賈超峰, 許 津, 張志勇, 張志偉, 劉海林, 陳淑吟, 祝 斐, 李 鵬

(1. 江蘇省海洋水產(chǎn)研究所, 江蘇省海水魚(yú)類(lèi)遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 江蘇 南通 226007; 2. 南京師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院, 江蘇 南京 210023)

丁香酚對(duì)真鯛(♀)×黑鯛(♂)雜交子一代麻醉效果的研究

賈超峰1, 許 津1, 張志勇1, 張志偉1, 劉海林1, 陳淑吟1, 祝 斐1, 李 鵬2

(1. 江蘇省海洋水產(chǎn)研究所, 江蘇省海水魚(yú)類(lèi)遺傳育種重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 江蘇 南通 226007; 2. 南京師范大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院, 江蘇 南京 210023)

為探索丁香酚對(duì)真鯛(Pagrosomus major) (♀)×黑鯛(Acanthopagrus schlegelii) (♂)雜交子一代的麻醉效果, 作者研究了麻醉劑濃度、溫度、魚(yú)體規(guī)格對(duì)魚(yú)體麻醉和復(fù)蘇的影響, 不同麻醉濃度下魚(yú)體呼吸頻率的變化, 以及麻醉時(shí)間和空氣中暴露時(shí)間對(duì)魚(yú)體復(fù)蘇的影響。結(jié)果表明, 丁香酚質(zhì)量濃度為

丁香酚; 麻醉; 真鯛(Pagrosomus major)(♀)×黑鯛(Acanthopagrus schlegelii)(♂)雜交子一代; 呼吸頻率

真鯛(Pagrosomus major)和黑鯛(Acanthopagrus schlegelii)為中國(guó)沿海常見(jiàn)的兩種經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi), 但由于真鯛抗逆性和肉質(zhì)較差, 黑鯛生長(zhǎng)速度緩慢, 均難以成為中國(guó)海水魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖主打品種。雜交育種是對(duì)遺傳性狀進(jìn)行改良的主要方式之一, 1999年單保黨等[1]以真鯛為母本, 黑鯛為父本進(jìn)行屬間雜交成功獲得雜交子一代。雜交魚(yú)兼具了父母本的優(yōu)良性狀, 具有肉質(zhì)好、生長(zhǎng)速度快、易起捕等諸多優(yōu)點(diǎn), 是一種優(yōu)良的養(yǎng)殖和研究對(duì)象。隨著苗種生產(chǎn)技術(shù)逐漸成熟, 雜交魚(yú)養(yǎng)殖規(guī)模有逐年擴(kuò)大的趨勢(shì), 市場(chǎng)需求也在不斷增加。由于該魚(yú)生性?xún)疵?在人為操作或運(yùn)輸時(shí)劇烈掙扎, 極易對(duì)魚(yú)體造成損傷, 其鋒利的鰭棘也易對(duì)操作人員造成傷害。合理使用麻醉劑可以降低魚(yú)的應(yīng)激反應(yīng), 使操作得以順利進(jìn)行。

MS-222(3-氨基苯甲酸乙酯甲基磺酸鹽)和丁香酚(eugenol)是兩種最常用的魚(yú)用麻醉劑。MS-222見(jiàn)效快、復(fù)蘇時(shí)間短、安全性高, 但使用成本較高, 且會(huì)在肌肉中存有少量殘留。美國(guó)食品藥品監(jiān)督管理局要求用MS-222麻醉過(guò)的商品魚(yú)出售前需在清水中飼養(yǎng)21 d[2]。丁香酚是一種純天然的植物提取物,能夠被迅速吸收和代謝, 24 h內(nèi)可以從魚(yú)體內(nèi)幾乎完全排出, 被日本、澳大利亞、韓國(guó)、新西蘭等國(guó)認(rèn)為是合法的水產(chǎn)麻醉劑[3]。聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織及世界衛(wèi)生組織聯(lián)合食品添加劑專(zhuān)家委員會(huì)報(bào)告認(rèn)為每天攝入不高于150 mg的丁香酚不會(huì)對(duì)人類(lèi)健康造成危害[4]。另外, 在兼具高效性和高安全性的同時(shí), 丁香酚的使用成本僅為前者1/100左右, 優(yōu)勢(shì)明顯, 已被廣泛應(yīng)用于活魚(yú)運(yùn)輸和親魚(yú)采卵等方面[5]。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于丁香酚在魚(yú)類(lèi)麻醉上的應(yīng)用及對(duì)行為和生理影響的研究已有很多[6-12], 本試驗(yàn)將研究丁香酚對(duì)真鯛(♀)×黑鯛(♂)雜交子一代麻醉效果的影響, 探索丁香酚最佳使用濃度, 為活魚(yú)人工操作及轉(zhuǎn)移運(yùn)輸提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

丁香酚購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司, 純度≥98.5%。使用前按丁香酚與無(wú)水乙醇1︰10(V︰V)的比例配制成母液備用。試驗(yàn)于江蘇省海水增養(yǎng)殖技術(shù)及種苗中心進(jìn)行, 試驗(yàn)用魚(yú)為該中心培育1齡真鯛(♀)×黑鯛(♂)雜交子一代, 體質(zhì)量147.6 g±8.9 g,體長(zhǎng)18.1 cm±1.1cm(試驗(yàn)1.2.4除外), 大小均一, 活力良好, 無(wú)畸形, 實(shí)驗(yàn)前停食24 h。試驗(yàn)用水為沉淀72 h以上自然海水, 鹽度20.4±0.1, pH 8.0±0.1, 溫度17.5±0.3℃。試驗(yàn)于120 L的塑料箱中進(jìn)行, 放入50 L水, 微充氣, 保證溶解氧≥5.0mg/L。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 麻醉及復(fù)蘇階段的劃分

根據(jù)對(duì)雜交魚(yú)的麻醉預(yù)試驗(yàn)觀(guān)察將麻醉階段劃分為A0~A4 5個(gè)階段, 復(fù)蘇分為R1~R4 4個(gè)階段(表1)。當(dāng)魚(yú)停止游動(dòng), 完全失去反應(yīng)能力, 僅鰓蓋張合時(shí)(A3階段)判定為已經(jīng)麻醉; 當(dāng)魚(yú)體平衡和對(duì)外界刺激的反應(yīng)恢復(fù)時(shí)(R3階段)判定為已復(fù)蘇。

表1 麻醉及復(fù)蘇階段劃分Tab. 1 Inducing and recovering stages

1.2.2 丁香酚濃度對(duì)雜交魚(yú)麻醉效果的影響

試驗(yàn)設(shè)置15、20、25、30、35、40、50、70、100 mg/L 9個(gè)質(zhì)量濃度的試驗(yàn)組, 每組兩個(gè)平行, 每個(gè)平行5尾魚(yú)。試驗(yàn)魚(yú)麻醉后立即轉(zhuǎn)入相同體積的清水中進(jìn)行恢復(fù), 觀(guān)察試驗(yàn)魚(yú)的行為特征, 記錄每尾魚(yú)麻醉和復(fù)蘇時(shí)間。用EXCEL計(jì)算各組均值, 結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示。按照Marking[13]規(guī)定的3 min內(nèi)麻醉, 5 min內(nèi)復(fù)蘇的標(biāo)準(zhǔn)確定最佳麻醉濃度。

1.2.3 溫度對(duì)丁香酚麻醉效果的影響

由實(shí)驗(yàn)1.2.2確定在常溫(17.5℃)下丁香酚對(duì)雜交魚(yú)的最佳麻醉濃度。試驗(yàn)設(shè)置10、15、20、25、30℃ 5個(gè)溫度的試驗(yàn)組, 各組設(shè)置同上。用水冷機(jī)和加熱板調(diào)節(jié)水溫, 溫度控制精度±0.5℃。雜交魚(yú)在各溫度組適應(yīng)24 h后開(kāi)始麻醉。調(diào)節(jié)各組丁香酚濃度至最佳麻醉濃度, 記錄每組麻醉時(shí)間和復(fù)蘇時(shí)間。

1.2.4 魚(yú)體規(guī)格對(duì)丁香酚麻醉效果的影響

選取大小一致的3種規(guī)格雜交魚(yú)各10尾, 體質(zhì)量分別為86.9 g±6.3 g(小型魚(yú))、185.4 g±14.7 g(中型魚(yú))、475.9 g±28.8 g(大型魚(yú))。常溫下于最佳濃度下麻醉, 記錄麻醉和復(fù)蘇時(shí)間。

1.2.5 丁香酚濃度對(duì)雜交魚(yú)呼吸頻率的影響

試驗(yàn)設(shè)置10、20、30、50、70、100 mg/L 6個(gè)麻醉質(zhì)量濃度和1個(gè)空白對(duì)照組。將試驗(yàn)魚(yú)放入自然海水中穩(wěn)定30 min后測(cè)定呼吸頻率作為初始呼吸頻率?？焖僬{(diào)節(jié)各組至設(shè)定麻醉濃度并開(kāi)始計(jì)時(shí)。每分鐘測(cè)定1次呼吸頻率, 持續(xù)7 min。具體測(cè)定方法為: 計(jì)算每尾魚(yú)測(cè)量時(shí)間點(diǎn)前后5 s的平均呼吸頻率作為該時(shí)間點(diǎn)的呼吸頻率。

1.2.6 不同麻醉時(shí)間對(duì)雜交魚(yú)復(fù)蘇的影響

將30尾試驗(yàn)魚(yú)在最佳麻醉質(zhì)量濃度下同時(shí)麻醉,分別于第5、7、10、14、20、30分鐘隨機(jī)取出5尾魚(yú), 放入50 L清水中復(fù)蘇12 h, 記錄各組復(fù)蘇時(shí)間和復(fù)蘇率。試驗(yàn)重復(fù)1次。

1.2.7 空氣暴露對(duì)深度麻醉雜交魚(yú)復(fù)蘇的影響

在最佳濃度下深度麻醉(A4階段)的25尾試驗(yàn)魚(yú)分別在空氣中暴露4、9、15、22、30 min, 每個(gè)時(shí)間點(diǎn)隨機(jī)取5尾魚(yú)放入清水中恢復(fù), 記錄復(fù)蘇時(shí)間和復(fù)蘇率。試驗(yàn)重復(fù)一次。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同濃度丁香酚對(duì)雜交魚(yú)的麻醉效果

丁香酚質(zhì)量濃度越大, 真鯛(♀)×黑鯛(♂)雜交子一代的麻醉時(shí)間越短(圖1)。質(zhì)量濃度為15~30 mg/L時(shí), 麻醉時(shí)間隨濃度升高迅速縮短, 丁香酚質(zhì)量濃度繼續(xù)升高, 麻醉時(shí)間僅呈現(xiàn)出微弱縮短。在試驗(yàn)濃度范圍內(nèi), 復(fù)蘇時(shí)間為3.93~6.23 min, 變化幅度較小, 且呈現(xiàn)出升高—下降—再升高的特點(diǎn); 麻醉質(zhì)量濃度為50 mg/L時(shí)復(fù)蘇時(shí)間最短。按照3 min內(nèi)麻醉, 5 min內(nèi)復(fù)蘇的標(biāo)準(zhǔn), 30、50、70 和100 mg/L均為最佳麻醉質(zhì)量濃度。但是一般而言, 麻醉劑質(zhì)量濃度越高, 從麻醉到魚(yú)死亡間的窗口期越短[11], 同時(shí)也造成了藥品的浪費(fèi), 因此選擇30 mg/L作為后續(xù)試驗(yàn)的最佳麻醉質(zhì)量濃度。

圖1 丁香酚質(zhì)量濃度對(duì)雜交魚(yú)麻醉和復(fù)蘇時(shí)間的影響Fig. 1 Effect of eugenol dosage on induction and recovery time of F1 hybrids

2.2 溫度對(duì)丁香酚麻醉效果的影響

丁香酚為30 mg/L的最佳麻醉質(zhì)量濃度時(shí), 麻醉時(shí)間和復(fù)蘇時(shí)間隨溫度的升高而縮短(圖2)。30℃時(shí)麻醉和復(fù)蘇所需時(shí)間最短, 分別為0.48和1.93 min。在溫度為15~25℃時(shí), 麻醉和復(fù)蘇時(shí)間隨溫度變化最為明顯。在整個(gè)溫度范圍內(nèi), 魚(yú)體均可以滿(mǎn)足3 min內(nèi)麻醉, 5 min內(nèi)復(fù)蘇的條件。

圖2 溫度對(duì)麻醉和復(fù)蘇時(shí)間的影響Fig. 2 Effect of temperature on induction and recovery time

2.3 丁香酚對(duì)不同規(guī)格魚(yú)體的麻醉效果

在最佳麻醉質(zhì)量濃度下, 魚(yú)體質(zhì)量分別為86.9 g± 6.3 g(小型魚(yú))、185.4 g±14.7 g(中型魚(yú))、475.9 g±28.8 g (大型魚(yú))時(shí), 相應(yīng)的麻醉時(shí)間為1.60~2.10 min, 復(fù)蘇時(shí)間為3.32~3.72 min(圖3)。隨著體質(zhì)量的增加, 所需的麻醉時(shí)間逐漸縮短, 復(fù)蘇時(shí)間逐漸延長(zhǎng), 即規(guī)格較小的魚(yú)表現(xiàn)出更不易被麻醉, 而更易復(fù)蘇的特點(diǎn)。但麻醉和復(fù)蘇時(shí)間隨魚(yú)體規(guī)格變化都相對(duì)較小,均在0.5 min之內(nèi), 且在30 mg/L質(zhì)量濃度下, 3種規(guī)格魚(yú)的麻醉和復(fù)蘇時(shí)間均符合Marking[13]的最佳麻醉質(zhì)量濃度條件。

圖3 魚(yú)體規(guī)格對(duì)麻醉和復(fù)蘇時(shí)間的影響Fig. 3 Effect of fish size on induction and recovery time

2.4 丁香酚濃度對(duì)魚(yú)體呼吸頻率的影響

在麻醉的初始階段, 試驗(yàn)魚(yú)的呼吸頻率出現(xiàn)了輕微的升高, 隨后逐漸下降(圖4)。在7 min內(nèi), 10 mg/L和20 mg/L兩個(gè)麻醉組的呼吸頻率與對(duì)照組(0 mg/L)具有相同趨勢(shì)。且從試驗(yàn)觀(guān)察發(fā)現(xiàn), 10 mg/L的丁香酚僅能使試驗(yàn)魚(yú)麻醉至深度鎮(zhèn)靜狀態(tài)(A2階段), 20 mg/L丁香酚僅能使魚(yú)麻醉至A3階段。當(dāng)丁香酚質(zhì)量濃度為30~100 mg/L時(shí), 呼吸頻率隨時(shí)間變化有明顯的降低趨勢(shì), 質(zhì)量濃度越高, 呼吸頻率降低越快。呼吸頻率的降低整體呈現(xiàn)出: 慢—快—慢的特點(diǎn), 結(jié)合2.1的結(jié)果可以看出, 呼吸頻率的快速下降是在進(jìn)入麻醉(A3階段)之后, 即在A0~A3階段, 呼吸頻率降低并不明顯, 從A3階段到深度麻醉的A4階段呼吸頻率迅速下降, 至呼吸停止前吸頻率下降再次放緩。

圖4 丁香酚濃度對(duì)雜交魚(yú)呼吸頻率的影響Fig. 4 Effect of eugenol dosage on respiratory rate of F1 hybrids

2.5 不同麻醉時(shí)間對(duì)魚(yú)體復(fù)蘇的影響

最佳麻醉質(zhì)量濃度下, 麻醉時(shí)間為5~14 min時(shí),復(fù)蘇時(shí)間為3.21~3.83 min, 僅表現(xiàn)出微弱的增加趨勢(shì)(表2)。隨著麻醉時(shí)間的延長(zhǎng), 復(fù)蘇時(shí)間增加明顯,且試驗(yàn)魚(yú)開(kāi)始出現(xiàn)死亡, 麻醉20和30 min死亡率分別為20%和30%。因此, 真鯛(♀)×黑鯛(♂)雜交子一代在30mg/L的最佳麻醉濃度下的麻醉時(shí)間不宜超過(guò)14 min。

表2 麻醉時(shí)間對(duì)雜交魚(yú)復(fù)蘇的影響Tab. 2 Effect of bath time on recovery of F1 hybrids

2.6 空氣暴露對(duì)魚(yú)體復(fù)蘇的影響

丁香酚質(zhì)量濃度為30 mg/L時(shí), 試驗(yàn)魚(yú)在第9.13 min進(jìn)入深度麻醉(A4階段), 直接放入清水中復(fù)蘇所需時(shí)間為4.75 min(表3)。隨暴露時(shí)間的延長(zhǎng), 復(fù)蘇時(shí)間呈現(xiàn)出先縮短后增加的趨勢(shì)。暴露4 min時(shí), 復(fù)蘇所需時(shí)間最短; 暴露9 min, 復(fù)蘇時(shí)間升高至與直接復(fù)蘇相當(dāng)?shù)乃? 暴露時(shí)間>9 min, 復(fù)蘇時(shí)間迅速增加, 且試驗(yàn)魚(yú)開(kāi)始出現(xiàn)死亡; 空氣暴露30 min后,試驗(yàn)魚(yú)全部死亡。

表3 在空氣中暴露時(shí)間對(duì)雜交魚(yú)復(fù)蘇的影響Tab. 3 Effect of air exposure time on recovery of F1 hybrids

3 討論

3.1 丁香酚對(duì)雜交魚(yú)麻醉的最佳質(zhì)量濃度

眾多研究表明, 隨著麻醉液質(zhì)量濃度的增加, 麻醉所需時(shí)間也相應(yīng)縮短, 復(fù)蘇時(shí)間則逐漸增加[10-11,14], 適宜的麻醉質(zhì)量濃度應(yīng)在提高效率的同時(shí)可以及時(shí)判斷魚(yú)的麻醉狀態(tài), 減少麻醉事故。國(guó)內(nèi)外學(xué)者[8-10,15]大都采用Marking[13]設(shè)定的3 min內(nèi)麻醉, 5 min內(nèi)復(fù)蘇的標(biāo)準(zhǔn)判定最佳麻醉質(zhì)量濃度。丁香酚對(duì)硬骨魚(yú)類(lèi)的最佳麻醉質(zhì)量濃度大都集中在20~100 mg/L范圍內(nèi)[14]。本試驗(yàn)中, 丁香酚質(zhì)量濃度為30~100 mg/L時(shí), 對(duì)雜交魚(yú)均有理想的麻醉和復(fù)蘇效果, 且在質(zhì)量濃度為30、50、70和100 mg/L時(shí)均能滿(mǎn)足最佳麻醉質(zhì)量濃度的要求。但是在較高的質(zhì)量濃度下, 不僅造成藥品的浪費(fèi), 而且更容易導(dǎo)致魚(yú)體死亡[11]。質(zhì)量濃度為30 mg/L時(shí), 在不同溫度下或?qū)Σ煌?guī)格的魚(yú)進(jìn)行麻醉, 麻醉和復(fù)蘇時(shí)間均能滿(mǎn)足最佳麻醉濃度標(biāo)準(zhǔn), 因此, 可以把30 mg/L作為丁香酚對(duì)真鯛(♀)×黑鯛(♂)雜交子一代麻醉的最佳質(zhì)量濃度。值得注意的是, 丁香酚質(zhì)量濃度為50 mg/L時(shí), 雜交魚(yú)復(fù)蘇時(shí)間最短, 可能是由于在此質(zhì)量濃度下, 麻醉時(shí)間較短, 麻醉劑在魚(yú)體內(nèi)尚未擴(kuò)散, 更容易被排出。

3.2 溫度和魚(yú)體規(guī)格對(duì)麻醉效果的影響

溫度的升高可以提高麻醉劑的作用效力[6]。魚(yú)體放入麻醉液后, 主要通過(guò)腮絲吸收, 進(jìn)入血液循環(huán)系統(tǒng)。隨著溫度的升高, 魚(yú)體血液循環(huán)和呼吸頻率均有所提高, 麻醉劑更容易通過(guò)腮進(jìn)入和排出魚(yú)體[7],麻醉和復(fù)蘇時(shí)間均有較大程度縮短。在較低溫度(10~15℃)和較高溫度(25~30℃)下, 麻醉和復(fù)蘇時(shí)間隨溫度的變化相對(duì)較小, 可能是由于該溫度范圍接近雜交魚(yú)的耐受極限[16], 其生理適應(yīng)性調(diào)節(jié)的響應(yīng)靈敏度下降, 呼吸頻率隨溫度的變化減小。

魚(yú)體規(guī)格對(duì)進(jìn)入麻醉和復(fù)蘇時(shí)間的影響并不明顯[17], 且無(wú)明確的單向性影響[9], 這可能與藥物性質(zhì)和魚(yú)的種類(lèi)不同有關(guān)。丁香酚濃度為30 mg/L時(shí),不同規(guī)格雜交魚(yú)麻醉和復(fù)蘇時(shí)間的變化較小, 小規(guī)格魚(yú)麻醉所需時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng), 復(fù)蘇時(shí)間則更短, 說(shuō)明小規(guī)格雜交魚(yú)對(duì)丁香酚耐受性更強(qiáng), 這與李靖等[9]在大西洋鮭上的研究結(jié)果類(lèi)似?？赡苁且?yàn)榇笠?guī)格雜魚(yú)體腮部絕對(duì)水交換速度較快, 且體質(zhì)量腦指數(shù)(腦重/體質(zhì)量)較小[18], 麻醉劑更容易在神經(jīng)系統(tǒng)中累積到麻醉所需濃度閾值, 復(fù)蘇時(shí)由于麻醉劑已經(jīng)在魚(yú)體內(nèi)二次分布, 大規(guī)格魚(yú)體內(nèi)麻醉劑分布更加分散, 更不易被排出。

3.3 丁香酚質(zhì)量濃度對(duì)呼吸頻率的影響

在魚(yú)體麻醉過(guò)程中, 麻醉劑首先作用于腦皮質(zhì)抑制魚(yú)的感覺(jué)中樞, 再作用于基底神經(jīng)節(jié)和小腦麻痹運(yùn)動(dòng)中樞, 最后作用于延腦和脊髓使魚(yú)的呼吸受到抑制[19]。低濃度的丁香酚溶液可以使雜交魚(yú)的感覺(jué)和運(yùn)動(dòng)受到抑制, 但其呼吸頻率并未發(fā)生變化,可能是因?yàn)楹粑袠械穆楸孕枰叩臐舛乳撝?。雜交魚(yú)的麻醉過(guò)程隨麻醉劑作用部位的不同呈現(xiàn)出明顯的時(shí)序性, 在麻醉的初始階段, 魚(yú)的呼吸頻率變化較為平穩(wěn), 并有一個(gè)輕微升高隨后下降的現(xiàn)象,這與管曙光等[15]鲉在許氏平(Sebastes schlegelii)上觀(guān)察到的結(jié)果相一致, 可能是由于丁香酚具有一定的刺激性[8], 使魚(yú)在麻醉初始階段產(chǎn)生輕度的應(yīng)激反應(yīng)。呼吸頻率的降低基本處于進(jìn)入深度麻醉的過(guò)程中(A3~A4), 說(shuō)明在這一階段魚(yú)的呼吸中樞受到抑制。有研究發(fā)現(xiàn), 一定質(zhì)量濃度的麻醉劑可以使魚(yú)保持較低的呼吸頻率[15], 本試驗(yàn)并未發(fā)現(xiàn)類(lèi)似的質(zhì)量濃度, 可能是因?yàn)槟軌蚴闺s交魚(yú)保持較低呼吸頻率的丁香酚溶液質(zhì)量濃度范圍過(guò)于狹窄(20~30 mg/L)。

3.4 丁香酚在活體操作和活魚(yú)運(yùn)輸上的應(yīng)用

較高質(zhì)量濃度下的長(zhǎng)時(shí)間麻醉會(huì)造成呼吸頻率的過(guò)度下降或停止, 并可能引發(fā)心臟驟停, 血液中含氧量的下降和CO2的累積還會(huì)引起呼吸性酸中毒,若不能及時(shí)復(fù)蘇將會(huì)導(dǎo)致魚(yú)死亡[14]。在丁香酚質(zhì)量濃度為30 mg/L時(shí), 麻醉時(shí)間超過(guò)14 min將可能造成雜交魚(yú)死亡。魚(yú)體在深度麻醉狀態(tài)下于空氣中暴露, 一段時(shí)間內(nèi)不會(huì)造成死亡[11], 適合對(duì)魚(yú)進(jìn)行測(cè)量、標(biāo)記、采血等操作。30 mg/L的丁香酚溶液可以使魚(yú)體進(jìn)入深度麻醉狀態(tài), 空氣暴露4 min時(shí), 魚(yú)體復(fù)蘇時(shí)間出現(xiàn)一定下降, 可能是丁香酚的揮發(fā)以及在魚(yú)體內(nèi)的代謝和二次分布所致?？諝庵斜┞? min以?xún)?nèi)不會(huì)對(duì)魚(yú)的復(fù)蘇造成影響, 可以滿(mǎn)足離水操作的要求。

低質(zhì)量濃度的麻醉劑不僅可以起到鎮(zhèn)靜作用, 還可以顯著降低魚(yú)體耗氧量和氨氮排放, 使魚(yú)體長(zhǎng)時(shí)間保持較低的代謝水平[12], 在活魚(yú)運(yùn)輸中可以顯著減輕應(yīng)激和魚(yú)體損傷, 增加運(yùn)輸距離和運(yùn)輸量, 提高運(yùn)輸成活率。Cooke[20]認(rèn)為深度鎮(zhèn)靜期(A2階段)是活魚(yú)運(yùn)輸?shù)倪m宜狀態(tài)。10 mg/L的丁香酚溶液能夠使真鯛(♀)×黑鯛(♂)雜交魚(yú)長(zhǎng)時(shí)間保持在這一階段, 是活魚(yú)運(yùn)輸?shù)倪m宜濃度。但由于丁香酚在魚(yú)體內(nèi)的代謝速度較快, 且在水中充氣狀態(tài)下更易揮發(fā), 魚(yú)體可能在數(shù)小時(shí)后恢復(fù)正常狀態(tài)[10], 因此, 不同運(yùn)輸時(shí)間和運(yùn)輸條件下丁香酚的適用質(zhì)量濃度和應(yīng)用方式還需進(jìn)一步探索。20 mg/L的丁香酚溶液可以使魚(yú)保持正常的呼吸, 但是由于魚(yú)體進(jìn)入麻醉狀態(tài)(A3階段)后, 失去自主游泳能力, 增加運(yùn)輸中與容器壁的碰撞機(jī)會(huì), 并可能沉入水底, 堆積擠壓造成窒息, 不宜用于活魚(yú)運(yùn)輸。

[1] 單保黨, 洪萬(wàn)樹(shù), 何大仁. 真鯛與黑鯛雜交與多倍體育種系列研究-Ⅰ[J]. 海洋漁業(yè), 1999, 21(1): 14-15. Shan Baodang, Hong Wanshu, He Daren. A series studies on hybridization and polyploid breeding between red sea bream and black porgy (Ⅰ)[J]. Marine Fisheries, 1999, 21(1): 14-15.

[2] Coyle S D, Durborow R M, Tidwell J H. Anesthetics in aquaculture[R]. Stoneville, USA: SRAC Publication, 2004.

[3] 李晉成, 劉歡, 吳立冬, 等. 動(dòng)物體內(nèi)麻醉劑殘留檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展[J]. 食品科學(xué), 2014, 35(5): 251-256. Li Jincheng, Liu Huan, Wu Lidong, et al. Progress in detection of anesthetic residues in food-producing animals[J]. Food Science, 2014, 35(5): 251-256.

[4] JECFA. Evaluation of certain food additives and contaminants: Sixty-fifth report of the Joint FAO/WHO Expert Committee on Food Additives[R]. Geneva, SUI: WHO Technical Report Series, 2006.

[5] 聶小寶, 張玉晗, 孫小迪, 等. 活魚(yú)運(yùn)輸?shù)年P(guān)鍵技術(shù)及其工藝方法[J]. 漁業(yè)現(xiàn)代化, 2014, 41(4): 34-39. Nie Xiaobao, Zhang Yuhan, Sun Xiaodi, et al. Process and key technologies of transportation of live fish[J]. Fishery Modernization, 2014, 41(4): 34-39.

[6] Akbulut B, Ayd?n ?, ?avdar Y. Influence of temperature on clove oil anesthesia in flounder (Platichthys flesus Linnaeus, 1758)[J]. Journal of Applied Ichthyology, 2012, 28(2): 254-257.

[7] Mylonas C C, Cardinaletti G, Sigelaki I, et al. Comparative efficacy of clove oil and 2-phenoxyethanol as anesthetics in the aquaculture of European sea bass (Dicentrarchus labrax) and gilthead sea bream (Sparus aurata) at different temperatures[J]. Aquaculture, 2005, 246(1): 467-481.

[8] Sladky K K, Swanson C R, Stoskopf M K, et al. Comparative efficacy of tricaine methanesulfonate and clove oil for use as anesthetics in red pacu (Piaractus brachypomus)[J]. American Journal of Veterinary Research, 2001, 62(3): 337-342.

[9] 李靖, 劉寶良, 王順奎, 等. 丁香酚對(duì)大西洋鮭麻醉效果的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 海洋科學(xué)進(jìn)展, 2015, 33(1): 92-99. Li Jing, Liu Baoliang, Wang Shunkui, et al. The anesthesia effect of eugenol on Salmon salar[J]. Advances in Marine Science, 2015, 33(1): 92-99.

[10] 孟慶磊, 董學(xué)颯, 朱永安, 等. 丁香酚對(duì)澳洲長(zhǎng)鰭鰻麻醉效果的研究[J]. 農(nóng)學(xué)學(xué)報(bào), 2012, 1(7): 46-50. Meng Qinglei, Dong Xuesa, Zhu Yongan, et al. Use of eugenol as an anesthetic for Australian longfinned eel, Anguilla reinhardtii (Steindachner)[J]. Journal of Ag-riculture, 2012, 1(7): 46-50.

[11] 趙艷麗, 楊先樂(lè), 黃艷平, 等. 丁香酚對(duì)大黃魚(yú)麻醉效果的研究[J]. 水產(chǎn)科技情報(bào), 2002, 29(4): 163-165. Zhao Yanli, Yang Xianle, Huang Yanping, et al. The anesthesia effect of eugenol on large yellow croaker (Pseudosciaena crocea)[J]. Fisheries Science & Technology Information, 2002, 29(4): 163-165.

[12] 莊平, 徐濱, 章龍珍, 等. MS-222 和丁香酚對(duì)中華鱘幼魚(yú)耗氧率與排氨率的影響[J]. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué), 2009, 16(4): 612-618. Zhuang Ping, Xu Bin, Zhang Longzhen, et al. Effects of MS-222 and clove oil on oxygen consumption rate and ammonia excretion rate of juvenile Chinese sturgeon, Acipenser sinensis[J]. Journal of Fishery Sciences of China, 2009, 16(4): 612-618.

[13] Marking L L, Meyer F P. Are better anesthetics needed in fisheries?[J]. Fisheries, 1985, 10(6): 2-5.

[14] Javahery S, Nekoubin H, Moradlu A H. Effect of anesthesia with clove oil in fish (review)[J]. Fish Physiology and Biochemistry, 2012, 38(6): 1545-1552.

[15] 官曙光, 關(guān)健, 劉洪軍, 等. MS-222麻醉許氏平鲉幼魚(yú)的初步研究[J]. 海洋科學(xué), 2011, 35(5): 100-105. Guan Shuguang, Guan Jian, Liu Hongjun, et al. Anesthetic effect of MS-222 on juveniles of Sebastes schlegelii[J]. Marine Sciences, 2011, 35(5): 100-105.

[16] 蔣宏雷, 吳雄飛. 真鯛與黑鯛及雜交 F1 耐受溫度、生長(zhǎng)比較[J]. 現(xiàn)代漁業(yè)信息, 2009, 24(2): 26-28. Jiang Honglei, Wu Xiongfei. Comparative study on temperature tolerance and growth between Pagrus major (Temminck et Schlegel) and Spraus macrocephalus and F1 hybrid[J]. Modern Fisheries Information, 2009, 24(2): 26-28.

[17] Hoskonen P, Pirhonen J. The effect of clove oil sedation on oxygen consumption of six temperate-zone fish species[J]. Aquaculture Research, 2004, 35(10): 1002-1005.

[18] 金剛, 丁莉, 李鐘杰. 保安湖四種小型魚(yú)類(lèi)腦指數(shù)初步研究[J]. 水生生物學(xué)報(bào), 2008, 32(1): 109-111. Jin Gang, Ding Li, Li Zhongjie. Primary study on the brain index of four small fishes in lake of Bao'an[J]. Acta Hydrobiologica Sinica, 2008, 32(1): 109-111.

[19] 李思發(fā). 魚(yú)類(lèi)麻醉劑[J]. 淡水漁業(yè), 1988, 1: 22-23. Li Sifa. Fish anesthetics[J]. Freshwater Fisheries, 1988, 1: 22-23.

[20] Cooke S J, Suski C D, Ostrand K G, et al. Behavioral and physiological assessment of low concentrations of clove oil anesthetic for handling and transporting largemouth bass (Micropterus salmoides)[J]. Aquaculture, 2004, 239(1): 509-529.

Received:Dec. 12, 2015

Efficacy of eugenol as an anesthetic for F1 hybrids between Pagrosomus major (♀) and Acanthopagrus schlegelii (♂)

JIA Chao-feng1, XU Jin1, ZHANG Zhi-yong1, ZHANG Zhi-wei1, LIU Hai-lin1, CHEN Shu-yin1, ZHU Fei1, LI Peng2
(1. Jiangsu Key Laboratory of Genetics and Breeding of Marine Fish, Jiangsu Institute of Oceanology and Marine Fisheries, Nantong 226007, China; 2. College of Life Science, Nanjing Normal University, Nanjing 210023, China)

Eugenol; anesthesia; Pagrosomus major (♀) and Acanthopagrus schlegelii (♂) F1; respiratory rate

This study investigated the efficacy of eugenol as an anesthetic for F1 hybrids between Pagrosomus major (♀) and Acanthopagrus schlegelii (♂). We observed the performance of F1 hybrids exposed to different eugenol dosages and temperature and explored the impact of anesthesia time, body weight, and air exposure duration on anesthesia. Results showed that induction period was shorter at higher dosages. Inducing and recovering F1 hybrids took a short time at 30 mg/L of eugenol, which was supposed to be the optimal dosage for the anesthetic bath. Higher temperatures appear to augment the anesthetic effect; there was a large degree of reduction of induction and recovery time with increasing temperature. Body weight had no significant effects on induction and recovery, but small body sizes appeared more resistant to eugenol. Respiratory rates of F1 hybrids decreased at a faster rate in higher concentration baths. No significant effects on respiratory rates were observed at dosages ≤20 mg/L. After inducing stage A3 at higher doses, there was an inhibition of the respiratory center in the medulla oblongata that led to a rapid decline of respiratory rates. Anesthetic bath held for more than 14 min may lead to mortality. Exposure of deeply anesthetized F1 hybrids to air for less than 9 min did not cause death, and the shortest possible time needed for recovery when exposed was 4 min. These results can provide information for vivisection and transportation of F1 hybrids.

S965.3

A

1000-3096(2016)12-0041-06

10.11759//hykx20151212001

(本文編輯: 譚雪靜)

2015-12-12;

2016-01-28

江蘇省水產(chǎn)三新工程項(xiàng)目(D2015-17, Y2016-23); 江蘇省創(chuàng)新能力建設(shè)計(jì)劃項(xiàng)目(BM2015017); 江蘇省重點(diǎn)研發(fā)項(xiàng)目(BE2016326);南通市應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃項(xiàng)目(MS12015070, MS12015071)

[Foundation: Three Reforms in Aquaculture Engineering of Jiangsu Province, No. D2015-17 & Y2016-23; Jiangsu Innovation Ability Construction Program, No. BM2015017; Jiangsu Key Research Program, No. BE2016326; Applied Foundational Research Program of Nantong, No. MS12015070 & MS12015071]

賈超峰(1988-), 男, 河南商丘人, 碩士, 助理工程師, 主要從事海洋生物遺傳育種與生理生態(tài)方面研究, 電話(huà): 18851310306,

E-mail: chaofeng.124@163.com; 張志勇, 通信作者, 研究員, E-mail: 13906292412@139.com; 劉海林, 通信作者, 工程師, E-mail: 1765016796@qq.com

30 mg/L時(shí), 對(duì)雜交魚(yú)具最佳麻醉效果; 溫度對(duì)丁香酚麻醉效力具有促進(jìn)作用; 麻醉和復(fù)蘇時(shí)間受魚(yú)體規(guī)格的影響較小, 小規(guī)格雜交魚(yú)對(duì)丁香酚耐受性稍強(qiáng); 丁香酚質(zhì)量濃度≤20 mg/L對(duì)呼吸頻率沒(méi)有明顯影響, 質(zhì)量濃度≥30 mg/L, 呼吸頻率迅速下降; 魚(yú)體在30 mg/L的丁香酚溶液中麻醉時(shí)間不宜超過(guò)

14 min; 深度麻醉狀態(tài)下, 空氣中暴露9 min以?xún)?nèi)不會(huì)引起魚(yú)死亡。研究將為雜交魚(yú)活體操作和轉(zhuǎn)移運(yùn)輸提供參考。