余亮 熊員煥 馮翰

妊娠高血壓疾病與HLA-G，KIR相關(guān)性的分析

余亮 熊員煥 馮翰

目的 檢測妊娠高血壓疾患者者外周血KIRs水平和胎盤組織HLA-G的表達(dá)情況，進(jìn)一步探討KIRs在妊娠高血壓疾病發(fā)病中的免疫機(jī)制。方法 用20例妊娠高血壓疾病和20例正常妊娠產(chǎn)婦（對照組）采用免疫組化技術(shù)檢測胎盤組織HLA-G陽性率，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗（ELISA)檢測外周血血清KIRs水平，對比分析各指標(biāo)及其與妊娠高血壓疾病的關(guān)系。結(jié)果 （1）母體血清KIRs含量與妊娠高血壓疾病相關(guān)，并且隨著妊娠高血壓病情的加重母體血清KIRs含量增加；（2）孕婦胎盤組織中的HLA-G表達(dá)陽性率及表達(dá)強(qiáng)度與妊娠高血壓疾病相關(guān)，并且妊高癥組表達(dá)陽性率和表達(dá)強(qiáng)度隨病情加重而降低；（3）母體血清KIRs含量與胎盤組織中的HLA-G表達(dá)陽性率及表達(dá)強(qiáng)度相關(guān)。結(jié)論 外周血清KIRs可以反映妊娠高血壓綜合征病情，胎盤HLA-G的表達(dá)降低與妊娠高血壓疾病嚴(yán)重程度密切相關(guān)。

妊娠高血壓疾病；KIR；胎盤；HLA-G

妊娠期高血壓疾病為妊娠期特有疾病，是產(chǎn)科常見并發(fā)癥。表現(xiàn)為妊娠20周以后高血壓，蛋白尿，胎兒生長受限等情況。妊娠高血壓疾病造成的孕產(chǎn)婦死亡率為4.2/10萬，占死亡總數(shù)的

9.3 %，圍生兒病死率為2.2%，嚴(yán)重威脅母嬰健康，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦和圍產(chǎn)兒病亡的主要原因[1]。其發(fā)病機(jī)制不清晰，免疫學(xué)因素近來越來越受到關(guān)注。目前多數(shù)學(xué)者認(rèn)為妊娠狀態(tài)下母胎界面免疫平衡的破壞，造成一系列的級聯(lián)式免疫反應(yīng)，包括全身的免疫反應(yīng)，導(dǎo)致病理性妊娠的發(fā)生。本文通過檢測妊娠高血壓疾患者者外周血KIRs水平和胎盤組織HLA-G的表達(dá)情況的分析，進(jìn)一步探討妊娠高血壓疾病的免疫學(xué)機(jī)制中自然殺傷細(xì)胞及其KIR受體和配體HLA-G表達(dá)的變化。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2013年9月～2014年5月在景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院產(chǎn)科住院分娩的PIH患者20例，其中妊娠期高血壓5例，平均年齡（26.20±1.48）歲，平均孕周（39.77±1.11）周；輕度子癇前期10例，平均年齡（27.0±1.0）歲，平均孕周（38.20±1.02）周；重度子癇前期5例，平均年齡（28.70±3.49）歲，平均孕周（38.94±1.54）周。選擇同期住院分娩的健康孕婦20例作為對照組，平均年齡（26.70±2.53）歲，平均孕周（39.67±1.07）周。2組孕婦妊娠前均無高血壓、糖尿病以及肝腎疾病等。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)[2]血壓正常的女性孕20周后收縮壓≥0 mmHg，舒張壓≥90 mmHg定義為妊娠期高血壓。子癇前期的標(biāo)準(zhǔn)：妊娠20周后首次出現(xiàn)收縮壓≥140 mmHg或舒張壓≥90 mmHg，蛋白尿即尿蛋白≥0.3 g/24 h、下列標(biāo)準(zhǔn)至少1條符合可診斷為重度子癇前期：臥床休息患者間隔6小時2次收縮壓≥160 mmHg或舒張壓≥110 mmHg；蛋白尿：≥5 g/24 h，或間隔4小時2次尿蛋白；少尿：24小時尿量＜500 mL；大腦或視覺障礙；肺水腫或發(fā)紺；上腹部或右上腹疼痛；肝功能受損；血小板減少；胎兒生長受限。

1.3 血標(biāo)本采集 2組孕婦均在分娩前抽取肘正中靜脈血

3 mL，在室溫條件下離心10 min，轉(zhuǎn)速2 000。取血清1 mL置于-70℃冰箱保存，成批檢測。操作方法按照美國Edification B＆G公司公司提供的操作說明。

1.4 胎盤組織選取 胎盤娩出30 min內(nèi)取胎盤母體面約2 cm×2 cm×2 cm標(biāo)本（避開缺血及鈣化點(diǎn)），鹽水清洗，置10%中性福爾馬林液固定48 h以后，采用常規(guī)脫水、浸蠟，石蠟包埋，最后進(jìn)行4μm連續(xù)切片。應(yīng)用免疫組化S-P法根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞內(nèi)染色強(qiáng)度檢測胎盤組織中HLA-G表達(dá)強(qiáng)度。應(yīng)用免疫組化S-P法根據(jù)陽性細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞內(nèi)染色強(qiáng)度對胎盤組織中HLA-G表達(dá)進(jìn)行評分，0～1分為陰性（-），2～3分為弱陽性（+），≥4分為強(qiáng)陽性（++）。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 17.0對全部數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計處理，計量資料采用獨(dú)立因素樣本均數(shù)方差分析，兩變量間的相關(guān)性分析采用Spearman等級資料的相關(guān)性分析方法。

2 結(jié)果

2.1 臨床特征 見表1。

表1 孕婦臨床特征（±s）

表1 孕婦臨床特征（±s）

臨床觀察指標(biāo)妊娠高血壓組輕度子癇前期組重度子癇前期組對照組（n=5）（n=10）（n=5）（n=20）年齡（歲）26.43±0.5426.8±0.4627.96±0.7425.63±0.51分娩孕周（周）38.02±1.1137.07±1.0236.94±1.5438.61±1.07新生兒體質(zhì)量（kg）3278.00±60.023075.00±61.34 2960.00±52.453292.00±60.29

2.2 2組孕婦外周血外周血KIRs水平測定結(jié)果 隨著妊娠高血壓病情的加重母體血清KIRs含量增加，重度子癇前期患者較正常妊娠組差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。見表2。

表2 孕婦外周血KIRs水平（s）

表2 孕婦外周血KIRs水平（s）

組別例數(shù)平均值妊娠高血壓組5 14.96±2.03輕度子癇前期組10 53.21±2.38重度子癇前期組5114.77±7.00對照組20 7.32±0.99

2.3 2組孕婦胎盤組織中的HLA-G表達(dá)陽性率及表達(dá)強(qiáng)度比較 妊高癥組表達(dá)陽性率明顯低于對照組，并且妊高癥組表達(dá)強(qiáng)度隨病情加重而降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。

2.4 KIRs水平與胎盤中HLA-G蛋白表達(dá)水平相關(guān)性分析 血清中表達(dá)KIRs水平與胎盤中HLA-G蛋白表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=0.909，P＜0.05)。

3 討論

妊娠高血壓疾病是妊娠期特有疾病，是導(dǎo)致孕產(chǎn)婦死亡的六大獨(dú)立因素之一[3]，其發(fā)病機(jī)制未完全闡明。子癇前期被認(rèn)為與炎癥、血管內(nèi)皮功能障礙以及母胎間免疫不耐受密切相關(guān)。胎兒滋養(yǎng)細(xì)胞表達(dá)的HLA-G在子癇前期血管重鑄的免疫調(diào)節(jié)中的作用受到越來越多的關(guān)注[4]。研究表明HLA-G可與NK細(xì)胞表面抑制性受體KIR結(jié)合，向細(xì)胞內(nèi)傳遞抑制信號，抑制NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用。目前妊娠高血壓與NK細(xì)胞、KIR、HLA-G關(guān)系機(jī)制研究集中在外周血和母胎界面中數(shù)量、功能、基因檢測等多方面[5-8]。目前鑒定出與受體HLA-G結(jié)合的配體只有KIR2DL4。通過酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗（ELISA)檢測外周血血清KIR水平表明，妊娠高血壓患者KIR水平較正常孕婦組升高，并且其水平與妊娠高血壓疾病程度正相關(guān)，表明KIR參與妊娠高血壓疾病的發(fā)生和發(fā)展。KIR2DL4不僅是抑制性受體，抑制NK細(xì)胞的細(xì)胞毒作用，保護(hù)滋養(yǎng)細(xì)胞免受蛻膜NK細(xì)胞殺傷。

研究表明正常妊娠時母胎界面以天然免疫系統(tǒng)起主導(dǎo)作用，HLA-G與蛻膜NK細(xì)胞的抑制性受體KIR2DL4結(jié)合，刺激NK細(xì)胞分泌細(xì)胞毒性因子和免疫調(diào)節(jié)因子，與子宮螺旋動脈重鑄中起作用的血管生成因子共同發(fā)揮作用。正常孕婦蛻膜NK細(xì)胞高水平表達(dá)KIR2DL4。本研究通過免疫組化技術(shù)檢測妊娠高血壓患者胎盤HLA-G，證實(shí)妊娠高血壓患者胎盤HLA-G表達(dá)低于對照組孕婦?？紤]HLA-G降低與其結(jié)合的受體KIR2DL4減少，對NK細(xì)胞的抑制信號減弱，導(dǎo)致NK細(xì)胞的殺傷活性增強(qiáng)，刺激NK細(xì)胞分泌細(xì)胞因子減少，滋養(yǎng)細(xì)胞的浸潤性下降，胎盤淺著床，螺旋小動脈管腔相對狹窄，造成胎盤血液循環(huán)阻力增加，子宮胎盤灌注量減少胎盤供血不足，胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞缺血缺氧，產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，進(jìn)而引起血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，炎癥介質(zhì)釋放，導(dǎo)致全身各系統(tǒng)反應(yīng)及臨床表現(xiàn)[9]。

綜上所述，自然殺傷細(xì)胞免疫球蛋白樣受體(KIR)通過識別滋養(yǎng)細(xì)胞表面的人類白細(xì)胞抗原G(HLA-G),向自然殺傷(NK)細(xì)胞傳遞抑制性信號，研究表明NK細(xì)胞及其受體KIR和配體HLA-G參與了妊娠高血壓疾病的發(fā)病機(jī)制，無論是全身免疫失衡還是局部母胎界面免疫紊亂均與妊娠高血壓疾病的發(fā)病及病理生理變化密切相關(guān)。

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10.3969/j.issn.1009-4393.2016.36.010

江西省自然科學(xué)基金（20122BAB205091）

江西 330006 南昌大學(xué)研究生院醫(yī)學(xué)部 （余亮） 江西省人民醫(yī)院婦產(chǎn)科 （熊員煥） 333000 江西景德鎮(zhèn)市第一人民醫(yī)院婦產(chǎn)科 （余亮馮翰）