李大鵬，王永清，王鳳嬌，鄭文哲

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外源性谷氨酰胺對(duì)大鼠抗氧化酶及抗氧化能力影響的實(shí)驗(yàn)研究

李大鵬，王永清＊，王鳳嬌，鄭文哲

［關(guān)鍵詞］丙氨酰谷氨酰胺；脂質(zhì)過氧化；自由基；過氧化氫酶；總抗氧化能力

［作者單位］271000山東泰安，解放軍88醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室（李大鵬，王鳳嬌），醫(yī)務(wù)處（王永清，鄭文哲）

補(bǔ)充谷氨酰胺（glutamine，Gln）可增強(qiáng)水產(chǎn)動(dòng)物的抗氧化能力及免疫防御機(jī)能，提高抗病力［1］。筆者選擇反應(yīng)抗氧化能力的過氧化氫酶（hydrogen peroxide enzyme，CAT）和總抗氧化能力（total antioxidant capacity，T－AOC）為檢測指標(biāo)，探討外源性補(bǔ)充Gln對(duì)大鼠過氧化水平及抗氧化能力的影響，現(xiàn)報(bào)告如下。

1　材料和方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇選擇健康雄性Wistar大鼠（n＝22），SPF級(jí)，平均體重（0.266±0.022）kg，購于山東省魯抗醫(yī)藥股份有限公司［實(shí)驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證：SCXK（魯）2013－0001］。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物購買后，屏障環(huán)境［SYXK（軍）2012－0045］中恒溫、恒濕條件下適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，自由進(jìn)食及飲水。山東省魯抗醫(yī)藥股份有限公司提供標(biāo)準(zhǔn)顆粒動(dòng)物飼料。

1.2動(dòng)物分組與實(shí)驗(yàn)方案適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d后，22只大鼠隨機(jī)分為試驗(yàn)組（A）、對(duì)照組（B）、標(biāo)準(zhǔn)組（C），其中A、B兩組各8只，C組6只。實(shí)驗(yàn)前大鼠均稱重并記錄。A、B兩組實(shí)驗(yàn)在屏障環(huán)境中進(jìn)行，分別于每日上午進(jìn)行2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物灌胃，1次/d，其中A組按照1 ml/100 g用藥劑量灌服丙胺酰谷氨酰胺注射液（海南靈康制藥有限公司，50 ml∶10 g），B組按1 ml/100 g用藥劑量灌服0.9%生理鹽水，A、B兩組灌胃時(shí)間均為連續(xù)14 d。實(shí)驗(yàn)過程中，各組大鼠均自由飲水及相同標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。

1.3血液標(biāo)本采集A、B兩組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物末次給藥后，均禁食24 h（自由飲水）進(jìn)行血液標(biāo)本采集。采集操作前大鼠均先稱重并記錄，用10%水合氯醛進(jìn)行麻醉，按0.3 ml/100 g大鼠體重的劑量，腹腔注射方式。麻醉穩(wěn)定后，將大鼠仰臥固定在解剖臺(tái)上，消毒后仔細(xì)解剖出頸動(dòng)脈，分離完畢后對(duì)血管進(jìn)行PE套管插管，與消毒帶刻度定量收集管相連，留取血標(biāo)本2 ml以上（迅速分離血清，－80℃保存待檢）檢測CAT活性及T－AOC。C組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)7 d，直接禁食（自由飲水）24 h后按以上方法采集血液標(biāo)本。

1.4測定儀器CAT活性檢測主要儀器包括：722型光柵分光光度計(jì)（上海第三分析儀器廠，CAT檢測波長405 nm、0.5 cm光徑比色杯，T－AOC檢測波長520 nm、1 cm光徑比色杯）、5415R臺(tái)式冷凍小型離心機(jī)、5810R臺(tái)式冷凍高速離心機(jī)（德國Eppendorf公司）等。

1.5測定指標(biāo)CAT活性測定采用可見光法，試劑盒購自南京建成生物工程研究所，嚴(yán)格按試劑盒操作說明書要求進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品處理和實(shí)驗(yàn)操作，405 nm波長測各孔吸光度A，檢測范圍為0.2～24.8 U/ml。

T－AOC測定采用鐵還原－菲啉顯色法，試劑盒購自南京建成生物工程研究所，嚴(yán)格按試劑盒操作說明書要求進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)品處理和實(shí)驗(yàn)操作，520 nm波長測各孔吸光度A，檢測范圍為0.2～55.2 U/ml。

2　結(jié)果

2.1A～C各組CAT活性及T－AOC水平外源性補(bǔ)充Gln的試驗(yàn)組A、補(bǔ)充0.9%生理鹽水的對(duì)照組B、未進(jìn)行任何處理的標(biāo)準(zhǔn)組C間，CAT活性檢測結(jié)果表明：A組高于C組，B組高于C組，A組高于B組；T－AOC水平檢測結(jié)果表明：A組高于C組，B組高于C組，A組低于B組。見表1。

表1　各組CAT活性及T-AOC水平

2.2CAT活性及T－AOC水平組間差異比較根據(jù)表2統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：血清CAT活性檢測A與C組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），B與C及A與B組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明試驗(yàn)A組14 d時(shí)血清CAT活性顯著高于標(biāo)準(zhǔn)組C；血清T－AOC檢測A～C組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），表明試驗(yàn)A組14 d時(shí)T－AOC水平與標(biāo)準(zhǔn)組C間無顯著差異。

表2　CAT活性及T－AOC水平組間比較結(jié)果

3　討論

氧化應(yīng)激是由于各種因素刺激導(dǎo)致機(jī)體組織或細(xì)胞內(nèi)氧自由基生成增多和（或）清除能力降低，導(dǎo)致氧自由基在體內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)蓄積，出現(xiàn)脂質(zhì)過氧化及造成細(xì)胞或組織氧化損傷［2］。

CAT是抗氧化系統(tǒng)中重要的抗氧化物酶，是機(jī)體防御自由基攻擊的抗氧化酶系統(tǒng)中的主要成分，可有效清除自由基，減輕及阻斷脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，還原體內(nèi)不斷生成的過氧化氫等，催化過氧化氫分解成氧和水，對(duì)體內(nèi)氧水平衡具有重要作用，其酶促活性為機(jī)體提供了抗氧化防御機(jī)理，產(chǎn)生保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。CAT可間接反應(yīng)抗氧化酶的活性及機(jī)體清除自由基的能力。T－AOC是生物體內(nèi)酶類與非酶類的抗氧化物物質(zhì)總稱，是衡量抗氧化系統(tǒng)功能狀況的綜合性指標(biāo)，也是衡量自身抗氧化能力大小的整體指標(biāo)，其含量能反映機(jī)體抗氧化系統(tǒng)針對(duì)外來刺激的代償能力及自由基代謝的狀況［3－7］。

丙氨酰谷氨酰胺注射液適用于臨床分解代謝和高代謝狀況等患者，以及保護(hù)急性肺損傷患者等［8，9］，在血液中可迅速分解為丙氨酸和Gln，Gln在增強(qiáng)機(jī)體免疫機(jī)能、維持腸道黏膜上皮完整性及減少凋亡等方面具有重要作用，可減少HK－2細(xì)胞缺氧復(fù)氧后的NF－kB的表達(dá)，減少細(xì)胞損傷［10－13］。

根據(jù)本文實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)：外源性補(bǔ)充Gln的試驗(yàn)組A與未進(jìn)行任何處理的標(biāo)準(zhǔn)組C間CAT活性差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），補(bǔ)充生理鹽水對(duì)照組B與標(biāo)準(zhǔn)組C間CAT活性差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞ 0.05），表明14 d時(shí)試驗(yàn)組A血清CAT活性水平顯著高于標(biāo)準(zhǔn)組C；而T－AOC檢測組間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），試驗(yàn)組A 14 d時(shí)T－AOC水平與標(biāo)準(zhǔn)組C間無顯著差異，提示短期外源性補(bǔ)充Gln可顯著提高抗氧化物酶CAT活性，從而提高機(jī)體清除自由基的能力，但對(duì)T－AOC水平無顯著性影響。

脂質(zhì)過氧化及抗氧化保護(hù)研究是當(dāng)前臨床醫(yī)學(xué)中的重要研究課題［2，14］。筆者選擇抗氧化酶CAT活性及T－AOC水平監(jiān)測，評(píng)價(jià)外源性補(bǔ)充Gln對(duì)機(jī)體過氧化水平及抗氧化能力的影響，探討Gln對(duì)氧化損傷的保護(hù)作用，為控制脂質(zhì)過氧化、清除自由基、提供抗氧化保護(hù)等研究提供實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)支持。

參考文獻(xiàn)

［1］杜宗君，夏晶，駱美琳，等.谷氨酰胺對(duì)嗜水氣單胞菌致病中華鱉的保護(hù)作用［J］.四川動(dòng)物，2014，33（2）：254－260.

［2］徐其嶺，閆莉.富氫生理鹽水對(duì)大鼠重度顱腦損傷后氧化應(yīng)激保護(hù)作用的研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2014，43（8）：943－948.

［3］秦小惠，古再麗努爾·艾麥提，邵偉，等.移植BMSCs對(duì)乳腺炎大鼠血清中自由基和抗氧化酶水平變化影響的研究［J］.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，13（30）：5817－5820，5884.

［4］王曉寧，劉劍剛，劉美霞，等.還腦益聰方對(duì)老齡認(rèn)知障礙大鼠氧化應(yīng)激和抗衰老指標(biāo)作用的研究［J］.北京中醫(yī)藥，2013，32 （11）：820－825.

［5］金晟，鄭昌吉，鄭明昱.山核桃油對(duì)四氯化碳誘導(dǎo)的大鼠急性肝損傷的影響［J］.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36（3）：177－180.

［6］代全德，司金春，徐忠海，等.急性腦出血患者血清炎癥因子和氧化應(yīng)激產(chǎn)物的動(dòng)態(tài)監(jiān)測及其臨床意義［J］.中華臨床醫(yī)師雜志（電子版），2014，8（3）：398－402.

［7］馬寶慧，高永勝，潘桂蘭，等.木樨草素對(duì)高脂血癥模型大鼠血漿一氧化氮水平與抗氧化能力的影響［J］.中國老年學(xué)雜志，2014，34（8）：2176－2178.

［8］崔瑩，吳春雪，楊龍，等.丙氨酰谷氨酰胺對(duì)急性肺損傷患者的保護(hù)作用及其機(jī)制初探［J］.臨床薈萃，2012，27（4）：298－301.

［9］徐偉，許海塵，陳國勝，等.丙氨酰谷氨酰胺治療老年胃腸道腫瘤化療相關(guān)性腹瀉［J］.江蘇醫(yī)藥，2013，39（24）：3011－3012.

［10］熊正英，程春鳳，戰(zhàn)旗.谷氨酰胺及運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練對(duì)大鼠血液某些生化指標(biāo)的影響［J］.西安體育學(xué)院學(xué)報(bào)，2003，20（3）：48－50.

［11］嚴(yán)翊，田野，趙君軍，等.補(bǔ)充谷氨酰胺對(duì)間歇性運(yùn)動(dòng)中血液LA、LDH等指標(biāo)的動(dòng)態(tài)影響［J］.北京體育大學(xué)學(xué)報(bào)，2004，27（1）：46－49.

［12］劉昳，葉峰，鄒文靜，等.黃芩對(duì)大鼠肝硬化內(nèi)毒素血癥腸黏膜損傷的保護(hù)性機(jī)制研究［J］.中華實(shí)驗(yàn)和臨床感染病雜志（電子版），2013，7（6）：797－803.

［13］馮婭妮，孫艷紅，馬虹.谷氨酰胺預(yù)處理對(duì)HK－2細(xì)胞缺氧/復(fù)氧損傷的保護(hù)作用［J］.實(shí)用藥物與臨床，2013，16（11）：993－997.

［14］周峰.煙酰胺對(duì)甲基苯丙胺注射后小鼠腦組織中脂質(zhì)過氧化的影響［J］.江蘇醫(yī)藥，2014，40（1）：13－15.

［2015－07－21收稿，2015－08－20修回］

［本文編輯：吳蓉］

藥學(xué)

［通訊作者］王永清，Email：WYQ96307@126.com

DOI：10.14172/j.issn1671-4008.2016.01.021

［中圖分類號(hào)］Q505

［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］B