孫永慧，劉　磊，王育紅，郎　悅

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 中醫(yī)藥研究院，哈爾濱 150040)

槲寄生總生物堿的提取工藝研究

孫永慧，劉磊，王育紅，郎悅

(黑龍江中醫(yī)藥大學(xué) 中醫(yī)藥研究院，哈爾濱 150040)

摘要：優(yōu)選提取槲寄生中總生物堿的最佳提取工藝.以離子交換樹脂法提取，采用正交試驗，以槲寄生中總生物堿的收得量為考察指標(biāo)，優(yōu)化總生物堿的提取工藝.結(jié)果表明，最佳提取工藝為鹽酸滲漉液質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%，滲漉液的用量是藥材的15倍，離子交換樹脂的用量是藥材的0.5倍，氨水用量是150 mL/mg藥材.該提取工藝可以有效地提取出槲寄生中的生物堿，提取工藝合理、高效、經(jīng)濟(jì).

關(guān)鍵詞：槲寄生總生物堿；提取工藝；離子交換樹脂；正交試驗

槲寄生是桑寄生科(Lorantheceae)槲寄生屬(Viscum)植物，藥用部位是干燥帶葉莖枝.槲寄生始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品，具有祛風(fēng)濕、強筋骨、補肝腎、安胎元的功效，用于風(fēng)濕痹痛，筋骨無力，崩漏經(jīng)多，妊娠漏血，腰膝酸軟，胎動不安，頭暈?zāi)垦５劝Y.據(jù)文獻(xiàn)報道，槲寄生總生物堿抗腫瘤活性很強[1]，對其進(jìn)行提取工藝研究具有重要意義.本實驗采用離子交換樹脂法，利用正交試驗設(shè)計，以總生物堿收得量為考察指標(biāo)，優(yōu)選槲寄生總生物堿最佳的提取工藝條件.

1儀器與試藥

1.1實驗材料

槲寄生(哈爾濱順合大藥房有限公司)；強酸型陽離子交換樹脂(天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所，型號：001*7(732))；硫酸阿托品對照品(中國藥品生物制品檢定所，批號：100040 -201310)；其他試劑均為分析級.

1.2實驗儀器

756-PC紫外可見分光光度計(上海光譜儀器有限公司)；METTLER TOLEDO AG135電子天平(梅特勒- 托利多儀器有限公司).

2方法與結(jié)果

2.1提取工藝

2.1.1提取工藝正交實驗設(shè)計[2]

通過預(yù)試驗，發(fā)現(xiàn)影響藥材提取的因素主要有鹽酸滲漉液質(zhì)量分?jǐn)?shù)(A)、滲漉液用量(B)、陽離子樹脂用量(C)、樹脂堿化氨水用量(D).分別選取了三個水平，采取了梯度設(shè)計，正交試驗因素水平表見表1.

表1　正交試驗因素水平表

2.1.2實驗方法

槲寄生藥材粗粉20 g，鹽酸水溶液浸漬1 h，滲漉，滲漉液經(jīng)陽離子交換樹脂交換，氨水堿化，以二氯甲烷索氏提取，回收二氯甲烷至干，干燥得槲寄生總生物堿.粗總生物堿用酸性染料染色法[3]進(jìn)行含量測定.采用正交試驗法，按L9(34)表(見表2)正交試驗設(shè)計提取方案，以槲寄生生物堿收得量為考察指標(biāo)，優(yōu)選最佳提取工藝條件.

2.2含量測定

2.2.1樣品溶液的制備

取各組所得槲寄生總生物堿，加無水乙醇適量使溶解，定容至10 mL量瓶中，即得.

2.2.2對照品溶液的配制

精密稱取硫酸阿托品對照品適量，置50 mL量瓶中，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，得質(zhì)量濃度為0.29 mg/mL的對照品溶液.

2.2.3溴甲酚綠溶液的配制

精密稱取鄰苯二甲酸氫鉀1.021 g、溴甲酚綠50 mg，放入100 mL量瓶中，加入0.2 mol/L的NaOH溶液6.0 mL，振搖，溶解，加蒸餾水定容至刻度，搖勻，備用.

2.2.4測定方法

精密量取待測溶液各1 mL，置于分液漏斗中，精密加二氯甲烷10 mL，再精密加入溴甲酚綠溶液2 mL，振搖提取，分取二氯甲烷層，在420 nm處檢測吸收度.

2.3方法學(xué)考察

2.3.1線性關(guān)系考察

分別精密吸取對照品溶液1、2、3、4、5、6、7 mL，放入10 mL量瓶中，蒸餾水定容，取1 mL按2.2.4項下方法測定.以對照品質(zhì)量濃度(C)為橫坐標(biāo)，縱坐標(biāo)為吸光度(A)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到回歸方程：A= 2.725 4C+ 0. 009 4(R2= 0. 999 0)，表明硫酸阿托品質(zhì)量濃度在0.029～0.203 mg/mL的范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系.

2.3.2精密度試驗

取質(zhì)量濃度為0.116 mg/mL的對照品溶液，按2.2.4項下方法重復(fù)測定5次，RSD值為0.73%，結(jié)果顯示精密度良好.

2.3.3穩(wěn)定性試驗

取質(zhì)量濃度為0.116 mg/mL的對照品溶液，按2.2.4項下方法操作，在0、l、2、3、4、5 h分別測定其吸光度.RSD值為1.12%，表明樣品在5 h內(nèi)穩(wěn)定性良好.

2.3.4重現(xiàn)性試驗

分別取同一批供試品溶液5份，按2.2.4項下方法測定，總生物堿的平均得量為4.703 0 mg，RSD值為0.87%，表明重現(xiàn)性良好.

表2　正交試驗方案及結(jié)果

2.3.5加樣回收率試驗

取重現(xiàn)性試驗項下同一批供試品6份，每份

0.5 mL，分別精密加入對照品0.23 mg，按2.2.4項下方法操作，測定，平均回收率為97. 39%，RSD值為1.31 %.

2.4結(jié)果及分析

2.4.1實驗結(jié)果

見表2.

2.4.2結(jié)果分析

直觀分析結(jié)果表明，極差RA>RD>RC>RB，說明酸水滲漉液質(zhì)量分?jǐn)?shù)對提取槲寄生總生物堿的影響最大，其次是樹脂堿化氨水的用量，影響最小的是滲漉液的用量.因此把影響最小的因素(滲漉液的用量)作為誤差項，進(jìn)行方差分析，結(jié)果見表3所示.

表3　綜合評分方差分析

注：F0.05(2，2)=19.00，F(xiàn)0.01(2，2)=99.00

方差分析結(jié)果表明：酸滲漉液質(zhì)量分?jǐn)?shù)和堿化氨水的用量為關(guān)鍵因素，對總生物堿的得率有顯著影響，陽離子樹脂用量無顯著影響.

綜上所述，陽離子交換樹脂法提取槲寄生生物堿的最佳工藝為A2B1C1D3，即藥材經(jīng)15倍量的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.2%鹽酸溶液滲漉，滲漉液過0.5倍量的陽離子交換樹脂，交換過的樹脂用150 mL/mg的氨水堿化，再用二氯甲烷進(jìn)行索氏提取，即得.

3討論

3.1測定波長的選擇

分別取對照品溶液、供試品溶液，在200～700 nm掃描，二者顯色后在420 nm 處均呈現(xiàn)最大吸收，且不受供試品溶液、溴甲酚綠溶液干擾，因而選擇測定波長為420 nm.

3.2生物堿的提取

本研究采用酸水浸漬后滲漉，再用離子交換樹脂法富集，堿化后索氏提取，制得總生物堿.該法得到的生物堿純度較高，有機溶劑用量少，工藝簡單易行，可作為槲寄生總生物堿的提取工藝.

參考文獻(xiàn)：

[1]彭海燕, 章永紅, 韓英, 等. 槲寄生堿抗腫瘤作用的研究[J]. 中國中藥雜志, 2005, 30 (5): 381.

[2]王震, 常金花, 劉翠哲. 離子交換樹脂法提取野罌粟中總生物堿的工藝優(yōu)化[J]. 承德醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2010, 27(1): 14-15.

[3]孫永慧, 凌勇, 張嵩, 等. 不同寄主紅果槲寄生中總生物堿的含量測定[J]. 中醫(yī)藥信息, 2009, 26(3): 15-16.

Study on extraction process of total Alkaloids from Viscum coloratum (Kom.) Nakai

SUN Yong-hui, LIU Lei, WANG Yu-hong, LANG Yue

(Academy of Chinese Medicine, Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, Harbin 150040, China)

Abstract：To optimize the optimal extraction process with ion exchange resin for total alkaloids from Viscum coloratum (Kom.) Nakai. The ion exchange resin was used to extract. An orthogonal test was adopted in this paper. Four main factors were optimized, with the extraction efficiency of total alkaloids of Viscum coloratum as markers, and the L9 (3)4 orthogonal test table was used to arrange sequent experiments. Results indicated that the best extraction technology was as follows: 2% acid percolation fluids, 15 times amount of acid percolation fluids of medicinal materials, 0.5 times amount of ion exchange resin of medicinal materials, 150 mL ammonium chlorides every 1 mg medicinal materials. The optimized extraction process can extract the alkaloids from Visum coloratum (Kom.)Nakai, and the extraction is reasonable, efficient and economic.

Key words：total alkaloids of Viscum coloratum (Kom.) Nakai; extraction process; ion exchange resin; orthogonal test

收稿日期：2015-07-01.

基金項目：黑龍江省教育廳科學(xué)技術(shù)研究項目(12531635)

作者簡介：孫永慧(1974-)，女，博士，副研究員，研究方向：中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ).

中圖分類號：R284

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1672-0946(2016)03-0261-02