吳 濤,姚紅艷,莫本田,龍忠富,羅 充
(1.貴州師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽 550001; 2.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽 550025;
3.貴州省草業(yè)研究所,貴州 貴陽 550006)
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8種豆科灌木栽培種叢枝菌根真菌種類及分布
吳 濤1,姚紅艷2,莫本田3,龍忠富3,羅 充1
(1.貴州師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽 550001; 2.貴州大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽 550025;
3.貴州省草業(yè)研究所,貴州 貴陽 550006)
摘要:采集人工栽培決明(Cassia tora)、假木豆(Dendrolobium triangulare)、紫穗槐(Amorpha fruticosa)、白刺花(Sophora davidii)、豬屎豆(Crotalaria pallida)、多花木藍(lán)(Indigofera amblyantha)、木豆(Cajanus cajan)和銀合歡(Leucaena leucocephala)8種豆科灌木植物根際5-10、10-20和20-30 cm 3個(gè)土層的土樣,研究其根際叢枝菌根(AM)真菌的侵染率、孢子密度、種類及多樣性。結(jié)果表明,8種豆科灌木植物AM真菌侵染率普遍較高,最高的為豬屎豆,80.8%;土壤速效磷含量與侵染率呈顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.733,P=0.039);根際土壤中的AM真菌孢子主要分布于5-20 cm土層,5-10 cm土層豬屎豆孢子密度最大,為115.33個(gè)·10 g(-1)土壤;宿主植物種類與土壤層位對孢子密度交互效應(yīng)影響顯著(F=100.497,P<0.001);AM真菌優(yōu)勢種楓香球囊霉(Glomus liquidambaris)、脆無梗囊霉(Acaulospora delicate)在8種豆科灌木植物的土壤中均有分布。本研究表明,喀斯特地區(qū)適生豆科灌木植物具有豐富的AM真菌資源,今后可以在喀斯特地區(qū)開展豆科灌木植物接種優(yōu)勢AM真菌和根瘤菌等相關(guān)研究,這將對農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)和退化生態(tài)系統(tǒng)修復(fù)效應(yīng)的影響具有重要意義。
關(guān)鍵詞:豆科灌木植物;叢枝菌根真菌;侵染率;多樣性
叢枝菌根(Arbuscular Mycorrhiza,AM)真菌能與絕大多數(shù)陸生高等植物根系形成共生體系[1],該共生體系能夠促進(jìn)宿主植物生長發(fā)育、改善土壤理化性狀、促進(jìn)生態(tài)系統(tǒng)養(yǎng)分循環(huán),提高植物對病害、貧瘠、鹽脅迫、鋁毒及重金屬污染的抗性[2-5]。研究發(fā)現(xiàn),豆科植物根際土壤中存在大量的AM真菌資源,在它們的長期進(jìn)化過程中與豆科植物形成了“AM真菌-豆科植物-根瘤菌”的共生關(guān)系[6-7]。因此,通過利用菌根系統(tǒng)獨(dú)特的生理生態(tài)功能,豆科植物與菌根技術(shù)相結(jié)合被廣泛應(yīng)用于植樹造林、礦區(qū)植被的恢復(fù)和退化生態(tài)系統(tǒng)的植被重建等方面[8-11]。
在喀斯特地區(qū),隨著石漠化現(xiàn)象日趨嚴(yán)重,對植物的生長發(fā)育影響嚴(yán)重,同時(shí)給石漠化治理帶來很大困難,石漠化已成為喀斯特地區(qū)最嚴(yán)重的地質(zhì)災(zāi)害和生態(tài)災(zāi)害[12]。在喀斯特地區(qū)石漠化生態(tài)修復(fù)過程中,豆科灌木利用其植株的高大,耐貧瘠,營養(yǎng)豐富,抗逆性和適應(yīng)性強(qiáng)的特點(diǎn),成為了在該地區(qū)農(nóng)林牧業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)治理的寶貴植物資源,在該地區(qū)畜牧業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)恢復(fù)方面被廣泛的推廣應(yīng)用。豆科植物可以同時(shí)與根瘤菌及AM真菌良好共生,接種AM真菌和根瘤菌能在一定程度上促進(jìn)宿主植物的生長,提高植物抗逆性和抗病性[13-17],對豆科植物的生存競爭十分有利。目前國內(nèi)外針對豆科灌木的AM真菌研究,主要集中于資源分布以及宿主植物接種效應(yīng)和礦區(qū)修復(fù)等方面[6-17],而針對喀斯特地區(qū)適生豆科灌木的AM真菌資源方面的研究較少。因此,本研究選擇在喀斯特地區(qū)推廣利用價(jià)值較高的人工栽培決明(Cassiatora)、假木豆(Dendrolobiumtriangulare)、紫穗槐(Amorphafruticosa)、白刺花(Sophoradavidii)、豬屎豆(Crotalariapallida)、多花木藍(lán)(Indigoferaamblyantha)、木豆(Cajanuscajan)、銀合歡(Leucaenaleucocephala)8種豆科灌木植物,調(diào)查其AM真菌資源,希望對該8種豆科灌木植物在喀斯特地區(qū)農(nóng)林牧業(yè)生產(chǎn)和生態(tài)治理方面具有積極作用,對輔助喀斯特地區(qū)石漠化治理有重要價(jià)值。
1材料與方法
1.1材料
2013年9月在貴州省草業(yè)研究所金竹試驗(yàn)基地(26°30′36.38″ N、106°39′20.14″ E,海拔1 148.7 m)采樣,土壤類型為黃壤,該區(qū)域?qū)儆诟咴撅L(fēng)濕潤氣候,雨量充沛,濕度較大,年平均氣溫為12~15 ℃,年降水量1 000~1 200 mm。8種豆科植物根際土壤及毛細(xì)根按照“五點(diǎn)采樣法”進(jìn)行采集,選取長勢良好的植株,首先去除土壤5 cm的表層雜物,按5-10、10-20和20-30 cm分層收集根際土壤1~2 kg,分別裝入采集袋并標(biāo)注標(biāo)簽,土壤樣品風(fēng)干后經(jīng)0.5 mm篩保存,從每層土樣中各取200 g土壤混勻保存進(jìn)行理化分析備用。同時(shí)收集各種豆科植物的根樣,放入裝有標(biāo)準(zhǔn)固定液(FAA固定液)密封袋并標(biāo)注標(biāo)簽,放入自制冰盒中帶回實(shí)驗(yàn)室置于4 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>
1.2試驗(yàn)方法及相關(guān)計(jì)算
1.2.1AM真菌侵染率統(tǒng)計(jì)方法取出根樣,將其剪成1 cm長的小段。采用堿解離酸性品紅染色法觀測菌根侵染情況,步驟采用Komanik等[18]的方法:凈化、清洗、酸化、染色、脫色、制片、鏡檢。根段染色之后,在顯微鏡下觀察每條根段的侵染情況和菌絲體形態(tài),根據(jù)每條被侵染形成菌根的根段長度占根段總長度的百分比,按照0、10%、20%、……、100%估算每條根段的侵染率,共統(tǒng)計(jì)100根,重復(fù)3次。鏡檢統(tǒng)計(jì)侵染程度并按以下公式計(jì)算侵染率:
菌根侵染率=[∑(0×根段數(shù)+10%×根段數(shù)+20%×根段數(shù)+30%×根段數(shù)+……+100%×根段數(shù))/觀察總根段數(shù)]×100%。
根據(jù)菌根侵染率的高低將其分為5個(gè)等級:1級(0≤侵染率 1.2.2AM真菌孢子分離與鑒定方法取10 g風(fēng)干土壤,用濕篩傾析-蔗糖離心法分離AM真菌孢子[19];將選取的孢子置于顯微鏡下根據(jù)顏色、大小、形態(tài)和紋飾等進(jìn)行分類。鑒定中輔助使用Melzer’s試劑,觀察孢子的特異反應(yīng)。綜合以上觀察結(jié)果,根據(jù)Scheck的“VA菌根鑒定手冊”和國際叢枝菌根真菌保藏中心(INVAM)在Internet上http://invam.caf.wvu.edu提供的種的描述及圖片[20],并參閱有關(guān)鑒定材料和近年來發(fā)表的新種的相關(guān)報(bào)道等進(jìn)行種屬檢索、鑒定。 1.2.3AM真菌孢子密度和多樣性相關(guān)指標(biāo)計(jì)算方法孢子密度(Spore Number,SN)指10 g土樣數(shù)中AM真菌的孢子個(gè)數(shù)[1]。SN=某土樣中AM真菌所有孢子數(shù)/土樣數(shù)。種豐度(Species Richness)指10 g土樣含有的AM真菌種數(shù)。分離頻度( Frequency,F)指AM某屬或種在樣本總體中出現(xiàn)的頻度,F(xiàn)=(AM真菌某屬或種出現(xiàn)的次數(shù)/土樣數(shù))×100%。相對多度(Relative Abundance,RA)指該采樣點(diǎn)AM真菌某屬或種的孢子數(shù)占總孢子數(shù)的比率,RA=(該采樣點(diǎn)AM真菌某屬或種的孢子數(shù)/該采樣點(diǎn)AM真菌總孢子數(shù))×100%。將AM真菌的優(yōu)勢度按分離頻度(F)分為5個(gè)等級: F>80%為優(yōu)勢屬(種),60% 本研究的物種多樣性指數(shù)采用Shannon-Wiener指數(shù)(H)來描述,其公式如下: 式中,S為土樣中AM真菌的種類數(shù),Pi為種i所占的比例,H用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。 1.2.4AM真菌孢子根際土壤理化分析方法土壤全氮、水解氮、全磷、速效磷、全鉀、速效鉀、有機(jī)質(zhì)、pH按《土壤農(nóng)化分析與環(huán)境監(jiān)測》所述方法進(jìn)行測定[21]。 1.3數(shù)據(jù)分析 采用Excel軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)整理,SPSS17.0軟件進(jìn)行相關(guān)性分析、單因素方差分析、多因素方差分析、主成分分析。 2結(jié)果 2.1宿主植物土壤環(huán)境與菌根侵染率分析 利用SPSS17.0軟件對8個(gè)樣地8個(gè)土壤因子進(jìn)行主成分分析,根據(jù)相關(guān)矩陣特征值大于1,方差累計(jì)貢獻(xiàn)率大于75%的原則,選擇兩個(gè)主成分。結(jié)果表明,選擇兩個(gè)主成分累積方差貢獻(xiàn)率為78.888%(表1),能基本反映土壤因子的指標(biāo)信息。第一主成分中,全鉀具有較高載荷(權(quán)重為-0.357),第二主成分中,速效磷具有較高載荷(權(quán)重為0.398)。對菌根侵染率與根際土壤速效磷、全鉀進(jìn)行相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)(表2),速效磷的含量與侵染率存在顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.733,P=0.039),全鉀與侵染率沒有表現(xiàn)出顯著相關(guān)性。8種不同豆科灌木植物根系均發(fā)現(xiàn)被AM菌根侵染(表3),且菌根侵染率普遍較高,侵染等級多為4、5級,8種豆科灌木植物的菌根侵染率平均為64.26%,其中侵染率最高的為豬屎豆80.8%,侵染等級5級;最低為假木豆47.4%,侵染等級4級。8種豆科灌木植物中泡囊和菌絲是AM真菌侵染的主要形式如圖1所示。 表1 主成分載荷矩陣、特征值和貢獻(xiàn)率 2.2豆科植物AM真菌孢子鑒定與AM真菌多樣性 2.2.1AM真菌孢子密度不同宿主植物中AM真菌孢子密度存在差異,不同宿主植物的AM真菌孢子密度最大值也存在差異,5-10 cm土層中豬屎豆的AM真菌孢子密度顯著高于同層其它植物(P<0.05),為115.33個(gè)·10 g-1土壤(表4);10-20 cm土層中紫穗槐的AM真菌孢子密度顯著高于其它植物,為101.33個(gè)·10 g-1土壤;20-30 cm土層中白刺花的AM真菌孢子密度顯著高于其它植物的(P<0.05),為69.67個(gè)·10 g-1土壤。多因素方差分析發(fā)現(xiàn),宿主植物與土壤層位對孢子密度交互效應(yīng)顯著(F=100.497,P<0.001,表5),進(jìn)一步通過簡單效應(yīng)檢驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn):同一土層不同宿主植物對孢子密度影響顯著;宿主植物多花木藍(lán)的不同土層對孢子密度影響不顯著(F=2.178,P>0.05),其它宿主植物不同土層對孢子密度的影響顯著(P<0.05)。 表2 侵染率與土壤理化性質(zhì)相關(guān)性分析 注:**和*分別表示在0.01和0.05水平上顯著相關(guān)。 Note: ** and * are significant correlation at 0.01 and 0.05 level, respectively. 表3 8種植物菌根侵染率 2.2.2AM真菌的種類及多樣性指數(shù)本研究共分離、鑒定出AM真菌孢子4個(gè)屬79種,球囊霉屬(Glomus)49種,無梗囊霉屬(Acaulospora)26種,多孢囊霉屬(Paraglomus)1種,盾巨孢囊霉屬(Scutelospora)3種。通過對各個(gè)層位土壤AM真菌種的豐度調(diào)查發(fā)現(xiàn)(表4),AM真菌種類最豐富的為紫穗槐10-20 cm土層(種豐度為31.33)和豬屎豆5-10 cm土層(種豐度為26.67)。在8種豆科植物根際土壤中分離出的AM真菌優(yōu)勢種能在4種豆科灌木植物以上均有分布,其中在5-20 cm土層,優(yōu)勢種楓香球囊霉(G.liquidambaris)、脆無梗囊霉(A.delicate)在7種植物中均有分布,在20-30 cm土層中8種植物均有分布(表6)。 8種植物的AM真菌各層的多樣性指數(shù)存在差異,其中AM真菌物種多樣性最豐富為紫穗槐10-20 cm土層(H=3.062);最低的為銀合歡20-30 cm土層(H=1.340)(表7)。從3個(gè)不同的土層分析,5-10cm土層的平均多樣性指數(shù)最高,則該土壤層AM真菌物種多樣性最豐富,隨著土壤深度的增加,平均多樣性指數(shù)在降低,物種多樣性減少。 圖1 AM真菌菌絲(H)、泡囊(V)(400×) 植物PlantspeciesAM真菌孢子密度AMFsporedensity/spore·10g-15-10cm10-20cm20-30cm種的豐度Speciesrichness5-10cm10-20cm20-30cm決明C.tora52.33±5.03bc32.00±2.65bc38.67±4.51b19.00±3.46ab12.67±2.52b12.33±1.52ab假木豆D.triangulare17.00±1.73d24.33±2.52c15.33±2.89c8.67±1.53b9.33±2.52b6.67±1.52b紫穗槐A.fruticosa63.33±3.51bc101.33±5.51a21.33±2.08c21.33±5.77ab31.33±4.04a11.33±2.52ab白刺花S.davidii47.67±4.04c45.33±1.53b69.67±6.43a15.00±3.61ab22.00±5.00ab19.67±4.51a豬屎豆C.pallida115.33±3.21a37.00±7.94bc17.00±2.65c26.67±7.51a19.33±7.09ab8.67±2.08b多花木藍(lán)I.amblyantha48.67±5.51c44.33±3.06b41.67±3.51b21.00±6.08ab16.00±3.61ab14.67±3.21ab木豆C.cajan48.67±5.69c31.33±4.73bc36.00±6.08b13.33±5.77ab11.33±5.13b15.33±4.04ab銀合歡L.leucocephala14.00±2.00d26.00±2.65c16.67±0.58c6.33±2.31b9.33±5.13b5.33±3.21b 注:同列不同小寫表示相同土層不同物種間差異顯著(P<0.05)。 Note:Different lower case letters within the same column mean significant difference among different species in the same soil depth at 0.05 level. 表5主體間的效應(yīng)檢驗(yàn) Table 5Tests of between-subjects effects 因變量Dependent variable:孢子密度Spore density 變異來源VariationsourceIII型平方和TypeIIIsumofsquaresdf均方MSFP校正模型Correctedmodel45092.542a231960.545114.0220.000截距Intercept126253.1251126253.1257342.6700.000土層Soillayers4281.33322140.667124.4980.000植物種類Plantspecies16619.43172374.204138.0800.000土層×植物種類Soillayer×Plantspecies24191.778141727.984100.4970.000誤差Error825.3334817.194總計(jì)Total17217172校正的總計(jì)Correctedtotal45917.87571 a,R2=0.982(調(diào)整AdjustedR2=0.973)。 3討論 AM真菌對宿主植物根的侵染率受宿主植物、土壤環(huán)境等諸多因素的影響[22-24]。本研究結(jié)果表明,8種人工栽培豆科植物AM真菌侵染率普遍較高,平均侵染率為64.26%,侵染率較高的為豬屎豆(80.80%)和多花木藍(lán)(80.20%)。不同宿主植物中AM真菌的侵染率存在差異,AM真菌侵染植物受到不同宿主植物所處的具體生境的影響較大,對宿主植物沒有嚴(yán)格的專一性[22-24]。通過主成分分析發(fā)現(xiàn),全鉀和速效磷是主要影響因子,經(jīng)過相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),AM真菌的侵染率與速效磷的含量存在顯著負(fù)相關(guān)(r=-0.733,P=0.039),與任愛天等[25]研究結(jié)果一致,表明AM真菌的侵染可以顯著改善低磷土壤中宿主植物對磷營養(yǎng)的吸收[26-27]。 8種豆科灌木植物AM真菌垂直分布存在差異,但AM真菌孢子分布主要集中于5-20 cm土層。豬屎豆與多花木藍(lán)的孢子密度變化規(guī)律表現(xiàn)為隨著土壤深度的增加而降低,這種變化規(guī)律與許偉等[28]、劉春卯等[29]研究結(jié)果一致,其中最大孢子密度位于5-10 cm土層,豬屎豆115.33個(gè)·10 g-1土壤;假木豆、紫穗槐、銀合歡的在5-20 cm土層孢子密度變化表現(xiàn)為當(dāng)土壤深度達(dá)到20 cm時(shí)達(dá)到峰值,10-20 cm土層中紫穗槐AM真菌孢子密度最大,為101.33個(gè)·10 g-1土壤;決明、白刺花、木豆的孢子密度則是隨著土壤深度的增加先降低后升高,20-30 cm土層中白刺花AM真菌孢子密度為69.67個(gè)·10 g-1土壤;通過效應(yīng)分析發(fā)現(xiàn),宿主植物種類與土壤層位交互效應(yīng)顯著,同一土層不同宿主植物和同一宿主植物不同土層對孢子密度影響顯著,以上結(jié)果表明,喀斯特地區(qū)豆科灌木植物能與AM真菌形成共生關(guān)系。 表7 8種植物AM真菌多樣性指數(shù) Table 7 The species diversity of arbuscular mycorrhizal fungi genera 植物Plantspecies土層Soillayer5-10cm10-20cm20-30cm決明C.tora2.620±0.162a2.108±0.109abc2.221±0.092ab假木豆D.triangulare1.993±0.170ab1.948±0.266bc1.706±0.169ab紫穗槐A.fruticosa2.663±0.266a3.062±0.108a2.148±0.246ab白刺花S.davidii2.292±0.205ab2.537±0.232abc2.476±0.201a豬屎豆C.pallida2.947±0.249a2.641±0.314ab1.998±0.221ab多花木藍(lán)I.amblyantha2.748±0.297a2.185±0.323abc2.353±0.216a木豆C.cajan2.176±0.384ab2.135±0.383abc2.478±0.312a銀合歡L.leucocephala1.488±0.417b1.492±0.549c1.340±0.483b 注:同列不同小寫表示差異顯著(P<0.05)。 Note:Different lower case letters in the same column mean significant difference at 0.05 level. 綜合3個(gè)不同的土層AM真菌孢子種豐度和多樣性指數(shù)結(jié)果表明,8種豆科灌木植物根際土壤共分離出4屬79種AM真菌,豆科灌木植物(除白刺花、木豆外)的AM真菌種豐度[29]和多樣性指數(shù)隨土壤深度的增加而降低;同一土層不同宿主植物AM真菌孢子種類存在一定差異,紫穗槐10-20 cm土層的種豐度(31.33)和多樣性指數(shù)(H=3.062)均為最高。豆科植物的AM真菌物種多樣性較豐富,表明豆科植物具有豐富的AM真菌資源[6-7,25],對喀斯特地區(qū)豆科灌木在農(nóng)牧業(yè)生產(chǎn)和石漠化生態(tài)修復(fù)植被建植方面具有重要意義。本研究篩選出AM真菌優(yōu)勢種楓香球囊霉、黃球囊霉、近明球囊霉、明球囊霉、孢果無梗囊霉、脆無梗囊霉、瑞氏無梗囊霉、細(xì)凹無梗囊霉、皺壁無梗囊霉能與8種豆科灌木植物形成良好的共生關(guān)系。本研究結(jié)果有助于通過進(jìn)一步篩選得出與8種豆科植物相互匹配的優(yōu)勢AM真菌,為今后開展豆科灌木植物接種優(yōu)勢AM真菌和根瘤菌在喀斯特地區(qū)進(jìn)行農(nóng)業(yè)生產(chǎn)推廣和退化生態(tài)系統(tǒng)修復(fù)效應(yīng)的研究提供了理論依據(jù)和試驗(yàn)基礎(chǔ)。 參考文獻(xiàn)(References) [1]劉潤進(jìn),陳應(yīng)龍.菌根學(xué).北京:科學(xué)出版社,2007. 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Each soil sample was collected from each sites at three depths in the soil profile: 5-10, 10-20 and 20-30 cm, respectively. This study mainly analyzed the infection rate, spore density, species and the diversity of arbuscular mycorrhizal fungi. The results indicated that the eight leguminous shrub plants had a higher infection rate of AM fungi, the infection rate of AM fungi for C. pallid was the highest, up to 80.8%; Soil available phosphorus had significantly negative correlation with the infection rate(r=-0.733,P=0.039); The spores of AM fungi mainly distributed in the 5-20 cm soil layer, the spore density of C. pallida at the 5-10 cm layer was the highest;Spore density were significantly affected by the host plants and soil layers (F=100.497, P<0.001);The dominant species of AM fungi were Glomus liquidambaris and Acoaclospora delicate, which were detected in the soil of eight leguminous shrub plants. It was important to inoculate the dominant AM fungi for leguminous shrub plant in karst area and do other related researches about rhizobia. What's more, these researches had a great effect on improving animal husbandry production and restoring degraded ecosystem. Key words:leguminous shrub plants; arbuscular mycorrhizal fungi; infection rate; diversity Corresponding author:Luo ChongE-mail: gzluochong@sina.com 中圖分類號:S432.4+4 文獻(xiàn)標(biāo)識碼:A 文章編號:1001-0629(2016)2-0210-09 通信作者:羅充(1970-),男,貴州銅仁人,教授,碩士,研究方向?yàn)橹参锷韺W(xué)。E-mail:gzluochong@sina.com 基金項(xiàng)目:國家牧草產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系(CARS-35-37);貴州省科學(xué)技術(shù)廳資助項(xiàng)目(黔科合NY 字[2008]3049號) *收稿日期:2015-06-17接受日期:2015-10-09 DOI:10.11829/j.issn.1001-0629.2015-0345 吳濤,姚紅艷,莫本田,龍忠富,羅充.8種豆科灌木栽培種叢枝菌根真菌種類及分布.草業(yè)科學(xué),2016,33(2):210-218. Wu T,Yao H Y,Mo B T,Long Z F,Luo C.The category and distribution of arbuscular mycorrhizal fungi from the rhizosphere of eight cultivated leguminous shrubs.Pratacultural Science,2016,33(2):210-218. 第一作者:吳濤(1988-),男(苗族),貴州黃平人,在讀碩士生,研究方向?yàn)橹参锷砩鷳B(tài)學(xué)。E-mail:505544288@qq.com