lowest ROS level, which indicated that the lowest cardiac myocyte toxicity of PEG-DOX/Cur NPs may result from the ROS clearance function of curcumin.ConclusionThe co-delivery system of PEG-DOX/Cur NPs based on PEG-DOX conjugate and curcumin achieved the maximum of effectiveness, with desirable anti-tumor proliferation effect and significantly improved cardiac myocyte toxicity induced by DOX.

prodrug nanoparticle; doxorubicin; curcumin; combination therapy; cardiotoxicity

國家自然科學(xué)基金(81471727)；“協(xié)和青年基金資助”和“中央高?；究蒲袠I(yè)務(wù)費(fèi)專項(xiàng)資金資助”(3332015100)；北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院2015年度“協(xié)和新星”項(xiàng)目(1579)；中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射醫(yī)學(xué)研究所發(fā)展基金(1609)

褚麗萍，女，學(xué)士，副研究員，研究方向：細(xì)胞生物學(xué)，E-mail：chulp89@163.com；張玉民，男，通信作者，碩士，助理研究員，研究方向：功能納米藥物的構(gòu)建及其應(yīng)用，E-mail：zhangyumin21@sina.cn。

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1005-1678(2016)01-0012-05