張永琦　王　敏　朱艷麗　史　聰　閆效宇　卓玉蓮

110004 中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院

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OCT4及BIM蛋白在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及其相關(guān)性研究

張永琦王敏朱艷麗史聰閆效宇卓玉蓮

110004 中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院

【摘要】目的研究OCT4及Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)及其相關(guān)性，并探討兩者在化療耐藥中的影響。方法采用免疫組化sp法，對67例卵巢漿液性囊腺癌(化療耐藥30例，敏感37例)、卵巢漿液性囊腺瘤石蠟標(biāo)本10例、卵巢交界性漿液性囊腺瘤者石蠟標(biāo)本10例及正常卵巢組織石蠟標(biāo)本10例，進(jìn)行OCT4及Bim蛋白表達(dá)情況檢測。結(jié)果OCT4蛋白陽性表達(dá)率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞減，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組陽性表達(dá)率分別為83.33%和45.95%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)。Bim蛋白陽性表達(dá)率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞增，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組陽性表達(dá)率分別為43.33%和70.27%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.026)。在化療耐藥卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)無明顯相關(guān)性(γ=0.03;P=0.875)；在化療敏感卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)亦無明顯相關(guān)性(γ=0.006;P=0.97)。OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)與卵巢漿液性癌的發(fā)展呈負(fù)相關(guān)(P<0.01)。OCT4蛋白與Bim蛋白與卵巢漿液性癌臨床病理因素?zé)o關(guān)。結(jié)論OCT4及Bim蛋白與卵巢漿液性癌的發(fā)生與發(fā)展有關(guān).OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)在卵巢漿液性癌的發(fā)展呈負(fù)相關(guān)。OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相互作用。OCT4基因高表達(dá)，Bim基因低表達(dá)可能是造成卵巢漿液性癌對紫杉醇+鉑類化療耐藥的因素之一。

【關(guān)鍵詞】OCT4;Bim;免疫組化；卵巢癌;化療;耐藥;敏感

(ThePracticalJournalofCancer,2016,31:723～726)

卵巢癌是婦科常見的惡性腫瘤,死亡率居婦科惡性腫瘤之首?；熓侵委熉殉舶┲匾侄沃?患者在預(yù)后方面主要取決于對化療的敏感性。但是由于原發(fā)性與繼發(fā)性耐藥的關(guān)系，化療耐藥是成為卵巢癌治愈率的關(guān)鍵因素。

OCT4是1種全能性或多能性干細(xì)胞標(biāo)記物，與多種腫瘤的形成與發(fā)展及化療耐藥相關(guān)。相關(guān)研究表明，在卵巢癌的發(fā)展機(jī)制中OCT4基因是一影響因素。Bim是Bel-2家族中僅含有一個BH3結(jié)構(gòu)域的蛋白，廣泛分布在機(jī)體各種組織，對防御自身免疫、維持造血細(xì)胞穩(wěn)態(tài)有重要意義，并具有腫瘤抑制因子活性[1]近年研究發(fā)現(xiàn)，OCT4基因在多種惡性上皮性腫瘤高表達(dá)，并與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后呈高度正相關(guān)[2-7]。Bim基因具有助凋亡活性，對防御自身免疫、維持造血細(xì)胞穩(wěn)態(tài)有重要意義，并具有腫瘤抑制因子活性。有研究顯示在Bim蛋白表達(dá)的改變促使多種癌癥的發(fā)生[8-9]。本研究采用免疫組織化學(xué)方法(S-P免疫組化法)，檢測OCT4、Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤中的表達(dá)，討論OCT4及Bim蛋白與卵巢漿液性腫瘤的發(fā)生與發(fā)展之間的關(guān)系。通過研究我們可以控制OCT4、Bim蛋白的表達(dá)情況，將對卵巢癌治療有重要意義。

1材料與方法

1.1資料來源

選擇于2004年1月至2010年10月期間在中國醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院婦科行卵巢癌分期術(shù)或腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)的卵巢漿液性囊腺癌初發(fā)患者手術(shù)的石蠟標(biāo)本共90例，經(jīng)病理學(xué)檢查確診、經(jīng)隨訪后，確定術(shù)后TP化療最少6次且化療期間未使用其它化療藥物或放療的患者，排除不符合條件者，術(shù)后單純行紫杉醇+鉑類方案化療最少6次者為67例，23例不符合條件排除。67例患者根據(jù)2011年版美國NCCN分為化療敏感組37例，化療耐藥組30例。同時選取卵巢漿液性囊腺瘤石蠟標(biāo)本10例、卵巢交界性漿液性囊腺瘤者石蠟標(biāo)本10例及正常卵巢組織石蠟標(biāo)本10例。入選的患者年齡、 腫瘤大小、 位置差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

1.2試劑和儀器

兔抗人OCT4多克隆抗體、兔抗人AKT1多克隆抗體 (北京博奧森生物) ； SP免疫組化檢測試劑盒及DAB顯色試劑盒 (北京中杉金橋) ； PBS緩沖液 (武漢博士得) ； 其他試劑及儀器由本院中心實(shí)驗(yàn)室提供。

1.3方法

采用免疫組化SP法，嚴(yán)格按照SP試劑盒說明書進(jìn)行。每批實(shí)驗(yàn)中均按比例選擇每組切片，每批均設(shè)對照組。用PBS代替一抗作為陰性對照。DAB 顯色后用蘇木精復(fù)染，中性樹膠封固后鏡檢。

1.4判斷標(biāo)準(zhǔn)

OCT4蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。Bim蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)內(nèi)。以出現(xiàn)棕黃色或棕褐色顆粒為陽性染色。按半定量積分法判斷蛋白表達(dá)。按染色強(qiáng)度評分： 0分為無色，1分為淡黃色，2分為棕黃色，3分為棕褐色。根據(jù)陽性細(xì)胞百分率評分： 0分為無陽性細(xì)胞，1分為陽性細(xì)胞數(shù)≤10%，2分為陽性細(xì)胞數(shù)>10%～50%，3分為>50%～75%，4分為>75%。上述兩項(xiàng)評分≤3為陰性，>3為陽性。

1.5統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計，采用χ2檢驗(yàn)、 Spearman 等級相關(guān)分析。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1不同卵巢組織中OCT4蛋白和Bim蛋白的表達(dá)情況

OCT4蛋白陽性表達(dá)率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞減，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組其陽性表達(dá)率分別為83.33%和45.95%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)。Bim蛋白陽性表達(dá)率在惡性、交界性、良性、正常組織中依次遞增，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.002)；在耐藥組與敏感組其陽性表達(dá)率分別為40.33%和70.27%,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.026)，見表1。OCT4與Bim蛋白在正常卵巢、漿液性囊腺瘤、交界性漿液性囊瘤、漿液性囊腺癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)性(γ=-1.7，P<0.05)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1　不同卵巢組織中OCT4蛋白和Bim蛋白的

2.2OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性腺癌化療耐藥和化療敏感組織中的相關(guān)性

對耐藥組與敏感組免疫組織化學(xué)結(jié)果進(jìn)行半定量分析積分，繪制出OCT4與Bim蛋白之間的散點(diǎn)圖,并進(jìn)行 Spearman 等級相關(guān)分析，兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，在化療耐藥卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)無明顯相關(guān)性(γ=0.03;P=0.875)；在化療敏感卵巢漿液性癌中，OCT4蛋白與Bim蛋白表達(dá)亦無明顯相關(guān)性(γ=0.006;P=0.97)，見圖1～3。

2.3OCT4蛋白和Bim蛋白與卵巢漿液性腺癌臨床病理特征的關(guān)系

OCT4蛋白與Bim蛋白在卵巢漿液性腺癌的臨床病理特征無明顯相關(guān) (P>0.05)，見表2。

表2　OCT4及Bim 蛋白與卵巢漿液性癌臨床病理學(xué)特征的關(guān)系/例

圖1　OCT4、Bim蛋白在正常卵巢、漿液性囊腺瘤、交界性漿

圖2　OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性癌化療

3討論

OCT4是1種全能或多能性干細(xì)胞標(biāo)記物，屬于V

圖3　OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性癌化療

類蛋白。OCT4 蛋白定位于胚胎細(xì)胞和胚泡的細(xì)胞核內(nèi)，在維持干細(xì)胞的多能性以及自我更新能力上起到重要作用[10]。研究表明，OCT4具有雙重調(diào)節(jié)作用，既能維持干細(xì)胞的未分化狀態(tài)，又能控制干細(xì)胞向某一種細(xì)胞類型分化。OCT4是1種全能性或多能性干細(xì)胞標(biāo)記物，與多種腫瘤的形成與發(fā)展及化療耐藥相關(guān)。OCT4促進(jìn)癌細(xì)胞生長、增值的機(jī)制可能是通過激活PI3K通路完成的[11]。PI3K通調(diào)控腫瘤生長的關(guān)鍵分子[12]。Bim 是1種重要的凋亡調(diào)節(jié)蛋白,在造血細(xì)胞的內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定、 防止自身免疫及腫瘤的發(fā)生中有著重要的作用。一定的凋亡刺激能通過各種信號途徑激活Bim分子,活化的 Bim 分子通過與 Bcl-2/Bax 的相互作用激活 Bax,引起細(xì)胞凋亡[13-15].Bim蛋白是PI3K/AKT信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中最重要的蛋白。AKT分子包含pH結(jié)構(gòu)域、 中心催化結(jié)構(gòu)域和羧基端調(diào)AKT1是AKT的亞型之一，定位于染色體14q32，具有廣泛組織分布性，能在胚胎發(fā)育和生長方面起決定性作用[16]。激活的AKT能對其下游多種底物進(jìn)行調(diào)控，主要發(fā)揮抑制凋亡的作用，進(jìn)而促進(jìn)耐藥性的產(chǎn)生[17]。近年研究的表明，它在血管再生、 新陳代謝、 腫瘤遷移中的作用逐步被發(fā)現(xiàn)[18]。

本研究發(fā)現(xiàn)OCT4基因?yàn)榘┗?，Bim基因?yàn)橐职┗?。OCT4與Bim蛋白在卵巢漿液性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中成負(fù)相關(guān)。說明在OCT4與Bim蛋白表達(dá)通路上，存在某一基因共同調(diào)節(jié)它們的表達(dá)。為臨床預(yù)測和防止腫瘤的發(fā)生提供依據(jù)。OCT4基因高表達(dá)，Bim基因低表達(dá)可能是造成卵巢漿液性癌對紫杉醇+鉑類化療耐藥的因素之一，為臨床耐藥性提供預(yù)測指標(biāo)。

參考文獻(xiàn)

[1]O ’REILLY LA,CULLEN L,VISVADER J,et al.The proapoptotic BH3-only protein Bim is expressed in hematopoietic,epithelial,neuronal,and germ cells〔J〕.Am J Path,2000,157(2):449-461.

[2]張如楠，楊留勤，高國偉.OCT4在食管鱗癌組織中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國醫(yī)學(xué)工程，2012，20(5):82-84.

[3]Gu G,Yuan J,Wills M,et al.Prostate cancer cells with stem celcharacteristics reconstitute the original human tumor in vivo 〔J〕.Cancer Res,2007,67(10):4807-4815.

[4]邱江鋒，張志奇，尤俊，等.胃 癌組織中Oct4表達(dá)及其臨床病理意義的探討〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2011，18(5):342-344.

[5]Chen Z,Xu W R,Qian H,et al.Oct4,a novel marker for human gas-tric cancer〔J〕.J Surg Oncol,2009,99(7):414-419.

[6]萬鋒，王艷波，朱朝輝，等.干細(xì)胞關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Oct4在人膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義〔J〕.中華實(shí)驗(yàn)外科雜志，2011，28(3):452-454.

[7]周家鵬，周建平，舒國順，等.直 腸腺癌 PSCA，OCT4，CD24 和CD44v6表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國普通外科雜志，2010，19(7):774-778.

[8]Jiang Z,Zheng X,Lytle RA,et al.Lovastatin-induced up-regulation of the BH3-only protein,Bim,and cell death in glioblastoma cells〔J〕.J Neurochem,2004,89(1):168-178.

[9]Sunters A,Fernandez de Mattos S,Stahl M,et al.FoxO3a transcriptional regulation of Bim controls apoptosis in paclitaxel-treated breast cancer cell lines〔J〕.J Biol Chem，2003,278(50):49795-49805.

[10]Lee J,Kim HK,Rho JY,et al.The human OCT4 isforms differ in their ability to confer self-renewal〔J〕.J Biol Chem,2006,281(44):33554-33565.

[11]雷曉芬，閆磊，司靜琦.轉(zhuǎn)錄因子 Oct-4 在肺癌中的表達(dá)及對其生長、 增殖的影響〔J〕.臨床軍醫(yī)雜志，2014,42(5)：454-457.

[12]Sadeghi N,Gerber DE.Targeting the PI3K pathway for cancer therapy〔J〕.Future Med Chem,2012,4(9):1153-1169.

[13]殷香保.纖維蛋白膠的臨床應(yīng)用進(jìn)展〔J〕.嶺南現(xiàn)代臨床外科,2003,3(1):67-69.

[14]李征.纖維蛋白膠的作用原理和臨床應(yīng)用及不良反應(yīng)〔J〕.華西藥學(xué)雜志,1999,14(1):34-36.

[15]趙艷，王睿.Bim蛋白在乳腺癌中的表達(dá)及其臨床意義〔J〕.中國醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2008,2(37)：267-273.

[16]Dummeler B，Hemmings BA.Physiological roles of PKB /Aktisoforms in development and disease〔J〕.Biochem Soc Trans，2007,35(2):231-233.

[17]趙學(xué)芹，黃憲章.Akt/PKB 信號通路調(diào)控機(jī)制的研究進(jìn)展〔J〕.廣東醫(yī)學(xué)，2009,30(12):1920-1922.

[18]Manning BD，Cantley LC.AKT/PKB Signaling:navigating downstream〔J〕.Cell，2007,129(7):1261-1274.

(編輯：吳小紅)

Studying of the Expression of OCT4 and BIM Protein in Ovarian Cancer and Their Correlation

ZHANGYongqi,WANGMin,ZHUYanli,etal.

ShengjingHospitalofChinaMedicalUniversity,Shenyang,110004

【Abstract】ObjectiveTo study the expression of the OCT4 and BIM protein in ovarian cancer and their relation，and to explore its effect on the chemotherapy drug resistance.MethodsOCT4 and BIM protein expression of 67 cases of ovarian serous cystadenocarcinoma(chemotherapy drug resistance 30 cases,sensitive 37 cases)and 10 cases of ovarian serous cystic adenoma paraffin specimens,10 cases of ovarian serous border pouch adenoma paraffin specimens and 10 cases of normal ovarian tissue paraffin specimens were det ected.ResultsThe positive expression rate of OCT4 protein decreased progressively in ovarian serous tumors,the junction of ovarian serous tumors,benign ovarian tissues,and normal ovarian tissues,the difference was statistically significant(P=0.002);The positive expression rates of OCT4 protein in the resistant group and sensitive group were 83.33% and 45.95%,respectively,the difference was statistically significant(P=0.002).The positive expression rate of BIM protein increased progressively in ovarian serous tumors,the junction of ovarian serous tumors,benign ovarian tissues,and normal ovarian tissues,the difference was statistically significant(P=0.002).In the resistant group and sensitive group,the positive expression rate of BIM protein were 43.33% and 70.27%,respectively,the difference was statistically significant(P=0.026).In the chemotherapy drug-resistant ovarian serous carcinoma,OCT4 protein expression had no significant correlation with Bim protein expression(γ=0.03;P=0.875);In chemotherapy sensitive ovarian serous carcinoma,OCT4 protein expression and Bim protein expression had no obvious correlation(γ=0.006;P=0.97).OCT4 protein expression and Bim protein expression in ovarian serous carcinoma had negative correlation(P<0.01).OCT4 and Bim protein expression had no correlation with clinical factors.ConclusionOCT4 and BIM protein expression are associated with the occurrence and development of ovarian serous carcinoma.Bim and OCT4 protein expression are negatively correlated with the development of ovarian serous carcinoma.OCT4 and Bim protein expression are interacted in ovarian serous tumor occurrence and development.High OCT4 gene expression and low Bim gene expression may be factor of resistance of ovarian serous carcinoma to paclitaxel plus platinum chemotherapy.

【Key words】OCT4;Bim;Immunohistochemical;Ovarian cancer;Chemotherapy;Drug resistance;Sensitive

DOI：10.3969/j.issn.1001-5930.2016.05.008

中圖分類號：R737.31

文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A

文章編號：1001-5930(2016)05-0723-04

(收稿日期2015-07-15修回日期 2016-01-05)