黎燕瓊

【摘要】 目前乙型肝炎病毒（HBV）感染仍是一個較嚴重的公共衛(wèi)生問題之一。全球有近3億HBV攜帶者，我國占45%，準確、及時地檢測HBV，對控制HBV傳播、提高診療效果非常重要。隨著HBV檢測方法的不斷發(fā)展，臨床已廣泛開展與其相關的檢測技術，對防治HBV感染發(fā)揮了重要作用。目前HBV的檢測方法主要有電子顯微鏡法、免疫學法、分子生物學法。本文對HBV幾種檢測方法進行綜述。

【關鍵詞】 乙型肝炎病毒； 檢測方法

中圖分類號 R512.6 文獻標識碼 A 文章編號 1674-6805（2016）8-0159-02

doi：10.14033/j.cnki.cfmr.2016.8.091

濃度通過測定熒光強度來檢測，極微的熒光就能被特別的感光結構感應到，使其檢測靈敏度更高。ELISA和MEIA對HBV血清標志物的檢測均有較高的特異性，但ELISA的敏感性低于MEIA[12]。

化學發(fā)光微粒免疫檢測法（CMIA）是目前應用較多的化學發(fā)光法。譚璐[13]報道ELISA和CMIA靈敏度差別不大，但從自動化程度和方法學角度看CMIA法優(yōu)于ELISA法。

3 分子生物學法

3.1 HBV DNA檢測技術

HBV DNA是HBV具有傳染性和復制的標志，是判斷抗HBV藥物療效的重要指標[14-15]。檢測方法有PCR、支鏈DNA（bDNA）、核酸雜交、雜交捕獲系統(tǒng)、基因芯片技術。熒光定量聚合酶鏈反應（FQ-PCR）采用熒光技術和閉管檢測，完全克服了常規(guī)PCR方法操作繁雜，不能準確定量、產(chǎn)物間的交叉污染、重復性差和強致癌物溴化乙啶的使用造成的環(huán)境污染[16-18]。目前的試劑盒多采用FQ-PCR進行HBV DNA的定量檢測。bDNA技術的缺點是放大倍數(shù)少、檢測范圍窄、敏感性低，不適用于低水平檢測。袁靜等[19]報道FQ-PCR用于HBV DNA含量的檢測靈敏度明顯高于bDNA法。核酸雜交包括斑點雜交和液相雜交?；蛐酒夹g為近幾年發(fā)展的新技術，根據(jù)HBV高度保守的特異性基因序列設計寡核苷酸探針制備基因芯片，將待測患者的樣本進行PCR擴增，PCR擴增的同時進行產(chǎn)物熒光標記，標記產(chǎn)物與基因芯片進行雜交，雜交結果經(jīng)掃描儀讀數(shù)并輸出圖像，然后通過計算機分析，從而檢測樣本是否存在病毒感染[20]。由于基因芯片可以一次性對大量序列進行檢測分析，具有快速、高通量、并行等特點，解決了傳統(tǒng)核酸印跡雜交技術自動化程度低、檢測序列少、操作繁雜、效率低的缺點[21]。

3.2 HBV耐藥性檢測技術

目前臨床上應用的HBV耐藥性檢測主要是針對HBV DNA聚合酶P基因的檢測，鑒別野生型（YMDD）及耐藥突變型（YVDD、YIDD），檢測結果可為抗病毒藥物治療中HBV耐藥性的產(chǎn)生提供依據(jù)，以指導臨床用藥和監(jiān)測病情。常用的檢測方法有FQ-PCR、核酸雜交和基因芯片技術等。

3.3 HBV基因分型

常用FQ-PCR、PCR-反向點雜交法（PCR-RDB）、聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性分析（PCR-RFLP）、DNA測序和基因芯片技術進行HBV基因分型。上述方法各有優(yōu)缺點?；驕y序除能準確確定病毒株基因型、亞型外，還能發(fā)現(xiàn)其他方法很難鑒別的重組病毒株，是檢測病毒基因變異公認的金標準，但是技術要求高，價格昂貴，操作復雜，很難常規(guī)開展。實時熒光PCR、多位點基因芯片技術等只能檢測單一突變位點[22]。劉蒙等[23]用PCR-RFLP技術檢測維生素D受體（VDR）Fok I基因的多態(tài)性在慢性乙肝患者的分布，并進行基因型分析，認為VDR Fok I基因的多態(tài)性與慢性乙肝患者的不同臨床表型存在一定的關系。王丹等[24]用PCR-RFLP技術檢測高遷移率族蛋白B1（HMGB1）第4內(nèi)含子1176G/C多態(tài)性，認為HMGB1基因多態(tài)性與HBV感染后原發(fā)性肝癌的發(fā)生有關聯(lián)。

綜上所述，由于HBV是一種變異較高的病毒，免疫學方法檢測的是表型指標，而且免疫學指標的出現(xiàn)晚于HBV DNA的出現(xiàn)。隨著對HBV的不斷深入研究，PCR技術和分子生物學技術的應用，大大提高了HBV檢測的準確度，實現(xiàn)了對HBV DNA的定量檢測，能夠準確地判斷HBV在體內(nèi)的復制情況。但是這些檢測技術的成本相對較高，在國內(nèi)的普及有一定難度。因各種檢測方法的靈敏度和特異性均不同，在臨床中，醫(yī)生可結合患者的具體情況進行選擇，為提高臨床確診率，必要時采用多種方法聯(lián)合檢測。

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（收稿日期：2015-11-11）