連歡+張翠忠+張貞發(fā)+彭金云

【摘 要】制備了L-半胱氨酸自組裝膜修飾的金電極，利用循環(huán)伏安法和差示脈沖伏安法研究了對硝基苯酚在該L-半胱氨酸自組裝膜上的電化學行為，實驗結果表明：相比于裸金電極，硝基苯酚在L-半胱氨酸自組裝膜修飾的金電極上具有更高的電化學響應信號，這是由于L-半胱氨酸和對硝基苯酚之間存在氫鍵的作用，使得對硝基苯酚更容易聚集在電極表面。在最優(yōu)實驗條件下，該修飾電極在對硝基苯酚0～12.5μmol·L-1濃度范圍內具有良好的線性關系，檢出限為0.0295μmol·L-1（信噪比為3）；加標回收實驗的回收率在95.51%至102.72%之間。

【關鍵詞】L-半胱氨酸；自組裝；對硝基苯酚；電催化

近幾年來，通過物理修飾或者化學修飾的導電聚合膜或自組裝膜被廣泛應用于電化學傳感領域[1-5]。自組裝法利用分子間較弱的相互作用力，如疏水作用、氫鍵作用、堆積效應、靜電作用、配位作用等，使得小的結構單元自發(fā)聚集成較大的組裝體[6]。L-半胱氨酸中的S作為電子給體能夠與金電極表面的Au配位形成S-Au鍵，從而通過S-Au鍵之間的強烈的相互作用，形成穩(wěn)定的L-半胱氨酸自組裝膜修飾金電極（L-Cys/Au）。本文利用L-半胱氨酸自組裝修飾金電極研究了對硝基苯酚的電化學行為，并進行相關的分析檢測，實驗結果良好。

1 實驗部分

1.1 試劑與實驗儀器

L-半胱氨酸（L-Cys）（分析純，天津市光復精細化工研究所），對硝基苯酚（分析純，廣東光華科技股份有限公司），亞鐵氰化鉀、鐵氰化鉀（分析純，天津市廣成化學試劑有限公司）。

CHI620E電化學工作站（上海辰華儀器公司），三電極系統(tǒng)為L-半胱氨酸自組裝修飾金電極（L-Cys/Au）、金電極（Au）作工作電極，飽和甘汞電極作參比電極，鉑柱電極作對電極。

1.2 修飾電極（L-Cys/Au）的制備

（1）配制濃度為20mmol·L-1的L-半胱氨酸修飾液。

（2）將金電極（AuE，直徑2mm），分別用0.3μm和0.05μm的三氧化二鋁在麂皮上仔細打磨拋光，并用二次水超聲洗干凈后，氮氣吹干備用。

（3）將上述打磨好的金電極迅速浸泡在配置好的L-半胱氨酸修飾液中，浸泡液中不允許出現(xiàn)氣泡，以免L-半胱氨酸氧化，一定時間后，將金電極取出，用二次蒸餾水沖洗干凈，氮氣吹干后備用。

1.3 實驗方法

采用三電極測量體系，以金電極和L-Cys/Au修飾電極為工作電極，SCE為參比電極，鉑柱電極為輔助電極，支持電解質溶液為0.1mol·L-1PBS，采用循環(huán)伏安法（CV），差示脈沖伏安法（DPV）進行測試。

2 實驗結果與討論

2.1 各電極在鐵氰化鉀中的電化學表征

如圖1（A）是不同自組裝時間的L-Cys/Au修飾電極的在鐵氰化鉀/亞鐵氰化鉀溶液中的循環(huán)伏安圖（掃速為100mV·s-1）。圖中的曲線a、b、c、d分別表示分別是金電極在20mmol·LL-半胱氨酸中溶液中自組裝0、30、60和90min的修飾電極的循環(huán)伏安行為曲線。實驗發(fā)現(xiàn)，隨著自組裝時間的增加，氧化還原峰響應電流增大后又逐漸減小，這是由于L-半胱氨酸在金電極表面上自組裝時間決定了組裝膜的厚度[7]，自組裝時間越長，分子膜越致密，以至阻礙了探針分子在電極表面的電子轉移，從而降低了探針分子在電極表面的電子轉移速率，使氧化還原峰電流降低。

圖1（B）中的曲線a是裸金電極的循環(huán)伏安曲線。曲線b是自組裝30min的修飾電極的循環(huán)伏安行為曲線。實驗結果表明，與裸金電極相比，鐵氰化鉀探針分子在L-Cys/Au電極上的氧化還原峰電流明顯增強。結果表明與裸金電極相比，自組裝30min的L-Cys/Au電極能有效的增加[Fe（CN）6]3-/4-在電極表面的電子轉移速率。

（A）不同自組裝時間的裸金電極與L-Cys/Au電極在2mM[Fe（CN）6]3-/4-中循環(huán)伏安圖；（B）裸金電極與L-Cys/Au電極在2mmol·L-1[Fe（CN）6]3-/4-中的循環(huán)伏安圖

2.2 Au與L-Cys/Au電極的循環(huán)伏安（CV）行為

圖2 裸金電極（a）和L-Cys/Au電極（b）在0.2mM對硝基苯酚溶液（pH=7.0）中的循環(huán)伏安行為

圖2為裸金電極（曲線a）和L-Cys/Au電極（曲線b）在0.2mmol·L-1對硝基苯酚溶液（pH=7.0）中的電化學響應。與裸金電極相比， L-Cys/Au在對硝基苯酚中表現(xiàn)出比較大的峰電流，電化學信號增強。這表明L-Cys組裝膜能有效地增強金電極對對硝基苯酚的催化作用，提高對硝基苯酚的檢測靈敏度。

2.3 條件優(yōu)化

為能充分發(fā)揮該傳感器在對硝基苯酚檢測中的優(yōu)異性能，本實驗分別對自組裝時間，富集時間和富集電位進行了優(yōu)化，實驗表明，用于對硝基苯酚檢測的修飾電極的最佳自組裝時間是50min，最佳富集電位為1.0V，最佳富集時間為6min。

2.4 pH值的影響

圖3（A）為自組裝50min的L-Cys/Au電極在不同pH的對硝基苯酚中的循環(huán)伏安響應曲線，圖3（B）為不同的pH值與峰電流與峰電位的關系圖。由圖可知，隨著pH值的增大，其氧化峰電流呈現(xiàn)先增大后減小的趨勢，pH值為中性時有利于對硝基苯酚的檢測。氧化峰電位隨著pH值的增加，依次遞減，并且與pH值呈線性。線性方程為：Epa=1.2299-0.0554pH（Epa：V），相關系為R2=0.9993，斜率接近0.059V，這表明對硝基苯酚在該電極上是兩電子和兩質子轉移的過程[8]。

（A）pH值的對硝基苯酚在L-Cys/Au上循環(huán)伏安行為的影響；

（B）氧化峰電流、峰電位與pH值的關系圖

2.5 掃速的影響

圖4（A）為不同掃速時L-Cys/Au電極在0.2M的對硝基苯酚中的循環(huán)伏安響應曲線圖，圖4（B）是掃速平方根與還原氧化峰電流的線性關系圖，實驗結果表明，對硝基苯酚氧化還原峰電流隨掃速的增加而增加并與掃描速度的二次方根形呈線性，由此可知，對硝基苯酚在L-Cys/Au電極上是受擴散控制的過程。其中，氧化峰電流線性方程為Ipa=-12.2517+167.4093v （Ipa：μ A， v1/2：mV1/2·s-1/2），R2=0.993，還原峰電流線性方程為Ipc=10.7271-112.9080v（Ipc：μ A，v1/2：mV1/2·s-1/2），R2=0.991。

（A）掃描速度的優(yōu)化圖，從低到高（a到i）依次為10、30、50、70、90、110、130、150、170、190、210、230、250mV·s-1；（B）氧化還原峰電流與掃速平方根的線性關系圖

2.6 對硝基苯酚電分析方法及應用

采用差分脈沖法對不同濃度的對硝基苯酚溶液進行了測定，實驗結果如圖5所示隨著濃度的增加，對硝基苯酚的峰電流依次增加，并且氧化峰電流與對硝基苯酚的濃度呈現(xiàn)出良好的線性關系，線性方程為Ipa（μA）=1.2786c（μmol·L-1）-0.7582（R2=0.998），檢出限為0.0295μmol·L-1。

（A）不同濃度的對硝基苯酚溶液在 L-Cys/Au電極上的差分脈沖伏安行為。從a至g依次為0，0.5，4.75，8，8.75，11.55，12.5μM；（B）濃度與峰電流的線性關系圖

2.7 對硝基苯酚樣品檢測與回收實驗

為了評估該傳感器的實際應用性，本實驗應用標準加入法，測定了對硝基苯酚環(huán)境標準樣品的回收率，結果如表1所示，加標回收率范圍95.51%～102.72%之間，標準偏差均小于5%，這表明該傳感器可以應用于實際樣品檢測。

3 結論

本論文通過自組裝的方法制備的L-半胱氨酸修飾的金電極，能有效促進電子轉移速率，增強電化學響應信號，具有制備簡易、操作簡單、穩(wěn)定性好、經(jīng)濟價廉，檢測靈敏度高，穩(wěn)定性好的特點，可用于實際樣品的測定。

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[責任編輯：湯靜]