曹敬榮，陳　靜,2，高世超，陳典典，王培昌

(1 首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院，北京　100053； 2 江西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，江西 南昌　330201)

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·論著·

應(yīng)用通用引物PCR檢測(cè)診斷細(xì)菌和真菌性中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的價(jià)值

曹敬榮1，陳靜1,2，高世超1，陳典典1，王培昌1

(1 首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院，北京100053； 2 江西衛(wèi)生職業(yè)學(xué)院，江西 南昌330201)

[摘要]目的了解細(xì)菌和真菌性中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)感染病原譜，并探討通用引物聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)技術(shù)的病原學(xué)診斷價(jià)值。方法收集某院2009年1月—2015年3月疑似或確診CNS細(xì)菌或真菌性感染患者資料，分析其腦脊液培養(yǎng)病原菌種類，采用細(xì)菌16S rRNA和真菌28S rRNA通用引物對(duì)患者腦脊液DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增和序列測(cè)定，并與同期腦脊液培養(yǎng)及鑒定結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果共收集確診或疑似CNS細(xì)菌或真菌感染者400例，其中腦脊液培養(yǎng)陽(yáng)性132例。共分離病原菌150株，其中革蘭陽(yáng)性菌48株，革蘭陰性菌90株，真菌12株；居前3位的細(xì)菌為鮑曼不動(dòng)桿菌(32株)、凝固酶陰性葡萄球菌(16株)和肺炎克雷伯菌(13株)；最常見(jiàn)真菌為新生隱球菌(8株)。選取88份感染患者腦脊液標(biāo)本和20例非感染患者腦脊液進(jìn)行PCR擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增法靈敏度(35.23%，31/88)高于培養(yǎng)法(28.41%，25/88)(χ2=4.17，P<0.05)。PCR擴(kuò)增和培養(yǎng)法陰性預(yù)測(cè)值分別為25.97%、24.10%，兩種方法的特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均為100.00%。PCR擴(kuò)增測(cè)序與培養(yǎng)結(jié)果符合率為84.00%(21/25)；PCR檢測(cè)平均報(bào)告時(shí)間(48 h)較培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告時(shí)間(細(xì)菌平均約72 h，真菌平均約96 h)更快速。結(jié)論CNS 感染病原分布廣泛，以革蘭陰性菌為主；通用引物PCR檢測(cè)具有快速、靈敏、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，具有良好的臨床推廣和應(yīng)用價(jià)值。

[關(guān)鍵詞]中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染； 腦膜炎； 腦脊液； 顱內(nèi)感染； 病原體； 通用引物； 鑒定

[Chin J Infect Control，2016，15(3)：145-149]

中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)感染嚴(yán)重威脅人類健康，病死率和致殘率高。細(xì)菌性/真菌性腦膜(腦)炎是較常見(jiàn)的CNS感染，但其病原學(xué)確診常由于微生物培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)、陽(yáng)性率低、抗菌藥物的使用等原因而延誤[1-3]。準(zhǔn)確、快速的病原診斷是微生物實(shí)驗(yàn)室協(xié)助臨床正確治療的前提和關(guān)鍵，為此筆者對(duì)2009—2015年某院腦脊液培養(yǎng)病原譜進(jìn)行分析，并利用細(xì)菌/真菌通用引物對(duì)確診或疑似CNS細(xì)菌或真菌感染的患者腦脊液進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)檢測(cè)，探討通用引物PCR檢測(cè)技術(shù)對(duì)CNS感染病原學(xué)診斷的價(jià)值，探索早期、快速、準(zhǔn)確診斷CNS感染的新方法。

1材料與方法

1.1臨床資料回顧性分析首都醫(yī)科大學(xué)宣武醫(yī)院2009年1月—2015年3月神經(jīng)內(nèi)科、神經(jīng)外科和門診確診或疑似CNS細(xì)菌或真菌感染的病例，收集其腦脊液進(jìn)行培養(yǎng)，留存腦脊液1～2 mL置于-80℃保存。細(xì)菌/真菌CNS感染診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《醫(yī)院感染診斷標(biāo)準(zhǔn)(試行)》[4]中顱內(nèi)感染臨床診斷并稍作修改：符合下列條件之一即考慮CNS感染：(1)高熱、顱高壓癥狀(頭痛、嘔吐、意識(shí)障礙等)、腦膜刺激征(頸抵抗、角弓反張等)，并有腦脊液炎性改變(白細(xì)胞>10×106/L，葡萄糖<2.25 mmol/L，蛋白>0.45 g/L)；(2)腦脊液白細(xì)胞輕至中度升高或呈上升趨勢(shì)，經(jīng)抗菌藥物治療后癥狀體征消失、腦脊液恢復(fù)正常； (3)出現(xiàn)發(fā)熱、不典型顱高壓癥狀體征、腦脊液白細(xì)胞輕度增多，并具有下列情況之一：①腦脊液中抗特異性病原體的IgM達(dá)診斷標(biāo)準(zhǔn)，或IgG呈4倍升高，或腦脊液涂片找到細(xì)菌；②有顱腦侵襲性操作(如顱腦手術(shù)、顱內(nèi)穿刺、顱內(nèi)植入物)史，或顱腦外傷或腰椎穿刺史；③腦膜附近有感染灶(如頭皮切口感染、顱骨骨髓炎等)或有腦脊液漏者；④新生兒血培養(yǎng)陽(yáng)性。排除腦腫瘤、腦出血及其他致病微生物(如病毒等)所致顱內(nèi)感染，表現(xiàn)為發(fā)熱和細(xì)胞數(shù)升高病例。

1.2試劑與儀器PCR擴(kuò)增試劑，包括premix Taq酶、buffer、DL2000Marker等(大連寶生物公司)；QIAamp UCP Pathogen Mini Kit、Pathogen Lysis Tubes(L)和DNeasy Blood Mini Kit(Qiagen,Germany)；細(xì)菌和酵母菌DNA提取試劑盒(天根生化科技公司)。主要儀器為PCR儀(Veriti 9902, Applied Biosystems, USA)、電泳儀(北京六一儀器廠)、凝膠成像儀(U-Genius, Gene Company, UK)和VITEK 2 Compact自動(dòng)化鑒定儀(法國(guó)生物梅里埃公司)。引物合成和序列測(cè)定委托上海Inventrogen公司。

1.3基因組DNA提取凍存腦脊液室溫融化后取1 mL加入Pathogen Lysis Tube中，13 400 r/min離心5min，棄上清，加入試劑盒配套緩沖液ATL(含試劑DX)懸浮顆粒，渦旋振蕩器振蕩10 min，短暫離心，吸取400 μL上清液置于無(wú)菌EP管中，按試劑盒操作說(shuō)明提取DNA模板(20～100 μL)，置于-20℃保存?zhèn)溆谩?biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離菌株DNA提取按天根細(xì)菌和酵母菌DNA提取試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.4PCR擴(kuò)增及最低檢出限測(cè)定參照文獻(xiàn)[3,5]合成細(xì)菌和真菌通用引物，可涵蓋所有細(xì)菌和真菌(包括酵母菌及霉菌)。細(xì)菌通用引物序列為27F：5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’和1492R：5’-GGTTACCTTGTTACGACTT-3’；真菌通用引物序列為P1:5’-ATCAATAAGCGGAGGAAAAG-3’和P2：5’-CTCTGGCTTCACCCTATTC-3’與ITS1：5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’和ITS4：5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’。PCR反應(yīng)體積為25 μL，反應(yīng)體系為Premix Taq 12.5 μL，上下游引物各1 μL(濃度10 μmol/L)，模板DNA 5 μL，無(wú)菌雙蒸水5.5 μL。反應(yīng)條件參考文獻(xiàn)[3,5]進(jìn)行，PCR產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳(100 V，30 min)在紫外凝膠成像儀下成像觀察條帶，細(xì)菌和真菌目的條帶分別為1 500和500～800 bp。陽(yáng)性對(duì)照模板：細(xì)菌為大腸埃希菌ATCC 25922和金黃色葡萄球菌ATCC 25923，真菌為新生隱球菌ATCC 204092和白假絲酵母菌ATCC 10231菌懸液；陰性對(duì)照為無(wú)菌雙蒸水。最低檢出限檢測(cè):選取大腸埃希菌ATCC 25922和白假絲酵母菌ATCC 10231菌液10倍比稀釋，提取不同濃度菌液DNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，測(cè)試PCR擴(kuò)增陽(yáng)性所需最低樣本含菌量(CFU/mL)。

1.5病原菌鑒定采用VITEK 2 Compact自動(dòng)化鑒定儀鑒定病原體種屬；PCR產(chǎn)物測(cè)序后與Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行Blast比對(duì)，挑選最佳比對(duì)結(jié)果鑒定病原體種屬。

1.6統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件，采用χ2檢驗(yàn)對(duì)兩種檢測(cè)方法的陽(yáng)性率進(jìn)行比較，以P≤0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1病原菌種類共收集確診或疑似CNS細(xì)菌或真菌感染者400例，其中腦脊液培養(yǎng)陽(yáng)性132例，年齡17～90歲(平均54歲)，男女比例為3∶2。16例患者在不同時(shí)期分離出多株不同病原菌，未發(fā)現(xiàn)同一份標(biāo)本混合感染者。共分離病原菌150株，其中革蘭陽(yáng)性菌48株，革蘭陰性菌90株，真菌12株；居前3位的細(xì)菌為鮑曼不動(dòng)桿菌、凝固酶陰性葡萄球菌和肺炎克雷伯菌；最常見(jiàn)真菌為新生隱球菌。詳見(jiàn)表1。

表1　腦脊液分離病原菌種類及構(gòu)成

2.2PCR擴(kuò)增與培養(yǎng)陽(yáng)性率比較選取88份感染患者腦脊液標(biāo)本和20例非感染患者腦脊液進(jìn)行PCR擴(kuò)增，結(jié)果31份陽(yáng)性，其中細(xì)菌25株，真菌6株；同期腦脊液培養(yǎng)陽(yáng)性者25份，分離細(xì)菌21株，真菌4株。20例非感染患者腦脊液，以及陰性對(duì)照(無(wú)菌雙蒸水)結(jié)果均為陰性。PCR擴(kuò)增法靈敏度為35.23%(31/88)，高于培養(yǎng)法的28.41%(25/88)(χ2=4.17，P<0.05)。PCR擴(kuò)增和培養(yǎng)法陰性預(yù)測(cè)值分別為25.97%、24.10%，兩種方法的特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值均為100.00%。詳見(jiàn)表2。4例細(xì)菌培養(yǎng)陰性者經(jīng)PCR檢測(cè)，結(jié)果為人蒼白桿菌2例，銅綠假單胞菌和大腸埃希菌各1例。臨床使用抗菌藥物(人蒼白桿菌改用左氧氟沙星聯(lián)合阿米卡星，銅綠假單胞菌和大腸埃希菌應(yīng)用美羅培南)治療后，3例患者臨床癥狀緩解，1例感染人蒼白桿菌腦膿腫患者最后因發(fā)生腦疝死亡。

表2腦脊液PCR擴(kuò)增與培養(yǎng)法比較

Table 2Comparison between PCR amplification and culture method of CSF

分組PCR檢測(cè)陽(yáng)性陰性培養(yǎng)法陽(yáng)性陰性合計(jì)病例3157256388對(duì)照02002020合計(jì)31772583108

2.3PCR檢測(cè)時(shí)間與最低檢出限PCR檢測(cè)時(shí)間約6 h，測(cè)序結(jié)果平均報(bào)告時(shí)間約48 h，短于培養(yǎng)結(jié)果報(bào)告時(shí)間(細(xì)菌平均約72 h，真菌平均約96 h)。PCR檢測(cè)大腸埃希菌ATCC 25922的最低檢測(cè)限為1.5×101CFU/mL，白假絲酵母菌ATCC 10231為1.5×102CFU/mL。

2.4PCR測(cè)序鑒定PCR擴(kuò)增測(cè)序結(jié)果與培養(yǎng)鑒定結(jié)果的符合率為84.00%(21/25)，包括新生隱球菌5株，鮑曼不動(dòng)桿菌4株，肺炎克雷伯菌3株，金黃色葡萄球菌、白假絲酵母菌和大腸埃希菌各2株，馬耳他布魯桿菌、溶血葡萄球菌和肺炎鏈球菌各1株。不符合的4例分別為：新生隱球菌測(cè)序鑒定為格特隱球菌，羅倫特隱球菌測(cè)序鑒定為白假絲酵母菌，鮑曼醋酸鈣不動(dòng)桿菌復(fù)合體測(cè)序鑒定為鮑曼不動(dòng)桿菌，新生隱球菌測(cè)序鑒定為新生隱球菌格魯比變種。

3討論

CNS感染的病原菌以往以革蘭陽(yáng)性菌為主，隨著抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，腦脊液培養(yǎng)的病原菌種類亦在發(fā)生變化[6-9]。本組分離的150株菌中革蘭陽(yáng)性菌占60.00%，革蘭陰性菌占32.00%，真菌占8.00%，共27個(gè)種屬，居前5位的細(xì)菌分別為鮑曼不動(dòng)桿菌、凝固酶陰性葡萄球菌、肺炎克雷伯菌、金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌，與報(bào)道[6]不同。可能與本研究入選對(duì)象多為住院術(shù)后顱內(nèi)感染患者，多已接受過(guò)抗菌藥物治療有關(guān)。本組CNS感染患者分離病原體最常見(jiàn)的真菌為新生隱球菌和白假絲酵母菌，表明CNS感染病原體種類較多，革蘭陰性細(xì)菌上升趨勢(shì)明顯，臨床應(yīng)關(guān)注其病原譜的變化，合理選擇抗菌藥物，防止耐藥菌的發(fā)生與傳播。

CNS感染加大了臨床治療難度，延長(zhǎng)了患者住院時(shí)間，并影響預(yù)后，因此，早期正確的診斷和及時(shí)有效的抗菌治療非常重要。目前，傳統(tǒng)的病原學(xué)培養(yǎng)仍是診斷CNS感染的重要手段。本組PCR檢測(cè)敏感度(35.23%)高于培養(yǎng)法(28.41%)，同以往研究結(jié)果一致[1-3]。本組PCR法和培養(yǎng)法陽(yáng)性預(yù)測(cè)值和特異度均為100%，在臨床診斷基礎(chǔ)上PCR或培養(yǎng)出病原體均可明確感染。4例培養(yǎng)陰性者臨床均有感染相關(guān)指征，如發(fā)熱、頭痛等癥狀，腦脊液渾濁或膿性，腦脊液壓力升高、細(xì)胞總數(shù)和中性粒細(xì)胞數(shù)或淋巴細(xì)胞數(shù)增高，腦脊液葡萄糖和氯化物下降、蛋白升高等；PCR檢測(cè)為陽(yáng)性，測(cè)序結(jié)果為人蒼白桿菌2例、銅綠假單胞菌和大腸埃希菌各1例；臨床進(jìn)行抗菌藥物治療后，3例患者好轉(zhuǎn)。培養(yǎng)陽(yáng)性率較低的原因可能為培養(yǎng)所需菌量多、敏感性差，臨床抗菌藥物的應(yīng)用抑制了細(xì)菌生長(zhǎng)，標(biāo)本采集和運(yùn)送過(guò)程等外界因素影響細(xì)菌的存活等。Rajesh等[1]研究發(fā)現(xiàn)，腦脊液放置2、4 h后培養(yǎng)假陰性比率分別為52.6%和78.9%。本組結(jié)果顯示，PCR檢測(cè)細(xì)菌最低檢出限為1.5×101CFU/mL，真菌為1.5×102CFU/mL，敏感性高于培養(yǎng)法(105/mL)[10]。另外，PCR檢測(cè)不受使用抗菌藥物的影響[10]，活菌死菌均可檢測(cè)，尤其對(duì)于苛養(yǎng)菌、難培養(yǎng)及鑒定的細(xì)菌或真菌均能準(zhǔn)確檢出，如本研究中苛養(yǎng)菌馬爾他布魯菌。病原學(xué)培養(yǎng)緩慢，報(bào)告所需時(shí)間長(zhǎng)。PCR方法縮短了報(bào)告時(shí)間，在早期診斷方面具有顯著優(yōu)勢(shì)[11-12]。

本組1例真菌培養(yǎng)經(jīng)VITEK 2 Compact鑒定為新生隱球菌，PCR測(cè)序結(jié)果為格特隱球菌[13]，可見(jiàn)分子方法較常規(guī)方法在區(qū)分表型及生化特征相近菌方面更準(zhǔn)確[14]。但16S rRNA為所有細(xì)菌共有，通用引物PCR擴(kuò)增時(shí)控制細(xì)菌污染是關(guān)鍵問(wèn)題。由于PCR檢測(cè)的敏感性高，整個(gè)檢測(cè)過(guò)程，包括標(biāo)本采集、DNA提取、PCR擴(kuò)增及測(cè)序分析等，一旦出現(xiàn)污染，可導(dǎo)致假陽(yáng)性誤導(dǎo)臨床，因此，必須設(shè)置陰性對(duì)照。本組所有標(biāo)準(zhǔn)菌株測(cè)序結(jié)果與GenBank中數(shù)據(jù)完全符合，雙蒸水?dāng)U增結(jié)果陰性，說(shuō)明PCR擴(kuò)增準(zhǔn)確無(wú)污染。而PCR法能否成功擴(kuò)增與樣本模板DNA含量相關(guān)，若DNA含量低，可導(dǎo)致假陰性而漏檢，因此，選擇合適的DNA提取方法，并獲得足量的模板DNA是PCR成功的關(guān)鍵[2,15]。

總之，細(xì)菌/真菌性CNS感染病原菌種類眾多，臨床應(yīng)關(guān)注腦脊液中病原譜的變化。使用通用引物PCR檢測(cè)較傳統(tǒng)培養(yǎng)方法更快速、準(zhǔn)確、靈敏，在診斷細(xì)菌或真菌性CNS感染時(shí)可結(jié)合多種檢測(cè)手段，提高檢測(cè)陽(yáng)性率，為臨床早期診斷、及時(shí)治療提供病原學(xué)依據(jù)。

[參 考 文 獻(xiàn)]

[1]Rajesh NT, Dutta S, Prasad R, et al. Effect of delay in analysis on neonatal cerebrospinal fluid prameters[J]. Arch Dis Child Fetal Neonatal Ed, 2010,95(1):F25-F29.

[2]梁志娟，侯曉霖，王振海，等.細(xì)菌性腦膜炎患者腦脊液細(xì)菌基因組DNA的提取及16S rDNA的鑒定[J].華中科技大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版) [J].2013，42(3)：314-316.

[3]Sarookhani MR, Ayazi P, Alizadeh S, et al. Comparison of 16S rDNA-PCR amplification and culture of cerebrospinal fluid for diagnosis of bacterial meningitis[J].Iran J Pediatr, 2010, 20(4):471-475.

[4]中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部.醫(yī)院感染診斷標(biāo)準(zhǔn)(試行)[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2001,81(5):314-349.

[5]Sandhu GS, Kline BC, Stockman L, et al. Molecular probes for diagnosis of fungal infections[J]. J Clin Microbiol, 1995, 33(11): 2913-2919.

[6]侯勇，泮雙軍，羅魏敏，等.術(shù)后顱內(nèi)感染患者腦脊液病原菌檢測(cè)結(jié)果譜[J].浙江預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014,26(5)：494-496.

[7]曹敬榮，羅玲雁，閔 嶸，等. 外科感染患者標(biāo)本分離病原菌及耐藥性[J].中國(guó)感染控制雜志，2015,14(1)：48-51.

[8]李倩，武元星，唐明忠，等.神經(jīng)外科患者腦脊液病原菌分布及耐藥性變遷[J].中國(guó)感染控制雜志，2015,14(3)：159-165.

[9]范珊紅，許文，戈偉，等.神經(jīng)外科重癥監(jiān)護(hù)室MRSA醫(yī)院感染暴發(fā)分析[J].中國(guó)感染控制雜志，2015,14(4)：217-222.

[10] 陳群偉，潘宏儀，孫洪運(yùn)，等.抗生素應(yīng)用對(duì)16SrRNA基因芯片檢測(cè)腹水細(xì)菌的影響[J].國(guó)際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志，2012,39(2)：92-94.

[11] Kumar A, Asthana M, Gupta P,et al. 16S rRNA sequencing of dye decolorizing bacteria isolated from soil[J]. Bioinformation, 2015，11(1):1-5.

[12] Esparcia O, Montemayor M, Ginovart G, et al. Diagnostic accuracy of a 16S ribosomal DNA gene-based molecular technique (RT-PCR, microarray, and sequencing) for bacterial meningitis, early-onset neonatal sepsis, and spontaneous bacterial peritonitis[J]. Diagn Microbiol Infect Dis, 2011, 69(2):153-160.

[13] 竇紅濤，萬(wàn)喆，楊啟文，等. 格特隱球菌在河北地區(qū)引起1例腦膜炎的臨床與實(shí)驗(yàn)研究[J].中國(guó)真菌學(xué)雜志，2015,10(1)：11-14.

[14] Firacative C, Trilles L, Meyer W. MALDI-TOF MS enables the rapid identification of the major molecular types within theCryptococcusneoformans/C.Gattiispecies complex[J]. Plos One, 2012,7(5):e37566.

[15] Gage L, Scheel CM, Pham CD, et al. Detection of fungal DNA in human body fluids and tissues during a multistate outbreak of fungal meningitis and other infections[J]. Eukaryot Cell. 2013, 12(5): 677-683.

(本文編輯：周鵬程)

Value of universal primer PCR for diagnosing bacterial and fungal infection of central nervous system

CAOJing-rong1，CHENJing1,2，GAOShi-chao1，CHENDian-dian1，WANGPei-chang1

(1XuanwuHospitalofCapitalMedicalUniversity,Beijing100053,China； 2JiangxiHealthVocationalCollege,Nanchang330201,China)

[Abstract]ObjectiveTo understand pathogen spectrum of bacterial and fungal infection of central nervous system (CNS), and evaluate the etiological diagnostic value of universal primer polymerase chain reaction (PCR).MethodsData about patients with suspected or confirmed bacterial and fungal infection of CNS from January 2009 to March 2015 were collected, species of pathogens from cerebrospinal fluid (CSF) were analyzed, DNA from patients’ CSF were performed PCR amplification and sequencing with universal primers of bacterial 16S rRNA and fungal 28S rRNA, PCR detection results were compared with CSF culture during the same period.ResultsA total of 400 patients were with confirmed or suspected bacterial or fungal infection of CNS, 132 of whom were with positive CSF culture.150 pathogenic isolates were detected, including 48 isolates of gram-positive bacteria, 90 gram-negative bacteria, and 12 fungi; the top three isolated bacteria were Acinetobacter baumannii (n=32), coagulase negative staphylococcus (n=16) and Klebsiella pneumoniae (n=13); the most common fungus was Cryptococcus neoformans (n=8). CSF from 88 infected patients and 20 non-infected patients were selected for PCR amplification, the sensitive of PCR amplification assay was higher than the culture method (35.23% [31/88] vs 28.41%[25/88], χ2=4.17，P<0.05). Negative predictive value of PCR amplification assay and culture method were 25.97% and 24.10% respectively, the specificity and positive predictive value of two methods were both 100.00%. The coincidence rate of PCR amplification sequencing and culture result was 84.00%(21/25); the average reporting time of PCR (48 h) was more rapid than that of culture (72 h for bacteria and 96h for fungi).ConclusionPathogens of CNS infections are widely distributed and the main are gram-negative bacteria; universal primer PCR has the characteristics of rapid, high sensitivity, and accuracy, which has a good clinical popularization and application value.

[Key words]central nervous system infection; meningitis; cerebrospinal fluid; intracranial infection; pathogen; universal primer; identification

[中圖分類號(hào)]R446.14

[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼]A

[文章編號(hào)]1671-9638(2016)03-0145-05

DOI:10.3969/j.issn.1671-9638.2016.03.001

[作者簡(jiǎn)介]曹敬榮(1979-)，女(漢族)，河北省邢臺(tái)市人，主治醫(yī)師，主要從事臨床微生物檢驗(yàn)、細(xì)菌耐藥性及分子流行病學(xué)研究。[通信作者]王培昌E-mail: pcw1905@126.com

[基金項(xiàng)目]首都臨床特色應(yīng)用研究重點(diǎn)專項(xiàng)課題(Z141107002514012)

[收稿日期]2015-07-20