朱廣雙， 季慕寅， 蕭 晟， 王本忠， 張海燕

(蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，安徽蕪湖 241003)

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芩榆散的抑菌試驗(yàn)研究

朱廣雙， 季慕寅， 蕭 晟， 王本忠， 張海燕

(蕪湖職業(yè)技術(shù)學(xué)院生物工程學(xué)院，安徽蕪湖 241003)

摘要[目的]研究芩榆散防治畜禽腹瀉的機(jī)理。[方法]分組測(cè)定芩榆散及其各組方藥對(duì)豬大腸桿菌、雞大腸桿菌和雞沙門氏菌3種細(xì)菌的體外抑菌效果，測(cè)定芩榆散對(duì)3種細(xì)菌的最小抑菌濃度(MIC)。[結(jié)果]芩榆散對(duì)3種細(xì)菌的平均抑菌圈直徑為16.2～16.7 mm，方劑中的4味單方藥對(duì)3種細(xì)菌的平均抑菌圈直徑為8.4～9.6 mm，芩榆散對(duì)豬大腸桿菌、雞大腸桿菌、雞沙門氏菌的MIC均為7.8 mg/mL。[結(jié)論]芩榆散對(duì)3種細(xì)菌高度敏感，抑菌效果優(yōu)于其組方藥。

關(guān)鍵詞芩榆散；腹瀉；最小抑菌濃度；抑菌圈

大腸桿菌和沙門氏菌是引起畜禽腹瀉的主要病原菌[1-2]，其防治手段主要是使用抗菌化學(xué)藥物和抗生素，但耐藥性問題使其療效每況愈下。畜禽產(chǎn)品無公害化生產(chǎn)的要求，使抗生素的選擇范圍越來越小，而中藥治療效果受菌株耐藥性的影響較小，且毒副作用小，幾乎無殘留[3]，因此研究中藥防治大腸桿菌病、沙門氏菌病具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。目前，關(guān)于單藥的體外抑菌試驗(yàn)研究較多[4-7]，復(fù)方制劑黃連解毒散、白頭翁散等對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌等具有較好的治療作用[6]，鑒于上述2個(gè)方劑組方藥材較貴重，該試驗(yàn)選用黃芩、地榆、地錦草、老鸛草等價(jià)格低廉的中藥組方為芩榆散，測(cè)定了芩榆散對(duì)豬大腸桿菌、雞大腸桿菌和雞沙門氏菌的體外抑菌作用和最小抑菌濃度(MIC)，旨在研究芩榆散防治畜禽腹瀉的機(jī)理。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1培養(yǎng)基。普通營養(yǎng)肉湯、普通營養(yǎng)瓊脂按參考文獻(xiàn)[8]制備后，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.2中藥。芩榆散湯劑，由正大(蕪湖)有限公司提供，4 ℃保存?zhèn)溆?。芩榆散?味組方藥如黃芩、地錦草、老鸛草、地榆，用去離子水煎煮2次，合并煎液，紗布過濾，濾液加熱濃縮至含生藥2 g/mL，100 ℃滅菌30 min，4 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.1.3受試菌株。豬大腸桿菌(EscherichiacoliCVCC1521)、雞大腸桿菌(O1)C83845株、雞沙門氏菌(SalmonellagallinarumCVCC533)，均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。

1.2抑菌試驗(yàn)方法取豬大腸桿菌、雞大腸桿菌、雞沙門氏菌菌株分別接種于普通營養(yǎng)肉湯，37 ℃培養(yǎng)24 h復(fù)壯，經(jīng)預(yù)試驗(yàn)測(cè)定，稀釋倍數(shù)分別為豬大腸桿菌1 200倍、雞大腸桿菌700倍、雞沙門氏菌600倍，稀釋后，吸取200 μL于普通營養(yǎng)瓊脂平板內(nèi)，用“L”形涂布棒涂勻。用直徑6 mm的打孔器在平板上打孔，酒精燈加熱封底，孔內(nèi)注滿藥液，每種藥液重復(fù)6孔，對(duì)照孔注滿生理鹽水。37 ℃培養(yǎng)18 h后測(cè)量抑菌圈直徑，試驗(yàn)重復(fù)3次[8]，根據(jù)文獻(xiàn)[9]的標(biāo)準(zhǔn)判定各藥的抑菌作用，即抑菌圈直徑<10 mm為低敏，10～15 mm為中敏，15 mm以上為高敏。

1.3最小抑菌濃度(MIC)的測(cè)定先將復(fù)方湯劑用營養(yǎng)肉湯倍比稀釋成10種不同濃度，分別為2 000.0、1 000.0、500.0、250.0、125.0、62.5、31.3、15.7、7.8、3.9 mg/mL;然后分別按1∶9的比例加入到熔化的營養(yǎng)瓊脂中，100 ℃滅菌30 min，待溫度降至40～50 ℃時(shí)倒入滅菌平皿。平板凝固后放于37 ℃的恒溫箱干燥1 h，用劃線法接種各細(xì)菌種，37 ℃培養(yǎng)24 h后觀察平板上的菌落數(shù)，同時(shí)設(shè)不接種任何細(xì)菌作陰性對(duì)照，同種處理重復(fù)4次，以培養(yǎng)基內(nèi)無菌落生長的最低藥物濃度為最小抑菌濃度(MIC)。

2結(jié)果與分析

2.1抑菌效果由表1可見，芩榆散對(duì)豬大腸桿菌、雞大腸桿菌和雞沙門氏菌3種細(xì)菌的平均抑菌圈直徑為16.2～16.7 mm，差異不顯著(P﹥0.05)，屬高度敏感。芩榆散方劑中的4味單方藥對(duì)3種細(xì)菌的平均抑菌圈直徑為8.4～9.6 mm，屬低度敏感。芩榆散對(duì)3種細(xì)菌的平均抑菌圈直徑顯著大于方劑中單方藥對(duì)3種細(xì)菌的平均抑菌圈直徑，差異顯著(P<0.05)，各單方藥間差異不顯著(P>0.05)。

2.2最小抑菌濃度(MIC)從表2可看出，芩榆散對(duì)豬大腸桿菌、雞大腸桿菌和雞沙門氏菌的MIC均為7.8 mg/mL，差異不顯著(P>0.05)。

表1　芩榆散應(yīng)用于3種細(xì)菌的抑菌圈直徑

注：同列數(shù)據(jù)上標(biāo)不同字母表示處理間差異顯著(P<0.05)。

Note：Different letters in the same column stand for significant difference(P<0.05).

表2芩榆散對(duì)3種細(xì)菌的最小抑菌濃度

Table 2Minimum inhibitory concentration of Qinyu powder against three bacterias

mg/mL

注：同行數(shù)據(jù)上標(biāo)相同字母表示差異不顯著(P﹥0.05)。

Note：The same letters in the same column stand for no significant difference(P>0.05).

3討論與結(jié)論

按中獸醫(yī)辨證理論，大腸桿菌病為濕熱壅積腸道而引起的里熱癥，宜清熱解毒、燥濕止痢。方劑中黃芩[10]、地錦草[11]、老鸛草[12]和地榆[13]對(duì)大腸桿菌、痢疾桿菌和葡萄球菌等多種細(xì)菌均有較好的抑制效果。該試驗(yàn)結(jié)果表明，芩榆散對(duì)3種供試菌株均有較強(qiáng)的抑制作用，屬高度敏感，可能與其以清熱燥濕藥為主的組方有關(guān)。由各單味藥組成的方劑芩榆散抑菌效果顯著，平均抑菌圈直徑>16.2 mm，這與配伍后方劑中各單味藥物之間產(chǎn)生了協(xié)同作用，以及彼此間的溶出度、生物堿的相互影響等因素有關(guān)。芩榆散對(duì)豬大腸桿菌、雞大腸桿菌、雞沙門氏菌的MIC均為7.8 mg/mL，抑菌效果均較好，對(duì)3種細(xì)菌的抑菌效果差異不顯著。王建國等[14]研究也發(fā)現(xiàn)，由地錦草、黃芩、苦參、蒼術(shù)、陳皮組成的復(fù)方，不僅能降低雞的發(fā)病率，同時(shí)能減少死亡，對(duì)人工感染大腸桿菌雛雞具有顯著的保護(hù)作用。

傳統(tǒng)中藥是通過改善、調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞功能緩解細(xì)胞損傷，而非如抗生素一樣直接殺滅細(xì)菌，中國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，中藥的治療機(jī)理一方面是藥物直接抑制或殺滅病原體。王妮等[5]研究發(fā)現(xiàn)，由石榴皮、黃芩、紫蘇、丹皮、金銀花5味中草藥制備的提取物在使用劑量達(dá)1.0 mL/kg時(shí)，能夠直接抑制禽大腸桿菌，達(dá)到較好的治療效果。另一方面是中藥可調(diào)節(jié)機(jī)體陰陽平衡，提高機(jī)體免疫力和抵抗力，起到免疫調(diào)節(jié)作用，即所謂的扶正祛邪，最終達(dá)到疾病的康復(fù)[15]。香蓮芪中藥制劑能夠調(diào)動(dòng)機(jī)體免疫細(xì)胞，刺激脾淋巴細(xì)胞增殖，對(duì)抗大腸桿菌的入侵[6]。銀翹天甘制劑增強(qiáng)了動(dòng)物自體免疫防御系統(tǒng)，改善了動(dòng)物生理機(jī)能，進(jìn)而發(fā)揮抗病作用[7]。

總之，防治畜禽腹瀉的關(guān)鍵在于 “養(yǎng)大于防，防大于治”。一旦發(fā)生腹瀉，應(yīng)首先對(duì)分離的致病菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，再選擇對(duì)致病菌株敏感的藥物進(jìn)行治療。該試驗(yàn)中芩榆散對(duì)3種受試菌株均有較強(qiáng)抑菌效果，高度敏感，可能是該藥防治畜禽腹瀉的機(jī)制之一，并可以作為臨床畜禽腹瀉疾病用藥的依據(jù)。

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Study on Antibacterial Test of Qinyu Powder

ZHU Guang-shuang,JI Mu-yin,XIAO Sheng et al

(College of Bioengineering,Wuhu Institute of Technology,Wuhu,Anhui 241003)

Abstract[Objective] The mechanism of prevention and control of livestock and poultry diarrhea by Qinyu powder was studied.[Method] The antibacterial effect of Qinyu powder and its component drugs on swine Escherichia coli,chicken Escherichia coli and Salmonella gallinarum in vitro were determined,then the minimum inhibitory concentration(MIC) of Qinyu powder was measured.[Result] The average inhibition of Qinyu powder and its component drugs on 3 kinds of bacteria in diameter were between 16.2-16.7 mm,8.4-9.6 mm respectively.MIC of Qinyu powder on swine E.coli, chicken E.coli, Salmonella gallinarum was 7.8 mg /mL.[Conclusion] The antibacterial effect of Qinyu powder on 3 kinds of bacteria are highly sensitive,which was better than that of component drugs.

Key wordsQinyu powder; Diarrhea; Minimal inhibitory concentration; Bacteriostasis

基金項(xiàng)目安徽省質(zhì)量工程項(xiàng)目食品技術(shù)人才實(shí)訓(xùn)中心校企合作實(shí)踐教育基地項(xiàng)目(2013sjjd036)。

作者簡介朱廣雙(1975- )，男，安徽蕪湖人，講師，碩士，從事中獸醫(yī)學(xué)研究。

收稿日期2016-03-12

中圖分類號(hào)S 853.72

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

文章編號(hào)0517-6611(2016)10-166-02