李戌清，傅鴻妃，李紅斌（杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，310024）

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稻黑孢菌生物學(xué)特性及殺菌劑篩選

李戌清，傅鴻妃，李紅斌
（杭州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，310024）

摘要：研究了稻黑孢菌的生物學(xué)特性，并對(duì)防治藥劑進(jìn)行了室內(nèi)篩選。試驗(yàn)結(jié)果表明，菌株HZ4111菌絲生長(zhǎng)的最適條件為溫度30℃、12 h光12 h暗的交替光周期、培養(yǎng)基pH值5.0曰在以可溶性淀粉和酵母膏培養(yǎng)基上菌絲生長(zhǎng)較快淵日平均生長(zhǎng)速率分別為9.63、14.25 mm/d冤，以山梨醇、乙醇和甘氨酸培養(yǎng)基上較慢淵分別為0、0、0.42 mm/d冤曰9種殺菌劑對(duì)菌株HZ4111菌絲生長(zhǎng)均有較好的抑制作用，其中75%肟菌窯戊唑醇水分散粒劑、325 g/L苯甲窯嘧菌酯懸浮劑、250 g/L嘧菌酯懸浮劑效果最好，(50)分別為0.000 1、0.000 9、0.000 9 μg/mL曰70%丙森鋅可濕性粉劑、75%百菌清可濕性粉劑、12.5%四氟醚唑水乳劑、325 g/L苯甲窯嘧菌酯懸浮劑、75%肟菌窯戊唑醇水分散粒劑對(duì)病菌孢子萌發(fā)有較好的抑制作用，MIC值均小于0.05 μg/mL。

關(guān)鍵詞：稻黑孢菌曰生物學(xué)特性曰藥劑篩選

李戌清（1982-），女，博士，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事植物病害研究工作，E-mail：xq_li@126.com

本研究對(duì)采自浙江省杭州地區(qū)稻葉的稻黑孢菌進(jìn)行了生物學(xué)特性測(cè)定和常用殺菌劑室內(nèi)毒力測(cè)定，旨在尋找通過環(huán)境條件控制病害發(fā)生的途徑，并篩選防治該病害的高效藥劑，進(jìn)而為稻黑孢菌的防治提供理論依據(jù)。

1　材料與方法

1

.1試驗(yàn)材料

①供試菌株稻黑孢菌HZ4111采自浙江省杭州地區(qū)的稻葉，常規(guī)分離、純化后置于PDA培養(yǎng)斜面，4℃保存于實(shí)驗(yàn)室備用[21]。

②供試藥劑供試藥劑相關(guān)信息見表1。

表1　供試藥劑種類

1.2稻黑孢菌生物學(xué)特性觀察

①溫度、光照和pH值對(duì)菌株菌絲生長(zhǎng)的影響從預(yù)培養(yǎng)1～2 d的病原菌菌落邊緣取直徑為14 mm的菌絲塊接種到PDA平板中央，分別置于20、25、28、30、35℃5個(gè)不同溫度梯度下培養(yǎng)，每處理4次重復(fù)，培養(yǎng)至3 d后使用直尺“十”字交叉法測(cè)量菌落生長(zhǎng)直徑，并計(jì)算菌絲日平均生長(zhǎng)速率。接種菌絲塊至PDA平板中央，30℃下分別置于24 h光、12 h光12 h暗、24 h暗下培養(yǎng)，每處理4次重復(fù)，菌落直徑的測(cè)量和生長(zhǎng)速率的計(jì)算方法同上。用0.1 mol/L HCl或NaOH將PDA培養(yǎng)基的pH值分別調(diào)至4.0、5.0、6.0、7.0、8.0、9.0[22]，接種菌絲塊，30℃培養(yǎng)，每處理4次重復(fù)，菌落直徑的測(cè)量和生長(zhǎng)速率的計(jì)算方法同上。

②不同碳、氮源對(duì)菌株菌絲生長(zhǎng)的影響以查氏培養(yǎng)基（KNO32.00 g，K2HPO41.00 g，KCl 0.50 g，MgSO4·7H2O 0.50 g，F(xiàn)eSO40.01 g，蔗糖30.00 g，加水定容至1 000 mL）為基礎(chǔ)培養(yǎng)基。以KNO3為氮源，以半乳糖、可溶性淀粉、甘露醇、果糖、麥芽糖、葡萄糖、山梨醇、乙醇、蔗糖等量替換基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的蔗糖，測(cè)定各碳源對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響，以無碳源查氏培養(yǎng)基為對(duì)照，每處理4次重復(fù)，30℃培養(yǎng)3 d后使用直尺“十”字交叉法測(cè)量菌落生長(zhǎng)直徑，并計(jì)算菌絲日平均生長(zhǎng)速率。以蔗糖為碳源，以甘氨酸、谷氨酰胺、脯氨酸、酵母膏、硫酸銨、牛肉浸膏、胰蛋白胨、氯化銨、硝酸鉀等量替換基礎(chǔ)培養(yǎng)基中的KNO3，測(cè)定各氮源對(duì)菌株生長(zhǎng)的影響，以無氮源查氏培養(yǎng)基為對(duì)照，每處理4次重復(fù)，30℃培養(yǎng)，菌落直徑的測(cè)量和生長(zhǎng)速率的計(jì)算方法同上。

③菌株菌絲生長(zhǎng)對(duì)9種殺菌劑的敏感性測(cè)定采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定9種殺菌劑對(duì)菌株生長(zhǎng)的抑制作用。用雙蒸水將上述9種供試藥劑配成0.1 g/mL母液，取適量母液與溫度約60℃的PDA培養(yǎng)基混勻，制成藥劑濃度分別為0（對(duì)照）、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、5.00 μg/mL的含藥平板。從預(yù)培養(yǎng)1～2 d的病原菌菌落邊緣取直徑14 mm的菌絲塊，接種到各含藥平板上，每皿一塊，置于30℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)3 d，直尺“十”字交叉法測(cè)量菌落直徑，每處理3次重復(fù)。計(jì)算各藥劑濃度對(duì)菌絲生長(zhǎng)的相對(duì)抑制率（%），其中相對(duì)抑菌率（%）=（1-處理菌落直徑/對(duì)照菌落直徑）×100%。

④菌株孢子萌發(fā)對(duì)9種殺菌劑的敏感性測(cè)定分別將1 mL含有0、0.05、0.10、0.25、0.50、1.00、5.00 μg/mL藥劑的PDA培養(yǎng)基加入到48孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，每列為同一濃度。待凝固后，取1 μL濃度為105個(gè)/mL的孢子懸浮液分別滴在含系列濃度藥劑的細(xì)胞培養(yǎng)板排孔中，置于30℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)3 d，肉眼觀察孢子萌發(fā)生長(zhǎng)情況，以明確各藥劑的最小抑菌濃度（MIC）。每處理3次重復(fù)。

1.3數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所得數(shù)據(jù)經(jīng)DPS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行處理分析，并求出毒力回歸方程、及相關(guān)系數(shù)。

2　結(jié)果與分析

2.1溫度、光照和pH值對(duì)菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

稻黑孢菌菌株HZ4111菌絲在20～35℃均能生長(zhǎng)，但在30℃下菌絲生長(zhǎng)速率顯著高于其他供試溫度，其平均生長(zhǎng)速率為13.96 mm/d，35℃下生長(zhǎng)最慢，為0.42 mm/d，表明高溫對(duì)病原菌菌絲生長(zhǎng)有較強(qiáng)的抑制作用（圖1）。不同光照條件下菌落生長(zhǎng)速率差異顯著，在12 h光12 h暗的光暗交替條件下生長(zhǎng)最快，其平均生長(zhǎng)速率為21.04 mm/d，在24 h光條件下生長(zhǎng)最慢，為11.25 mm/d（圖2）。在pH值4.0～9.0范圍內(nèi)菌絲均能生長(zhǎng)，其中pH值為5.0時(shí)菌落生長(zhǎng)速率最快，其平均生長(zhǎng)速率為15.54 mm/d，顯著高于其他供試pH值；在供試pH值范圍內(nèi)，菌落生長(zhǎng)速率隨pH值的升高先升后降，且pH值為9.0時(shí)下降顯著，表明該病菌對(duì)堿性環(huán)境條件敏感（圖3）。

圖1　溫度對(duì)菌株HZ4111菌落生長(zhǎng)的影響

圖2　光照條件對(duì)菌株HZ4111菌落生長(zhǎng)的影響

2.2不同碳、氮源對(duì)菌株菌絲生長(zhǎng)的影響

菌株HZ4111能利用多種碳、氮源營(yíng)養(yǎng)，但不同氮源、碳源菌株菌絲生長(zhǎng)存在一定差異。以可溶性淀粉為碳源的培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)最好，平均生長(zhǎng)速率為9.63 mm/d，顯著優(yōu)于葡萄糖、麥芽糖、蔗糖、果糖、甘露醇、半乳糖、無碳源（CK）、山梨醇、乙醇，其中以山梨醇和乙醇為碳源的培養(yǎng)基上菌絲不能生長(zhǎng)（圖4）。不同氮源對(duì)菌絲生長(zhǎng)的影響差異顯著，以酵母膏培養(yǎng)基上菌落生長(zhǎng)最好，線性生長(zhǎng)率為14.25 mm/d，顯著優(yōu)于胰蛋白胨、氯化銨、牛肉浸膏、硫酸銨、無氮源（CK）、硝酸鉀、谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸，其中甘氨酸最差，生長(zhǎng)速率0.42 mm/d（圖5）。

圖3　pH值對(duì)菌株HZ4111菌落生長(zhǎng)的影響

圖4　不同碳源對(duì)菌株HZ4111菌落生長(zhǎng)的影響

圖5　不同氮源對(duì)菌株HZ4111菌落生長(zhǎng)的影響

2.3菌株菌絲生長(zhǎng)對(duì)9種殺菌劑的敏感性測(cè)定

由表2可知，9種殺菌劑對(duì)菌株HZ4111菌絲生長(zhǎng)具有不同程度的抑制作用。其中肟菌·戊唑醇、苯甲·嘧菌酯、嘧菌酯效果最好，分別為0.000 1、0.000 9、0.000 9 μg/mL；其次是氰霜唑、四氟醚唑、噻呋·己唑醇、丙森鋅，分別為0.0131、0.020 3、0.020 3、0.068 4 μg/mL；代森鋅、百菌清效果最差，分別為0.109 3、0.421 3 μg/mL。

2.4菌株孢子萌發(fā)對(duì)9種殺菌劑的敏感性測(cè)定

經(jīng)觀察可知，氰霜唑的MIC值大于5 μg/mL；嘧菌酯的MIC值為1～5 μg/mL；代森鋅、噻呋·已唑醇對(duì)菌株HZ4111的MIC值為0.5～ 1 μg/mL；丙森鋅、百菌清、四氟醚唑、苯甲·嘧菌酯、肟菌·戊唑醇的MIC值小于0.05 μg/mL。即丙森鋅、百菌清、四氟醚唑、苯甲·嘧菌酯、肟菌·戊唑醇對(duì)病菌孢子萌發(fā)有較好抑制作用，代森鋅、噻呋·己唑醇抑制效果一般，嘧菌酯、氰霜唑較差。

表2　9種殺菌劑對(duì)稻黑孢菌菌株HZ4111菌絲生長(zhǎng)的毒力

3　結(jié)論與討論

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Biological Characteristics and Fungicides Screening of

LI Xuqing, FU Hongfei, LI Hongbin

Abstract:We studied the biological characteristics ofand conducted the fungicides screening test in lab. The results showed that, the optimum condition for mycelia growth of HZ4111 was 30℃, 12 h light/12 h dark alternate illumination with pH value of 5.0. Mycelia grew faster on soluble starch medium and yeast extract medium, with average growth rates of 9.63 and 14.25 mm/d respectively, while mycelia grew slower on sorbitol medium, ethanol medium and glycine medium, with average growth rates of 0, 0 and 0.42 mm/d respectively. The nine fungicides had better effect on inhibiting mycelial growth of HZ4111, among them, 75% trifloxystrobin+tebuconazole water dispersible granule (WDG), 325 g/L difenoconazole+azoxystrobin suspension concentrate (SC) and 250 g/L azoxystrobin SC were the most effective inhibitors, with EC50 value of 0.000 1, 0.000 9 and 0.000 9 μg/mL respectively. 70% propineb wettable powder (WP), 75% chlorothalonil WP, 12.5% tetraconazole emulsion in water (EW), 325 g/L difenoconazole+azoxystrobin SC and 75% trifloxystrobin+tebuconazole WDG had better effects on inhibiting spore germination of HZ4111, with MIC value less than 0.05 μg/mL.

Key words:Biological characteristics; Fungicides screening

收稿日期：2015-12-11

基金項(xiàng)目：杭州市科委資助項(xiàng)目（20140432B10）

DOI:10.3865/j.issn.1001-3547.2016.06.030

中圖分類號(hào)：S432.44

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1001-3547（2016）06-0080-05