尚　坤　劉明軍　陳飛騰　李　波　王　蕾　陳林青　李躍宗　張　欣

長春中醫(yī)藥大學，吉林　長春　130117

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傳統(tǒng)推拿“束悗療法”防治糖尿病周圍神經(jīng)病變的實驗研究

尚坤劉明軍陳飛騰李波王蕾陳林青李躍宗張欣

長春中醫(yī)藥大學，吉林長春130117

【摘要】目的：觀察傳統(tǒng)推拿“束悗療法”防治糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的效果。方法：將80只大鼠隨機平均分為對照組、模型組、推拿組和藥物組，采用腹腔注射鏈脈佐菌素的方法造模，觀察各組動物坐骨神經(jīng)傳導速度(SNVC)和坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)的變化情況。結(jié)果：對各組動物坐骨神經(jīng)SNVC檢測發(fā)現(xiàn)，模型組與對照組比較，SNVC差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，推拿組與模型組比較，SNVC差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，藥物組與模型組比較，SNVC差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，推拿組與藥物組比較，SNVC差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；對各組動物坐骨神經(jīng)VEGF檢測發(fā)現(xiàn)，模型組與對照組比較，VEGF表達差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，推拿組與模型組比較VEGF表達差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，藥物組與模型組比較，VEGF表達差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，推拿組與藥物組比較，VEGF表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。結(jié)論：傳統(tǒng)推拿“束悗療法”能夠有效改善DPN實驗大鼠下肢坐骨神經(jīng)SNVC，提高坐骨神經(jīng)VEGF含量，從而對DPN大鼠的周圍神經(jīng)功能恢復起到有效的治療作用且療效與注射藥物彌可保相持平?！笆鴲幆煼ā本哂胁僮骱啽恪踩?、無毒副作用等其他任何藥物無法具備的臨床優(yōu)勢，值得臨床推廣和普及。

【關鍵詞】推拿；束悗；糖尿病周圍神經(jīng)病變

束悗療法是中醫(yī)的傳統(tǒng)推拿操作手法[1]，施術部位常選擇四肢大血管或大神經(jīng)干走行線路，操作時以手指或手掌采用“緩按快放”或“快按緩放”的手法，按壓局部并停留一定時間，然后突然放開以推動局部氣血運行，達到疏通經(jīng)絡、活血止痛的治療目的。糖尿病性周圍神經(jīng)病變(DPN)是糖尿病的主要并發(fā)癥和致殘的主要因素之一，主要臨床表現(xiàn)是周圍神經(jīng)的功能出現(xiàn)障礙。研究傳統(tǒng)推拿“束悗療法”干預糖尿病大鼠周圍神經(jīng)病變的治療，獲得比較滿意的效果，現(xiàn)報道如下。

1儀器與材料

1.1動物與分組選取雄性清潔級wistar大鼠80只，鼠齡8周，由吉林大學實驗動物中心提供，許可證號：SCXK-(吉)2014-0003。分籠飼養(yǎng)，每籠10只，食用標準顆粒鼠糧。隨機將大鼠分為空白對照組(簡稱對照組)、模型組、模型+推拿干預組(簡稱推拿組)、模型+藥物干預組(簡稱藥物組)，每組動物20只。

1.2藥品與試劑鏈脈佐菌素(美國sigma公司，1g/瓶)；彌可保(甲鈷胺注射液，衛(wèi)材中國藥業(yè)有限公司，500μg/支)；考馬司亮蘭測試盒(南京建成生物工程研究所)。

1.3儀器TAP-Ⅱ型推拿手法測定儀(上海益聯(lián)醫(yī)學發(fā)展有限公司)；Medlab-u/4cs生物信號采集處理系統(tǒng)(南京美易科技有限公司)；光學顯微鏡及圖像分析系統(tǒng)(德國Leica公司)；自動電泳凝膠成像分析儀(Chemi Imager 5500,美國)。

2實驗方法

2.1動物模型的制備取實驗大鼠60只，將鏈脈佐菌素臨用前用pH值4.2～4.5的0.lmol/l檸檬酸鈉—檸檬酸緩沖液避光條件下配成1%濃度溶液，按劑量50mg/kg于實驗大鼠左下腹腔內(nèi)單次注射，72h后取尾血測血糖，血糖>16.7mmol/l作為糖尿病大鼠。血糖未達標的造模大鼠，補打30mg/kg 0.1%鏈脲佐菌素，72h后測血糖，不足要求則棄去。如此在1周后血糖仍>16.7mmol/l，且從形態(tài)上有周圍神經(jīng)病變出現(xiàn)，坐骨神經(jīng)傳導速度(SNCV)明顯降低時，即制成周圍神經(jīng)病變模型大鼠。另取實驗大鼠20只，用0.1mol/l檸檬酸鈉—檸檬酸緩沖液(pH4.2，4℃)按同體積左下腹腔內(nèi)單次注射，72h后取尾血測血糖，作為正常對照組。

2.2干預方法

2.2.1推拿組將實驗大鼠仰臥，固定其頭部與上肢。施術者以左手牽拉大鼠一側(cè)下肢，使下肢伸直呈水平位，以右手拇指指腹緩慢按壓于大鼠腹股溝處，力量經(jīng)推拿手法測試儀測定約為1kg，持續(xù)30s左右，然后突然抬手，停止按壓，即“緩按快放”；間隔60s左右，再次以右手拇指指腹快速按壓于大鼠腹股溝處，力量經(jīng)推拿手法測試儀測定約為1kg，持續(xù)30s左右，然后緩慢抬手，停止按壓，即“快按緩放”。如此操作3次。以上治療方法每日早晚操作2次，共治療8周。

2.2.2藥物組將實驗大鼠仰臥，捆綁固定，每日1次，每次10min。根據(jù)人與動物體表面積計算法換算注射彌可保，大鼠用藥量為50μg/kg，隔日注射于下肢肌肉，左右腿交替注射，以利于吸收，共治療8周。

2.2.3對照組和模型組將實驗大鼠仰臥，捆綁固定，每日1次，每次10min，共8周。

2.3檢測指標及方法將實驗大鼠治療8周后尾靜脈取血以檢測血糖。以電子秤稱取每只大鼠體重后，腹腔注射10%水合氯醛(350mg/kg)進行麻醉，將大鼠俯臥固定于固定架上，暴露出坐骨神經(jīng)，用無菌玻璃剝離器輕輕剝離坐骨神經(jīng)并游離下來，應用生物信號采集處理系統(tǒng)，測得坐骨神經(jīng)傳導速度，然后迅速將坐骨神經(jīng)放入液氮中，放入-70℃冰箱中存放，以備勻漿使用。

2.4數(shù)據(jù)整理分析數(shù)據(jù)采用SPSS17.0軟件包統(tǒng)計，計量資料用均數(shù)±標準差表示，多組均數(shù)之間的比較應用方差分析，等級資料組間比較應用秩和檢驗，P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

3結(jié)果

3.1大鼠坐骨神經(jīng)傳導速度(SNCV)由表1可知，模型組與對照組比較，坐骨神經(jīng)傳導速度差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，證明實驗造模成功。推拿組與模型組比較，坐骨神經(jīng)傳導速度差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，藥物組與模型組比較，坐骨神經(jīng)傳導速度差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，提示推拿“束悗療法”和藥物療法能夠有效改善DPN大鼠的坐骨神經(jīng)傳導速度；推拿組與藥物組比較，坐骨神經(jīng)傳導速度差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表1　束悗療法對坐骨神經(jīng)傳導速度的影響　±s)

注：與對照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，★★P<0.01。

3.2大鼠坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)表達由表2可知，模型組與對照組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)表達差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，證明實驗造模成功。推拿組與模型組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)表達差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，藥物組與模型組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)表達差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，提示推拿療法和藥物療法能夠有效提高坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)表達；推拿組與藥物組比較，坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)表達差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

表2　束悗療法對坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮

注：與對照組比較，▲P<0.05，▲▲P<0.01；與模型組比較，★★P<0.01。

4討論

束悗療法是傳統(tǒng)的推拿操作手法[1]，其最早記載見于《內(nèi)經(jīng)》，在《靈樞·雜病篇》中記載：“痿厥為四末束悗，乃疾解之，日二，不仁者，十日而知，無休，病已止”。主要的意思是在治療痿厥癥病人時，將患者四肢捆綁起來，待其產(chǎn)生憋悶脹痛感覺后，迅速解開，每天治療兩次，原本四肢沒有知覺的患者在治療十天之后就會產(chǎn)生知覺，這種治療方法不要停止，直到患者痊愈為止?？梢?，束悗療法中的“束”，意為約束，束縛；“悗”，《辭?！方忉尀椤盁灐保鹅`樞·五亂》中記載有“清濁相干，亂于胸中，是謂大悗”。由此引申束悗具有約束阻滯之意。《靈樞集注》中曾批注“夫按之束之，皆導引之法，猶尺蠖之欲伸而先屈也”?？梢?，在治療氣機不暢、麻痹不仁的病癥時，可以在四肢脈位運用束悗按抑的手法，達到通郁開閉、導氣通達的治療目的。然而，現(xiàn)代推拿臨床中，源于中醫(yī)傳統(tǒng)古籍的束悗療法卻鮮有應用，僅散見于個別理論性的文獻探討中[2]。

現(xiàn)代醫(yī)學認為，糖尿病性周圍神經(jīng)病變(DPN)的病理表現(xiàn)一是營養(yǎng)神經(jīng)的血管出現(xiàn)病變，表現(xiàn)為毛細血管的內(nèi)皮細胞增生或基底膜增厚；二是神經(jīng)本身出現(xiàn)病變，主要表現(xiàn)為神經(jīng)纖維軸索的損傷或構(gòu)成髓鞘或神經(jīng)內(nèi)膜的施萬細胞的變性壞死[3-4]。中醫(yī)則認為，DPN屬于“痹證”、“痿證”之范疇，多由于氣虛失運、血虛不榮、痰瘀阻滯或風濕痹阻等原因?qū)е戮植垦骶徛?，瘀阻脈道，皮肉經(jīng)脈失去氣血濡養(yǎng)而痿廢不用[5-6]。這與糖尿病性周圍神經(jīng)病變(DPN)所表現(xiàn)出來的臨床癥狀是相吻合的。課題組曾在臨床上以“束悗療法”輔助治療糖尿病性周圍神經(jīng)病變并取得滿意療效[1]。

鏈脲佐菌素(STZ)是一種廣譜抗菌素，具有抗菌、抗腫瘤的功效，還對胰島β細胞高度選擇性的毒性而具有致糖尿病的副作用[7-9]。同時，由于STZ對組織毒性相對較小，動物存活率高，是國內(nèi)外經(jīng)常使用的制備糖尿病動物模型的成熟方法。神經(jīng)電生理檢查是早期診斷糖尿病并發(fā)周圍神經(jīng)病變的敏感指標，神經(jīng)傳導速度減慢是糖尿病出現(xiàn)神經(jīng)病變的一個先兆，常常用于評價臨床療效與預后情況。運動神經(jīng)傳導速度(SNVC)反映坐骨神經(jīng)運動的功能狀態(tài)，是DPN最常用的觀察指標。血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)是本來血管新生的主要調(diào)控因子，并具有神經(jīng)方面的作用[10-11]，主要表現(xiàn)為延伸軸突、增加神經(jīng)元、促進神經(jīng)再生、促進神經(jīng)內(nèi)血管形成、提高衛(wèi)星細胞及雪旺氏細胞的存活率等[12-14]。因此，神經(jīng)組織內(nèi)VEGF含量的多少能夠直接反應神經(jīng)組織的微循環(huán)與損傷修復狀態(tài)?；诖?，課題組采用腹腔注射STZ的方法制備DPN大鼠模型并觀測坐骨神經(jīng)SNVC和VEGF作為療效判定指標。

研究結(jié)果表明，傳統(tǒng)推拿“束悗療法”能夠有效改善DPN實驗大鼠下肢坐骨神經(jīng)的神經(jīng)傳導速度(SNVC)，提高坐骨神經(jīng)中血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)的含量，從而對DPN大鼠的周圍神經(jīng)功能恢復起到有效的治療作用且療效與注射藥物彌可保相持平。然而“束悗療法”具有操作簡便、安全、無毒副作用等其他任何藥物無法具備的臨床優(yōu)勢，為傳統(tǒng)推拿“束悗療法”的推廣普及奠定實驗室基礎。

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Experimental study on the traditional Tuina therapy of ShuMan in the prevention and treatment of diabetic peripheral neuropathy

SHANG KunLIU MingjunCHEN FeitengLI BoWANG LeiCHEN LinqingLI YuezongZHANG Xin

Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,China

Abstract:Objective Observation the effect on the traditional Tuina therapy of ShuMan in the prevention and treatment of the rats of diabetic peripheral neuropathy. Method 80 rats were randomly divided into the control group, model group, Tuina group and drug group. The peritoneal injection of STC was used to prepare the rats of diabetic peripheral neuropathy. The SNCV of the sciatic nerve and the VEGF in the sciatic nerve were observed．Results In the SNVC detection, The control group compared with the model group, SNVC showed a significant difference(P<0.01), the tuina group compared with the model group, SNVC showed a significant difference(P<0.01), the drug group compared with the model group, SNVC showed a significant difference(P<0.01), the tuina group compared with the drug group, there was no significant difference in SNVC (P>0.05); in the VEGF detection, The control group compared with the model group, VEGF showed a significant difference(P<0.01), the tuina group compared with the model group, VEGF showed a significant difference(P<0.01), the drug group compared with the model group, VEGF showed a significant difference(P<0.01), the tuina group compared with the drug group, there was no significant difference in VEGF (P>0.05). Conclusion The traditional Tuina therapy of ShuMan can effectively improve the SNVC and the content of VEGF of lower limb sciatic nerve of DPN rats and plays a role in the treatment of the rats of diabetic peripheral neuropathy. The tuina therapy and the drug therapy has the same effect. But the the traditional Tuina therapy of ShuMan is safe, simple, no side effects, is worth popularizing in clinic.

Key words:Tuina; ShuMan; Diabetic peripheral neuropathy; Experimental; Research

(收稿日期：2016.01.09)

【中圖分類號】R244.1

【文獻標志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)06-0037-03

作者簡介：尚坤(1978-)，女，吉林延吉人，博士，副教授，碩士研究生導師，主要從事神經(jīng)系統(tǒng)疾病的中醫(yī)藥治療。通信作者：張欣(1976-)，男，吉林長春人，博士，在站博士后，副教授，碩士研究生導師，主要從事中醫(yī)手法治未病的臨床與機理研究。E-mail：1147346490@qq.com

基金項目：吉林省中醫(yī)藥管理局科學技術基金項目(2014-Q31)；吉林省教育廳高?？茖W技術研究規(guī)劃項目。