封宇昊

摘 要：為研究益生菌聯(lián)合藿香正氣水制霉菌素對肉雞生長性能及腸道菌群的影響。選取90只肉雞進行試驗，肉雞隨機分為3組。組1為空白組不給藥，組2（藿香正氣水0.67 g/mL），組3（藿香正氣水0.67 g/mL和枯草芽孢桿菌9600cfu/mL）。將藥品兌進250 mL蒸餾水里面，喂藥2次/天，連續(xù)喂藥5 d，宰殺前停藥2 d，每7 d宰殺1次。試驗結(jié)果表明，組2、組3大腸桿菌，乳酸桿菌和雙歧桿菌菌群數(shù)量和體重變化優(yōu)于空白組，且組3結(jié)果優(yōu)于組2。結(jié)論：空白組體重變化前期較組2、組3不顯著（P>0.05），中期極顯著（P<0.01），后期與組2相比不顯著（P>0.05），與組3相比試驗結(jié)果有顯著差異（0.01關(guān)鍵詞：藿香正氣水；枯草芽孢桿菌；肉雞；腸道菌群

1 研究目的與意義

1.1 研究背景和目的

動物健康與否取決于機體免疫系統(tǒng)的強弱，即胸腺、脾臟、法氏囊和腸道等免疫器官功能作用強弱，免疫器官指數(shù)是衡量肉雞機體免疫狀態(tài)的重要指標(biāo)，其中腸道是重要的機體免疫器官。腸道黏膜受損，勢必會導(dǎo)致機體免疫組織損傷，引發(fā)腸道疾病的發(fā)生。目前治療腸道疾病的藥物主要有抗菌藥物、活菌制劑和中藥制劑等。本研究旨在討論中藥制劑聯(lián)合益生菌能否對腸道菌群的生長有協(xié)同作用，從而達到預(yù)防和治療的目的。

1.2 研究內(nèi)容

為了研究藿香正氣水與益生菌對腸道的功能作用，本研究將一定濃度藿香正氣水與益生菌聯(lián)合并與藿香正氣水和空白組比較，考察藿香正氣水與益生菌聯(lián)合對腸道功能的影響，為益生菌與中藥在臨床上應(yīng)用提供理論依據(jù)。

2 材料和方法

2.1 材料

2.1.1試驗動物

雄性肉雞90只，購于河北省試驗動物中心。

2.1.2試驗試劑

藿香正氣水，枯草芽孢桿菌，蒸餾水，雙歧桿菌培養(yǎng)基（BBL），乳酸桿菌培養(yǎng)基（MRS），大腸桿菌培養(yǎng)基（EMB）。

2.1.3試驗儀器與設(shè)備

托盤，剪刀，注射器，離心管，三角刮，培養(yǎng)皿，鑷子，電子秤，恒溫培養(yǎng)箱，酒精燈，酒精棉，移液槍，線，小刀，記號筆，分析天平。

2.2 方法

2.2.1肉雞前期喂養(yǎng)

將90只雄性肉雞隨機分為9籠，每籠10只。依據(jù)肉雞飼養(yǎng)管理標(biāo)準(zhǔn)進行管理。

2.2.2試驗動物分組

將所有健康肉雞進行隨機分為3組：

組1（空白組）；

組2（藿香正氣水0.67g/mL）；

組3（藿香正氣水0.67g/mL和枯草芽孢桿菌9600cfu/mL）。

空白組肉雞每天喂蒸餾水（500 mL/d），其余兩組在每天的飲水中添加對應(yīng)的藥物：組2每日的飲水為3mL藿香正氣水，加497mL蒸餾水，組3每日的飲水為藿香正氣水3mL、枯草芽孢桿菌1.2mL，加蒸餾水495.8mL，每天的飲水分兩次供應(yīng)，所有組分食用普通飼料。連續(xù)喂藥5d，宰殺前停藥2d，每7d宰殺1次，宰殺前需稱重。

2.2.3取材

每組隨機選取3只肉雞，記錄體重后，先保定肉雞，切斷頸總動脈放血至死亡。剖開胸腔至內(nèi)部器官暴露，將盲腸，回腸，十二指腸和空腸分別剪下一段，放置在分析天平上稱重共約2g，并做好記錄。

2.2.4制備組織培養(yǎng)液

取滅菌后的50mL錐形瓶3個，每個錐形瓶倒入18mL蒸餾水，于121℃下進行滅菌15min，備用。取準(zhǔn)備好的2g腸道，在超凈工作臺上用消毒的剪刀剪碎，放入備用的錐形瓶中，使腸道內(nèi)容物流出，制成組織液。

2.2.5涂板

在超凈工作臺上進行涂皿，先用酒精棉球?qū)⒉Ａ枪尾潦貌⒘栏桑缓髮⑷枪卧诰凭珶羯现丝鞠?，放涼備用。用移液槍吸取上清?0 μL，打進標(biāo)記好的培養(yǎng)皿中，用放涼的三角刮輕輕將液體順時針刮勻，直到將液體全部刮干。為了防止交叉污染，每次吸取上清液前要換槍頭，且三角刮每次使用后，都需再次消毒。所有操作要在酒精燈10cm范圍內(nèi)，防止雜菌感染。

2.2.6細菌的培養(yǎng)與計數(shù)

將完成的培養(yǎng)基于37 ℃恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)。大腸桿菌培養(yǎng)基進行正常的有氧培養(yǎng)，乳酸桿菌和雙歧桿菌培養(yǎng)基在干燥器中進行無氧培養(yǎng)。24 h之后取出并分組計數(shù)。

2.2.7數(shù)據(jù)處理

將數(shù)據(jù)進行SPSS方差分析：數(shù)據(jù)為均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）。

3 結(jié)果與分析

組1與組2對比，第7d和14d無顯著差異（P>0.05），從第21d開始到42d差異極顯著（P<0.01），第49d試驗無顯著差異（P>0.05）；組1與組3相比，第7d和14d試驗結(jié)果無顯著差異（P>0.05），從第21d開始到42d，試驗結(jié)果極顯著（P<0.01），第49d試試驗結(jié)果差異顯著（0.01

組1與組2相比，第7d至21d差異不顯著（P>0.05），從第28d開始試驗結(jié)果差異顯著（0.014 試驗結(jié)論

藿香正氣水能調(diào)節(jié)胃腸功能紊亂，用于腸胃炎的治療；制霉菌素能抑制腸道真菌生長；枯草芽孢桿菌通過分泌多種活性物質(zhì)，來抑制大腸桿菌等有害微生物繁殖，提高機體免疫力。研究發(fā)現(xiàn)，在添加枯草芽胞桿菌制劑組的肉雞盲腸和空腸中中的枯草芽孢桿菌和乳酸菌數(shù)量明顯增加，而大腸桿菌的數(shù)量明顯降低[ 16 ]。

本次試驗結(jié)果顯示，組1與組3菌群數(shù)量相比，大腸桿菌數(shù)量在7 d之后極顯著（P<0.01），乳酸桿菌數(shù)量在14 d之后極顯著（P<0.01），雙歧桿菌數(shù)量在21 d之后極顯著（P<0.01）；組1與組2菌群數(shù)量相比，大腸桿菌數(shù)量在14 d之后有顯著性差異（0.01