徐 國，代振江，曾智勇，葉百川，劉 釗（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

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一例由PCV2感染引起母豬產(chǎn)木乃伊胎的診斷報(bào)告

徐 國，代振江，曾智勇*，葉百川，劉 釗
（貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，貴州 貴陽 550025）

豬圓環(huán)病毒病感染是指由豬圓環(huán)病毒(PCV)引起的豬的一種傳染病，其主要臨床特征為母豬繁殖障礙、體質(zhì)下降、消瘦、呼吸困難、貧血、黃疸、生長發(fā)育不良、腹瀉、內(nèi)臟器官及皮膚的廣泛病理變化，特別是腎、脾臟及全身淋巴結(jié)的高度腫大、出血和壞死[1]。PCV分為PCV1和PCV2兩個(gè)血清型，PCV2危害極大。豬圓環(huán)病毒自2000年由郎洪武等[2]在國內(nèi)首次報(bào)道以來，全國各省(市)先后有PCV2 感染病例報(bào)道 。豬圓環(huán)病毒病在世界范圍內(nèi)廣泛流行，給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大危害，由PCV2引起的母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等繁殖障礙疾病更應(yīng)引起重視[3]。

2015年11月貴州省貴陽市某種豬場發(fā)生一起母豬繁殖障礙，送檢的同窩胎兒既有木乃伊胎，也有死胎。據(jù)送檢豬場描述的臨床特征，初步判斷與病毒感染有關(guān)。為篩查具體病原，實(shí)驗(yàn)室對送檢木乃伊及死胎的組織混合樣品分別對豬JEV(日本乙型腦炎病毒)、PPV (豬細(xì)小病毒)、CSFV(豬瘟病毒)、PRRSV (豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒)、PRV (豬偽狂犬病毒)和 PCV2(豬圓環(huán)病毒2型)6種常見病毒進(jìn)行了病原核酸檢測，現(xiàn)將相關(guān)檢測及結(jié)果報(bào)道如下。

1　?材料

1.1病料

分別采自送檢同窩木乃伊胎、死胎的組織混合病料(心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)等臟器和腦組織)，見圖1。

圖1　同窩送檢胎兒

1.2主要試劑

TakaRa Mini BEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver 4.0、Prime Script One Step RTPCR Kit Ver.2.0、DL2000；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

2　?方法

2.1病料的處理及核酸的提取

采集送檢胎兒組織混合樣品，碾磨勻漿，反復(fù)凍融3次之后，12 000r/ min離心10 min，取上清，用TakaRa Mini BEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver 4.0試劑盒提取核酸。

2.2引物合成

相關(guān)引物為由本實(shí)驗(yàn)室所保存的參考據(jù)GenBank中關(guān)于PCV2、CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV序列設(shè)計(jì)并合成的特異性引物[4]。

2.3病原核酸檢測

參照一步法RT-PCR試劑盒說明書，對PCV2、CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV進(jìn)行檢測。反應(yīng)總體系為50 μL ：2×1 Step Buffer 25 μL，模板7.0 μL，上下游引物各1.0 μL，Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 μL，Release Free H2O 14 μL；反應(yīng)條件均為：95 ℃5 min；94 ℃ 30 s，57 ℃ 30 s，72 ℃30 s，35個(gè)循環(huán)；72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

3　結(jié)果

通過對送檢樣品進(jìn)行病原核酸檢測，結(jié)果見圖2。電泳結(jié)果顯示CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV的檢測結(jié)果均為陰性；對PCV2檢測結(jié)果為陽性，擴(kuò)增條帶與預(yù)期的353bp擴(kuò)增片段相符，表明送檢死胎可能存在PCV2感染。

圖2　病原檢測結(jié)果

4　?討論

PCV2、PPV、PRV、CSFV、PRRSV和JEV等都是引起母豬繁殖障礙疾病的主要因素。根據(jù)母豬繁殖障礙的特征，通常木乃伊胎更多的會(huì)考慮PPV(一般木乃伊胎的長度小于17 cm)和JEV(木乃伊胎大小不等) 這2種病毒，此外PRRSV、PRV也可見木乃伊胎，但更多是流產(chǎn)和產(chǎn)死胎，有資料顯示，PCV2感染豬只后引起的繁殖障礙癥狀主要為流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎增多、斷奶前死亡率上升等[5]。本次病原篩查PCV2呈陽性，該豬場發(fā)生的母豬繁殖障礙可能由PCV2引起。所以，養(yǎng)豬場應(yīng)該對PCV2引起高度重視。據(jù)述，此次送檢病樣的豬場已對PCV2、PPV、PRV、CSFV、PRRSV和JEV進(jìn)行了免疫，但未進(jìn)行相應(yīng)的抗體監(jiān)測，而本次病原篩查結(jié)果也間接表明該豬場PCV2免疫失敗。免疫失敗的原因是多方面的，如疫苗的接種途徑、用法用量和效價(jià)，動(dòng)物應(yīng)激，遺傳因素，患免疫抑制疾病等。所以，養(yǎng)豬場應(yīng)從多方面查找免疫失敗的原因，采取措施提高抗體免疫水平，并定期進(jìn)行疫苗免疫抗體水平的監(jiān)測。引起母豬繁殖障礙疾病既有傳染性因素，也有非傳染性疾病因素，因此，建議發(fā)生該病的養(yǎng)豬場從飼養(yǎng)管理方式、飼料搭配、環(huán)境設(shè)施等多方面進(jìn)行改進(jìn)，使母豬繁殖障礙得到有效控制，提高母豬繁殖生育力，增加養(yǎng)豬生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益。

參考文獻(xiàn)

[1]陳溥言，獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].5版，北京：中國農(nóng)業(yè)出版社，2010.231.

[2]郎洪武，張廣川，吳發(fā)權(quán)，等.斷奶豬多系統(tǒng)衰弱綜合征血清抗體檢測[J].中國獸醫(yī)科技，2000，30(3)：3-5.

[3]劉金鑫，孫孟嬌，陳磊，等.豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J].動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2012，33(2)：94-97.

[4]ZENG Z，LIU Z，WANG W，et al.Establishment and application of a multiplex PCR for rapid and simultaneous detection of six viruses in swine[J].Journal of Virological Methods，2014，208：102-106.

[5]宣長和，豬病學(xué)[M].3版，北京：中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社，2010.177.

通訊作者：曾智勇（1978—），男，教授，博士，碩士生導(dǎo)師，從事動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)研究:as.zyzeng@ gzu.edu.cn

[作者簡介]徐國（1988—），男，在讀碩士，研究方向：動(dòng)物傳染病病原分子生物學(xué)。E-mail:576144546@qq.com

[基金項(xiàng)目]省校合作計(jì)劃項(xiàng)目,黔科合LH字[2014]7670號(hào)