曾祥燕　顏萍花　唐玉榮　蔡　毅　廣西中醫(yī)藥大學(xué)　530001　南寧市明秀東路179號(hào)

?

紫外分光光度法測(cè)定壯藥上樹蝦的多糖含量

曾祥燕顏萍花唐玉榮蔡毅*
廣西中醫(yī)藥大學(xué)530001南寧市明秀東路179號(hào)

摘要目的：建立壯藥上樹蝦中多糖的含量測(cè)定方法，并對(duì)廣西不同產(chǎn)地的11批上樹蝦樣品中的多糖進(jìn)行含量測(cè)定。方法：采用紫外-可見分光光度法，以D-無(wú)水葡萄糖為對(duì)照品，以苯酚-濃硫酸為顯色系統(tǒng)，檢測(cè)波長(zhǎng)為485 nm。結(jié)果：D-無(wú)水葡萄糖溶液濃度在0.0126～0.2516 mg/ml范圍內(nèi)與吸光度呈良好線性關(guān)系，回歸方程為：Y=11.172X（r=0.9997），11批上樹蝦樣品中的多糖含量在2.21%～5.29%之間。結(jié)論：該方法靈敏，精密度高，重現(xiàn)性好，結(jié)果準(zhǔn)確，可作為上樹蝦藥材中多糖的含量測(cè)定方法。

關(guān)鍵詞上樹蝦；多糖；紫外-可見分光光度法；含量測(cè)定

壯藥上樹蝦為蘭科植物聚石斛Dendrobium lindleyi Stend.的全草，又名木蝦公、金黃澤、上樹黃澤、雞背石斛等，具有潤(rùn)肺止咳、滋陰養(yǎng)胃的功效，主治肺熱咳嗽，肺結(jié)核，哮喘，痢疾，口腔炎，胃痛，小兒疳積等［1］?，F(xiàn)代研究表明石斛屬植物的化學(xué)成分主要有生物堿類、多糖類、苷類、黃酮類、倍半萜類、香豆素類以及甾體糖苷類化合物等［2］，其中多糖成分是石斛增強(qiáng)免疫、抗腫瘤［3］和降血糖［4］作用的主要活性成分。上樹蝦為常用壯藥［5］，為完善其質(zhì)量控制，本文采用紫外-可見分光光度法測(cè)定其多糖的含量，結(jié)果如下。

1　實(shí)驗(yàn)材料

1.1儀器Agilent8453紫外-可見分光光度儀（美國(guó)安捷倫科技公司）；HH-S6電熱恒溫水浴鍋（金壇市醫(yī)療儀器廠）；FA1104電子分析天平（上海精科天平）；LD24-1.2離心機(jī)（北京醫(yī)用離心廠）。

1.2試劑D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品（供含量測(cè)定用，中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110833-201205）；其余試劑均為分析純。

1.3藥材上樹蝦藥材采自廣西各地，經(jīng)廣西中醫(yī)藥大學(xué)蔡毅教授鑒定為蘭科植物聚石斛Dendrobium lindleyi Stend.的全草。

2　實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果

2.1溶液的制備

2.1.1供試品溶液的制備取上樹蝦粉末0.4 g（過(guò)40目篩），精密稱定，精密加入蒸餾水120 ml，稱定重量，加熱回流1.5 h，提取3次，放至室溫，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)即得。

2.1.2對(duì)照品溶液的制備精密稱取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品6.29 mg，置25 ml量瓶中，加水使溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2檢測(cè)條件的確定以D-無(wú)水葡萄糖為對(duì)照品，苯酚-硫酸為顯色體系［6］，用紫外-可見分光光度計(jì)在400～800 nm進(jìn)行掃描，D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液和供試品溶液在485 nm波長(zhǎng)均有最大吸收，故選定檢測(cè)波長(zhǎng)為485 nm。見圖1。

2.3方法學(xué)考察

2.3.1線性關(guān)系考察分別精密量取對(duì)照品溶液0.5 ml、1 ml、2 ml、4 ml、8 ml、10 ml置于10 ml容量瓶中，加蒸餾水定容。然后取各濃度D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液1 ml，加入5%苯酚1 ml，搖勻，再加濃硫酸5 ml，于100℃水浴中加熱15 min，再置冰水浴中放置5 min，放至室溫，于485 nm下進(jìn)行測(cè)定，記錄吸光度值。以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果表明：當(dāng)D-無(wú)水葡萄糖溶液濃度在0.0126～0.2516 mg/ml范圍內(nèi)時(shí)，濃度與吸光度呈良好線性關(guān)系，回歸方程為：Y=11.172X，r=0.9997（n=6）。

2.3.2精密度試驗(yàn)取同一份D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品溶液1 ml（濃度為0.1006 mg/ml），按2.3.1項(xiàng)下“加入5%苯酚1 ml……于485 nm下進(jìn)行測(cè)定”的測(cè)定條件，連續(xù)測(cè)定6次，D-無(wú)水葡萄糖吸光度平均值為1.1612，RSD＝0.11%（n=6）。結(jié)果表明精密度良好。

2.3.3重復(fù)性試驗(yàn)取同一批供試品（SSX-1）粉末約0.4 g，精密稱定，先按2.1.1項(xiàng)方法制備供試品溶液，再按2.3.1項(xiàng)的方法平行測(cè)定6份，結(jié)果測(cè)出多糖含量的平均值為2.89%，RSD＝2.09%（n=6）。結(jié)果表明重復(fù)性良好。

2.3.4穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，按2.3.1項(xiàng)的方法每間隔2 h（0 h，2 h，4 h，6 h，8 h，10 h）測(cè)定1次，共測(cè)定6次，記錄多糖的吸光度，結(jié)果多糖含量的平均值為2.90%，RSD＝1.57%（n=6）。表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.3.5加樣回收試驗(yàn)精密稱取D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品58.40 mg，置10 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為5.84 mg/ml的對(duì)照品溶液。另精密稱取已知含量的供試品（SSX-1）粉末約0.2 g，共6份，精密稱定，按2.1.1項(xiàng)方法制備供試品溶液，再分別精密加入D-無(wú)水葡萄糖對(duì)照品貯備液1 ml（5.84 mg/ml），按2.3.1項(xiàng)下的方法提取、測(cè)定，計(jì)算加樣回收率，結(jié)果多糖平均回收率為98.94%，RSD 為2.24%（n=6）。結(jié)果見表1。

2.4樣品測(cè)定按以上擬定的含量測(cè)定方法，測(cè)定了廣西不同產(chǎn)地11批上樹蝦中多糖的含量，見表2。

3　小結(jié)與討論

現(xiàn)代藥理研究表明，藥用石斛多糖具有多種藥理功效，可調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、抗腫瘤、抗氧化、降血糖等［7-9］。上樹蝦含有多糖成分，故本研究以其作為含量測(cè)定指標(biāo)，為完善質(zhì)量控制提供依據(jù)。在上樹蝦的多糖提取預(yù)試驗(yàn)中，本課題組曾考察了料液比、提取時(shí)間、提取次數(shù)等因素，確定提取方法為：取上樹蝦粉末0.4 g，精密稱定，精密加入蒸餾水120 ml，稱定重量，加熱回流1.5 h，提取3次，放至室溫，用水補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，濾液離心10 min（10 000 r/min）。

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，廣西不同產(chǎn)地11批上樹蝦中多糖的含量在2.21%～5.29%之間，由此看出產(chǎn)地和季節(jié)對(duì)多糖含量的影響不大，也與該藥材傳統(tǒng)的全年可采相符合。

本文采用紫外分光光度法對(duì)上樹蝦中多糖進(jìn)行了含量測(cè)定，其方法簡(jiǎn)便、快捷、重復(fù)性好，可作為上樹蝦中多糖的含量測(cè)定方法。

參考文獻(xiàn)

［1］國(guó)家中醫(yī)藥管理局《中華本草》編寫委員會(huì).中華本草（第五冊(cè)）［M］.上海：上?？茖W(xué)技術(shù)出版社，1999：705.

［2］張光濃，畢志明，王崢濤，等.石斛屬植物化學(xué)成分研究進(jìn)展［J］.中草藥，2003，34（6）：102.

［3］郭勇，程曉磊.石斛在惡性腫瘤治療中的作用［J］.浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2007，17（7）：454.

［4］羅傲霜，淳澤，葛紹榮，等.迭鞘石斛多糖降血糖作用研究［J］.應(yīng)用與環(huán)境生物學(xué)報(bào)，2006，12（3）：334-337.

［5］林春蕊，許為斌，劉演，等.廣西靖西縣端午藥市常見藥用植物［M］.南寧：廣西科學(xué)技術(shù)出版社，2012：333.

［6］王建，陶靖，莫瑩，等.廣西不同產(chǎn)地馬鞭石斛多糖含量的測(cè)定［J］.廣西中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，16（2）：78-80.

［7］宋昕玥，李應(yīng)東，師彥平，等.中藥質(zhì)量控制方法的進(jìn)展（英文）［J］.中國(guó)天然藥物，2013，11（6）：596-607.

［8］刁波，唐瑛，王曉琨，等.中藥多糖研究新進(jìn)展［J］.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2008，5（3）：21.

［9］王康正.石斛屬藥用植物研究進(jìn)展［J］.中草藥，1997，28（10）：633-635.

（2015－12－17收稿/編輯陳明偉）

表1　加樣回收試驗(yàn)結(jié)果?。╪=6）

表2　廣西不同產(chǎn)地上樹蝦中多糖的含量測(cè)定結(jié)果?。╪=3）

*通信作者，教授，主要從事中藥及民族藥品種鑒定與開發(fā)利用工作，E-mail：Caiyi 118@163.com

基金項(xiàng)目：《廣西壯藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（第三卷）》質(zhì)量評(píng)價(jià)與標(biāo)準(zhǔn)研究項(xiàng)目（編號(hào)：MZY 2013019）

文章編號(hào)：1003-0719（2016）01-0073-03

中圖分類號(hào)：R284.1

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A