萬(wàn)進(jìn)軍　潘朝旺

【摘要】目的：觀察金蕎麥藥酒對(duì)膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠模型血清和滑膜細(xì)胞IL-22、IL-18、TNF-α的影響。方法：將Wistar大鼠隨機(jī)分成6組，空白組、模型對(duì)照組、金蕎麥高劑量組、金蕎麥中劑量組、金蕎麥低劑量組、雷公藤多苷組，建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎大鼠模型，檢測(cè)血清和滑膜細(xì)胞IL-22、IL-18、TNF-α的含量。結(jié)果：與空白組比較，模型對(duì)照組血清和滑膜細(xì)胞IL-22、IL-18、TNF-α明顯升高；與模型組比較，各給藥組的上述指標(biāo)均得到改善。結(jié)論：金蕎麥藥酒治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的機(jī)制可能與降低IL-22、IL-18、TNF-α有關(guān)。

【關(guān)鍵詞】金蕎麥藥酒；膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎；白細(xì)胞介素-22；白細(xì)胞介素-18；腫瘤壞死因子-α

【中圖分類(lèi)號(hào)】R2855【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A【文章編號(hào)】1007-8517（2016）10-0016-02

Abstract：Objective To observe the influence of fagopyrum dibotrys medicinal liquor on IL-22，IL-18 and TNF-αof collagen-induced arthritis model rats.Methods 60 wistar rats were divided into 6 groups at random：blank group， model group，high dose fagopyrum dibotrys group， low dose fagopyrum dibotrys group，and glucosidorum tripterygll totorum group. The rat model of Ⅱ collagen-induced arthritis （CIA） was established. The IL-22，IL-18，TNF-α of the serum and synoviocytes were determined. Results The serum and synoviocytes IL-22，IL-18，TNF-α were increased，compared with blank group. The above index were ameliorated in treatment groups.Conclusion The mechanism of fagopyrum dibotrys medicinal liquor for rheumatoid arthritis maybe related to adjust IL-22，IL-18，TNF-α.

Keywords：fagopyrum dibotrys medicinal liquor；collagen-induced arthritis；IL-22；IL-18；TNF-α

金蕎麥別名苦蕎麥、蕎麥當(dāng)歸、蕎麥三七、金鎖銀開(kāi)、賊骨頭、鐵拳頭、土茯苓等；其性涼，味辛、苦，具有清熱解毒、活血化瘀、健脾利濕的作用。金蕎麥藥酒在民間用于治療類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎（RA）效果明顯，課題組前期研究也證明金蕎麥藥酒具有明顯的鎮(zhèn)痛抗炎作用[1]，但尚未見(jiàn)關(guān)于抗RA作用的研究。實(shí)驗(yàn)旨在研究金蕎麥藥酒對(duì)Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型（CIA）大鼠血清和滑膜細(xì)胞IL-22、IL-18、TNF-α的影響，探討其抗RA免疫作用機(jī)制，為金蕎麥應(yīng)用于RA提供理論依據(jù)。

1儀器與材料

11藥物雷公藤多苷片（批號(hào)：20131114，浙江得恩德制藥有限公司）；金蕎麥藥酒，以金蕎麥根莖及塊根計(jì)，每毫升藥酒相當(dāng)于04g原藥材，本院自制。

12動(dòng)物Wistar大鼠60只，體重（200±20）g，SPF級(jí)，雌雄各半，合格證號(hào)：SCXK（鄂）2011-0012，由三峽大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

13試劑完全弗氏佐劑（FCA）、雞Ⅱ型膠原（CⅡ）由sigma 公司提供；白細(xì)胞介素-22（IL-22）、白細(xì)胞介素-18（IL-18）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）測(cè)定試劑盒由上海酶聯(lián)生物科技有限公司提供。

14儀器UV754紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)（上海佑科儀器儀表有限公司）；臺(tái)式冷凍離心機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器公司）。

2方法

21動(dòng)物造模及分組給藥隨機(jī)抽取10只大鼠，為空白組，其余50只建立Ⅱ型膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎模型[2-3]。用02%醋酸將CⅡ溶解，使其濃度為2mg/ml，放置過(guò)夜（4℃條件下），與FCA按1∶1比例混合，在冰浴中乳化，得到CⅡ乳劑，對(duì)每只大鼠右后肢足趾、背部及尾根部3點(diǎn)皮內(nèi)共注射04ml，在相同部位3點(diǎn)對(duì)空白組注射生理鹽水01ml。所有造模大鼠7d后加強(qiáng)免疫1次，即按原方法注射CⅡ乳劑02ml。將造模大鼠隨機(jī)分為5組，即模型對(duì)照組、金蕎麥高劑量組、金蕎麥中劑量組、金蕎麥低劑量組、雷公藤多苷組?？瞻捉M，模型對(duì)照組于造模后給予生理鹽水15ml/（kg·d），雷公藤多苷組給予雷公藤多苷片003g/（kg·d），金蕎麥高、中、低劑量組分別給予金蕎麥藥酒540、270、135ml /（kg·d），相當(dāng)于原生藥216、108、054g/（kg·d），連續(xù)給藥21d。

22血清TNF-α、IL-22、IL-18的測(cè)定末次給藥2h后，將大鼠用3%戊巴比妥鈉40mg/kg腹腔注射麻醉，固定，腹總動(dòng)脈取血，離心，制備血清，按試劑盒說(shuō)明測(cè)定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。

23滑膜細(xì)胞TNF-α、IL-22、IL-18的測(cè)定取大鼠后肢右膝關(guān)節(jié)，分離出滑膜，剪碎，用生理鹽水1∶20勻漿，按試劑盒說(shuō)明測(cè)定血清中IL-22、IL-18、TNF-α含量。

24統(tǒng)計(jì)學(xué)處理數(shù)據(jù)采用SPSS 170軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)處理，數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用用t檢驗(yàn)，P<005表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3結(jié)果

31對(duì)血清TNF-α、IL-22、IL-18的影響與空白組比較，模型對(duì)照組小鼠血清TNF-α、IL-22、IL-18含量升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<001）；雷公藤多苷組和金蕎麥藥酒各劑量組與模型組相比，血清TNF-α、IL-22、IL-18含量降低，除低劑量組IL-22無(wú)明顯差異外，其他組別和指標(biāo)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<005或P<001）。見(jiàn)表1。

3討論

RA是一種以關(guān)節(jié)滑膜炎癥為主要表現(xiàn)的自身免疫性疾病。研究表明，NK細(xì)胞在RA發(fā)病過(guò)程中發(fā)揮重要作用[4]，NK-22細(xì)胞是不同表型的NK細(xì)胞之一，RA患者血液和滑液中NK-22細(xì)胞明顯高于正常人[5]。IL-22是NK-22細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子之一，能促進(jìn)類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎成纖維樣滑膜細(xì)胞增殖，是促成纖維樣滑膜細(xì)胞增生的細(xì)胞因子[6]，在RA的病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。IL-18作為一種新型IL家族促炎細(xì)胞因子，主要與IL-18受體結(jié)合發(fā)揮效應(yīng)。實(shí)驗(yàn)表明，RA患者血清IL-18明顯升高，其水平與病情呈正相關(guān)[7]，提示IL-18參與RA病情的活動(dòng)，其作用與促進(jìn)T細(xì)胞增殖和NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，誘導(dǎo)以Th1細(xì)胞為主的細(xì)胞免疫反應(yīng)，使病變組織 Th1/Th2比例失衡有關(guān)[8]。TNF-α是一種免疫調(diào)節(jié)和前炎性因子，在病變關(guān)節(jié)中可促進(jìn)前列腺素E2（PGE2）等多種炎癥介質(zhì)釋放，引起關(guān)節(jié)軟骨的吸收破壞，促進(jìn)成纖維細(xì)胞的增生；且TNF-α常與IL-1β一起合成與釋放，是致病機(jī)制中一對(duì)重要的促炎癥細(xì)胞因子，參與了RA發(fā)生、發(fā)展的全過(guò)程。

在RA患者病變關(guān)節(jié)滑膜內(nèi)，巨噬細(xì)胞數(shù)量明顯增多，其不僅與關(guān)節(jié)疼痛數(shù)、壓痛數(shù)、血沉、C 反應(yīng)蛋白等反應(yīng)RA病情程度的指標(biāo)呈明顯的正相關(guān)，還與X線(xiàn)關(guān)節(jié)破壞的侵蝕積分和狹窄積分呈明顯的正相關(guān)[9]，可能與其釋放IL-22、IL-18、TNF-α等炎性因子有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，金蕎麥藥酒對(duì)CIA大鼠免疫功能有明顯影響，可降低血清和滑膜細(xì)胞IL-22、IL-18、TNF-α含量，這些可能是其治RA的作用機(jī)制之一。

參考文獻(xiàn)

[1] 程友斌，潘洪林. 金蕎麥抗炎活性部位篩選研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2009，20（9）：2219-2220.

[2] 徐琦，尹抗抗，譚達(dá)全，等.麻黃加術(shù)湯對(duì)大鼠類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型作用機(jī)制的研究[J].湖南中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2011，31（5）：13-15.

[3] 馬艷苗，王永輝，李艷彥，等. 風(fēng)濕寧膠囊對(duì)膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎大鼠滑膜細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)及細(xì)胞凋亡相關(guān)基因表達(dá)的影響[J].中醫(yī)雜志，2013，54（4）：326-328.

[4] Ahern DJ，Brennan FM. The role of Natural Killer cells in the pathogenesis of rheumatoid arthritis： major contributors or essential homeostatic modulators [J]. Immunol Lett，2011，136（2）：115-121.

[5] Ren J，F(xiàn)eng Z，Lv Z，et al. Natural killer-22 cells in the synovial fluid of patients with rheumatoid arthritis are an innate source ofinterleukin 22 and tumor necrosis factor-α[J].J Rheumatol，2011，38（10）：2112-2118.

[6] 任潔，周毅，吳會(huì)霞，等. NK-22細(xì)胞及IL-22相關(guān)功能分子在類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎滑膜細(xì)胞增殖中的作用[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2014，34（1）：20-24.

[7] 任敏，武加標(biāo)，湯麗，等. 類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血單核細(xì)胞TLR4的表達(dá)與血清IL-18水平變化的相關(guān)性研究[J].中華臨床免疫和變態(tài)反應(yīng)雜志，2013， （1）：22-26.

[8] Pay S，Erdem H，Pekel A，et al.Synovial proinflammatory cytokines and their correlationw ithmatrix metalloprote inase-3 expression in Behcets′ disease Does interleuk in-1 beta play a major role in Behcets′ synovitis [J]. Rheumatol， 2006， 26（7）：608-613.

[9] 戴冽，湯美安，尹培達(dá)，等. 滑膜巨噬細(xì)胞與類(lèi)風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎病情活動(dòng)及關(guān)節(jié)破壞的相關(guān)性[J].中華風(fēng)濕病學(xué)雜志，1999，3（4）：229-231.

（收稿日期：20160327）