李曉蘭

(三峽大學(xué)第二人民醫(yī)院，湖北宜昌 434000)

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卵巢腺癌組織中TRAIL及其受體的表達(dá)及意義

李曉蘭

(三峽大學(xué)第二人民醫(yī)院，湖北宜昌 434000)

目的觀察卵巢腺癌組織中腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)及其受體的表達(dá)變化并探討其臨床意義。方法60例卵巢腺癌患者根據(jù)FIGO分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ期30例(早期組)、Ⅱ期以上30例(晚期組)，對照組為同期因子宮及宮頸病變同時(shí)切除卵巢并經(jīng)病理證實(shí)為正常卵巢組織者30例，采用Western blot法檢測各組卵巢組織TRAIL及其死亡受體4(DR4)、DR5、誘騙受體1(DcR1)、DcR2蛋白。結(jié)果各組TRAIL蛋白相對表達(dá)量組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均>0.05；DR4、DR5蛋白相對表達(dá)量早期組<對照組<晚期組，DcR1、DcR2蛋白相對表達(dá)量晚期組>早期組、對照組，P均<0.05;早期組、對照組DcR1、DcR2蛋白比較，P均>0.05。結(jié)論卵巢腺癌組織中存在TRAIL及其受體失衡，其在卵巢腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

卵巢腺癌；腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體；死亡受體；誘騙受體

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)的常見惡性腫瘤，發(fā)病率較高，病死率居?jì)D科惡性腫瘤首位。目前臨床常用的治療方法有卵巢腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)和化療等，但晚期卵巢癌患者的5年生存率仍較低[1～3]。腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(TRAIL)是人心肌cDNA文庫中克隆出來的，因其具有強(qiáng)大的誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的能力，而對正常組織細(xì)胞基本無影響，因此被認(rèn)為是一種更安全且極具有潛力的抗腫瘤因子，成為近年研究熱點(diǎn)。目前，已發(fā)現(xiàn)死亡受體4(DR4)、DR5、誘騙受體1(DcR1)、DcR2和骨保護(hù)素(OPG)5種TRAIL受體[4，5]。2010年1月～2015年1月，我們觀察了不同階段卵巢癌組織中TRAIL及其受體DR4、DR5、DcR1、DcR2的表達(dá)變化，旨在探討其在卵巢癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1　資料與方法

1.1臨床資料收集我院同期收治的卵巢腺癌患者60例，年齡30～75歲；均經(jīng)病理診斷證實(shí)為漿液性卵巢腺癌，根據(jù)FIGO(2009)分期標(biāo)準(zhǔn)分為Ⅰ期30例(早期組)、Ⅱ期以上30例(晚期組)。對照組為同期因子宮及宮頸病變同時(shí)切除卵巢者30例，年齡30～75歲，均經(jīng)病理證實(shí)為正常卵巢。三組年齡具有可比性。

1.2卵巢組織TRAIL及DR4、DR5、DcR1、DcR2檢測采用Western blot法。取三組卵巢組織，-80 ℃冰箱保存。取出組織，TBS洗滌2～3次，采用Bradford方法測定蛋白濃度；SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜，一抗、二抗免疫反應(yīng)；化學(xué)發(fā)光，凝膠圖像分析，將膠片進(jìn)行掃描(EPSON V300掃描儀)存檔；Alpha軟件處理系統(tǒng)分析目的條帶的光密度值，以目的條帶的光密度值代表卵巢組織TRAIL及DR4、DR5、DcR1、DcR2的相對表達(dá)量。

2　結(jié)果

早期組、晚期組、對照組TRAIL蛋白的相對表達(dá)量分別為1.03±0.04、1.01±0.03、1.00±0.02，組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P均>0.05。早期組、晚期組、對照組DR4蛋白的相對表達(dá)量分別為0.58±0.03、1.25±0.03、1.00±0.02，組間比較，P均<0.05。早期組、晚期組、對照組DR5蛋白的相對表達(dá)量分別為0.73±0.03、1.49±0.11、1.00±0.04，組間比較，P均<0.05。早期組、晚期組、對照組DcR1蛋白的相對表達(dá)量分別為1.02±0.05、1.78±0.04、1.00±0.02。早期組與對照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余組間比較，P均<0.05。早期組、晚期組、對照組DcR2蛋白的相對表達(dá)量分別為1.00±0.01、1.98±0.09、1.00±0.05，早期組與對照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其余組間比較，P均<0.05。

3　討論

TRAIL是TNF家族的新成員，是一種凋亡誘導(dǎo)配體,它能夠選擇性地誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡,而使正常細(xì)胞逃逸其殺傷作用[6]。TRAIL可以與DR4、DR5相互作用,選擇性誘導(dǎo)多種組織來源的腫瘤細(xì)胞株發(fā)生凋亡; 而正常細(xì)胞因表達(dá)的 DcR1、DcR2無完整胞內(nèi)死亡結(jié)構(gòu)域,能抑制 TRAIL誘導(dǎo)的凋亡[7，8]。DR4 可以導(dǎo)致p53 非依賴性的凋亡,并伴有Caspase8、10和Caspase3、6、7 的剪切。DR4 可以通過不同的信號通路激活JNK和NF-κB ,NF-κB 的活化可以抵抗細(xì)胞凋亡,但它并不足以使細(xì)胞逃逸死亡的命運(yùn)[9]。DR5 主要分布于外周血淋巴細(xì)胞和骨骼肌細(xì)胞。DR5 是p53 的下游靶位,其介導(dǎo)的p53 依賴性調(diào)節(jié)在人和鼠中有高度的保守性, 并可以在野生型p53 表達(dá)的細(xì)胞內(nèi)被DNA 損傷劑誘導(dǎo)表達(dá)[10]。DR5 的表達(dá)受阿霉素、TNF-α和一些DNA 損傷劑的調(diào)節(jié), 但與其他受p53 調(diào)節(jié)的基因不同的是,DR5 不受紫外線照射的的調(diào)節(jié)[11～13]。DR5 能夠以組織特異性方式激活NF-κB。DR4、DR5均可通過其胞外區(qū)與TRAIL結(jié)合并活化后,通過其胞內(nèi)死亡區(qū)引發(fā)和傳導(dǎo)凋亡信號,通過激活Caspase蛋白酶解級聯(lián)反應(yīng)而發(fā)生TRAIL 誘導(dǎo)的凋亡。DcR1 和DcR2 的基因都位于8p21～22。DcR1和DcR2 的胞外區(qū)均有兩個(gè)與DR4、DR5 高度同源的富含半胱氨酸的重復(fù)序列,能夠與TRAIL結(jié)合[14,15]。但是，DcR1 無胞內(nèi)區(qū); DcR2 的胞內(nèi)死亡區(qū)不完整, 即呈無功能的截?cái)酄顟B(tài)。因此，DcR1 和DcR2 與TRAIL 結(jié)合后都不能傳導(dǎo)凋亡信號。DcR1 和DcR2 在多種組織有廣泛的表達(dá), 它們通過與DR4、DR5 競爭性結(jié)合TRAIL 而使正常細(xì)胞逃逸TRAIL 介導(dǎo)的凋亡[16]。

本研究發(fā)現(xiàn)，早期組、晚期組、對照組TRAIL蛋白的相對表達(dá)量組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，而TRAIL受體在卵巢腺癌的不同病理階段發(fā)生變化。早期卵巢腺癌組織中DR4、DR5表達(dá)降低，DcR1、DcR2表達(dá)水平無變化，可使腫瘤細(xì)胞凋亡發(fā)生免疫耐受，發(fā)生凋亡逃逸；晚期卵巢腺癌組織中DR4、DR5、DcR1、DcR2表達(dá)均升高，而TRAIL未見明顯變化。說明腫瘤組織中存在TRAIL及受體失衡，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞生長迅速，且易發(fā)生轉(zhuǎn)移，在卵巢腺癌的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。

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10.3969/j.issn.1002-266X.2016.18.018

R737.31

B

1002-266X(2016)18-0053-02

2016-01-21).