李學(xué)敏， 周慶新， 徐　杰， 楊　魯， 楊　澍， 張　婷， 薛長(zhǎng)湖

(中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院， 山東 青島 266003)

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雨生紅球藻蝦紅素的制備及其穩(wěn)定性研究*

李學(xué)敏， 周慶新， 徐杰， 楊魯， 楊澍， 張婷， 薛長(zhǎng)湖**

(中國(guó)海洋大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院， 山東 青島 266003)

摘要：以雨生紅球藻提取物為原料，利用皂化法和溶劑分配法制備蝦紅素，并研究其結(jié)構(gòu)及穩(wěn)定性。通過(guò)優(yōu)化皂化過(guò)程中的堿液濃度、反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)溫度，得到最佳的工藝條件：堿液濃度7%，皂化時(shí)間120min，溫度15℃。此條件下，蝦紅素的轉(zhuǎn)化率達(dá)96.12%，制備的蝦紅素得率為62.16%，純度達(dá)80.36%。用HPLC-DAD-(APCI)MS/MS分析反應(yīng)產(chǎn)物，解析蝦紅素的質(zhì)譜裂解規(guī)律，研究光照條件、金屬離子和溫度對(duì)蝦紅素穩(wěn)定性的影響。結(jié)果表明：紫外光照處理對(duì)蝦紅素穩(wěn)定性影響顯著；Fe3+、Ca2+、Cu2+對(duì)蝦紅素有不同程度的破壞作用，Zn2+、Mg2+、Na+、Fe2+對(duì)蝦紅素影響較??；pH在3～8范圍內(nèi)，隨著pH升高，蝦紅素穩(wěn)定性提高；隨著溫度的升高，蝦紅素的保留率下降。本研究為蝦紅素的活性、毒理及其在食品中的應(yīng)用等研究提供了重要參考。

關(guān)鍵詞：雨生紅球藻；蝦紅素；液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜；穩(wěn)定性

蝦紅素(Astacene，3,3’-dihydroxy-2,3,2’,3’-tetradehydro-β,β’-carotene-β,β-dione)也被稱為喇蛄素，分子式為C40H48O4，屬于非維生素A源類胡蘿卜素的一種[1]，廣泛存在于自然界中，在蝦[2-3]、蟹[4]、鮭魚(yú)[5]等水產(chǎn)動(dòng)物以及藻類植物、花和水果中都有分布。在實(shí)際研究過(guò)程中，蝦紅素通常作為蝦青素的脫氫氧化產(chǎn)物存在，兩者的結(jié)構(gòu)非常相似(見(jiàn)圖1)。研究發(fā)現(xiàn)，蝦紅素結(jié)構(gòu)中長(zhǎng)共軛雙鍵鏈末端環(huán)上的羥基和酮基以及由其所構(gòu)成的α-羥基酮，是其發(fā)揮各種生物學(xué)功能的主要原因[6]。蝦紅素較蝦青素發(fā)現(xiàn)晚，目前在這方面研究報(bào)道和應(yīng)用以蝦青素為主，蝦紅素則鮮為報(bào)道。由于蝦紅素的吸收特性與其他類胡蘿卜素類似，對(duì)動(dòng)物和人體安全。在日本，蝦紅素已被用于食品和動(dòng)物飼料中，美國(guó)FDA、歐盟、加拿大食品監(jiān)察局已批準(zhǔn)蝦紅素作為水產(chǎn)動(dòng)物飼料添加劑。國(guó)內(nèi)關(guān)于蝦紅素研究應(yīng)用起步較晚，現(xiàn)在大多還在生產(chǎn)提取研究階段，藥理試驗(yàn)研究和市場(chǎng)應(yīng)用較少，研究應(yīng)用市場(chǎng)前景廣闊。另一方面，蝦紅素具有鮮亮的紅色，并且由于其分子極性低的特性，而使其在油相介質(zhì)中具有良好的溶解性，加之其特有的生物活性，因此，可作為功能性著色劑用于食品和水產(chǎn)行業(yè)。

圖1　蝦紅素的轉(zhuǎn)化及化學(xué)結(jié)構(gòu)[7]

本文以雨生紅球藻為原料，通過(guò)皂化和溶劑分配法制備分離蝦紅素，并對(duì)其理化特性進(jìn)行了較為系統(tǒng)的研究，這對(duì)今后研究蝦紅素生物活性和構(gòu)效關(guān)系以及將蝦紅素作為功能添加劑用于食品工業(yè)具有重要意義。

1實(shí)驗(yàn)材料與儀器

1.1 材料與試劑

雨生紅球藻提取物，含蝦青素酯5%，購(gòu)自云南愛(ài)爾發(fā)生物技術(shù)有限公司；蝦紅素標(biāo)準(zhǔn)品(1mg)，上海臻準(zhǔn)生物科技有限公司；甲醇、甲基叔丁基醚均為色譜純，德國(guó)Merck公司；KOH、乙醇、二甲基亞砜、二氯甲烷均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2 主要儀器

1100型高效液相色譜儀，配置二極管陣列檢測(cè)器(DAD)和熒光檢測(cè)器(FLD)，美國(guó)Agilent公司；YMC Carotenoid-C30(4.6mm×250mm，S-5μm)液相柱，日本YMC公司；T10 S25渦旋振蕩器，德國(guó)IKA公司；HH-8數(shù)顯恒溫水浴鍋(可震蕩)，國(guó)華電器有限公司；DTU-1C氮吹儀，日本TAITEC公司；ALPHA1-4LD冷凍干燥機(jī)，德國(guó)CHRIST公司；TDL-5-A飛鴿牌系列離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠制造；6410 Triple Quard LC/MS，1260型高效液相色譜儀，配置二極管陣列檢測(cè)器(DAD)，美國(guó)Agilent公司；UV-2550分光光度計(jì)，日本島津公司；AL204電子天平，梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司；Millipore Q超純水器，美國(guó)Millipore 公司；PH3-3C pH計(jì)，上海雷磁儀器廠。

2方法

2.1 蝦紅素的制備

取5g雨生紅球藻油，加入1∶10(W∶V)的7%的KOH-乙醇溶液，在一定溫度下磁力攪拌進(jìn)行皂化反應(yīng)。反應(yīng)一段時(shí)間后，將皂化液于4℃環(huán)境中靜置過(guò)夜，利用冷卻結(jié)晶的原理使蝦紅素充分析出，然后經(jīng)5000r/min離心5min，棄上清，收集沉淀物，沉淀用10%的HCl-乙醇溶液洗滌4～5次，中和皂化液，之后再用50%的乙醇洗滌4～5次以除去皂化過(guò)程中產(chǎn)生的脂肪酸鹽等極性雜質(zhì)，最后用蒸餾水將沉淀中的鹽等雜質(zhì)洗去，凍干，即得暗紫色粉末，即為蝦紅素樣品。

2.2 皂化反應(yīng)條件優(yōu)化

分別對(duì)影響皂化反應(yīng)程度的堿液濃度、反應(yīng)時(shí)間和反應(yīng)溫度3個(gè)因素，進(jìn)行單因素實(shí)驗(yàn)，確定最佳皂化工藝。

2.2.1 堿濃度分別配制濃度為3%、5%、7%、9%、11%的KOH-乙醇溶液。取2g雨生紅球藻油，分別加入20mL上述不同濃度的堿液，于15℃下磁力攪拌，反應(yīng)120min后，取樣，HPLC法檢測(cè)蝦紅素轉(zhuǎn)化率。

式中：SAstacene為蝦紅素在液相譜圖中峰面積；STotal為液相譜圖中總峰面積。

2.2.2 皂化時(shí)間取2g雨生紅球藻油，加入20mL 7%的KOH-乙醇溶液，15℃下反應(yīng)，分別于60、80、100、120、140min取樣，HPLC法檢測(cè)蝦紅素轉(zhuǎn)化率。

2.2.3 溫度取2g雨生紅球藻油，加入20mL 7%的KOH-乙醇溶液，分別于5、15、25、35和45℃下磁力攪拌反應(yīng)120min，取樣，HPLC法檢測(cè)蝦紅素轉(zhuǎn)化率。

2.3 蝦紅素HPLC分析

樣品前處理：取100μL皂化液，加入1mL二氯甲烷進(jìn)行萃取，用飽和食鹽水洗滌至中性后，將二氯甲烷萃取液用N2吹干，用1mL甲醇/甲基叔丁基醚(色譜純)(1∶1，V/V)復(fù)溶，用0.22μm的有機(jī)膜過(guò)濾后上樣檢測(cè)。

色譜條件[8]：色譜柱為YMC Carotenoid-C30(4.6mm×250mm，S-5μm)；流動(dòng)相A為甲醇，流動(dòng)相B為甲基叔丁基醚，流動(dòng)相C為1%磷酸水溶液。洗脫梯度為：0～15min，88%A，10%B，2%C；15～25min，0%A，100%B，0%C；25～35min，88%A，10%B，2%C。洗脫時(shí)間30min；流速1mL/min；進(jìn)樣體積20μL；柱溫35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)480nm。

2.4 蝦紅素HPLC-(+)APCI-MS/MS分析

將蝦紅素粉末樣品用二氯甲烷溶解后進(jìn)行液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用(LC-MS)分析。液相與蝦紅素標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照。色譜條件：色譜柱為YMC Carotenoid-C30(4.6mm×250mm，S-5μm)；流動(dòng)相為100%甲醇，等度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)480nm。質(zhì)譜條件：APCI源，正離子模式；霧化氣40psi；干燥氣流速5L/min，干燥氣溫度350℃，離子源溫度450℃；毛細(xì)管電壓4500V，裂解電壓60V，碰撞能量15ev；掃描范圍m/z100～1000。

2.5 蝦紅素純度測(cè)定

將蝦紅素標(biāo)準(zhǔn)品用二氯甲烷/甲醇(1∶9，V/V)配成20μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液，HPLC法分別進(jìn)樣5、10、15、20、25μL，以液相峰面積為縱坐標(biāo)，以蝦紅素質(zhì)量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。取1mg蝦紅素樣品用二氯甲烷/甲醇(1∶9，V/V)定容至50mL，HPLC法進(jìn)樣20μL進(jìn)行測(cè)定。

2.6 蝦紅素光譜特性分析

取少量蝦青素和蝦紅素溶于二甲基亞砜使溶液顏色呈橙黃色，用紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)掃描溶液最大吸收波長(zhǎng)λmax，比較兩者λmax差異。

2.7 蝦紅素穩(wěn)定性

2.7.1光照條件將少量蝦紅素粉末溶于二甲基亞砜，使初始吸光值介于0.2和0.8之間，并測(cè)定初始吸光值。分別在避光、太陽(yáng)光、室內(nèi)自然光、燈光和紫外光5種條件下處理，8h后測(cè)定其在495nm下的吸光值，計(jì)算色素保留率，評(píng)價(jià)其穩(wěn)定性。

色素保留率計(jì)算公式：

2.7.2 金屬離子將少量蝦紅素粉末溶解于二甲基亞砜，使其在495nm下的初始吸光值介于0.2和0.8之間。取3mL蝦紅素溶液，各加入0.01mol/L的Ca2+、Mg2+、Zn2+、Cu2+、Na+、Fe3+、Fe2+的硫酸鹽水溶液1mL，室溫避光放置2d后，測(cè)定其在495nm下的吸光值，計(jì)算色素保留率。

2.7.3 pH配制3%的蝦紅素乙酸乙酯溶液，之后按體積比1∶9加入15%的吐溫水溶液(含7%乙醇，pH=7.0)配成蝦紅素母液，用緩沖液調(diào)整其pH為3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0，室溫避光放置2d后，測(cè)定其吸光值，計(jì)算色素保留率。

2.7.4 溫度將少量蝦紅素粉末溶解于二甲基亞砜，使其在495nm下的初始吸光值在0.6左右。測(cè)定蝦紅素在15、40、60和80℃下的穩(wěn)定性，計(jì)算色素保留率。

3結(jié)果與討論

3.1 蝦紅素制備工藝條件優(yōu)化研究皂化反應(yīng)條件優(yōu)化

前期試驗(yàn)表明，由于皂化反應(yīng)是界面反應(yīng)，皂化在水溶液中進(jìn)行會(huì)導(dǎo)致堿和蝦青素酯接觸不充分降低皂化效率，故皂化助溶劑選取有機(jī)溶劑。本實(shí)驗(yàn)采用無(wú)毒的乙醇作為溶劑。且比較發(fā)現(xiàn)KOH比NaOH的皂化效果更好，所以選擇KOH-乙醇溶液進(jìn)行雨生紅球藻油的皂化。

皂化過(guò)程中堿濃度、皂化時(shí)間和溫度對(duì)皂化反應(yīng)的影響如圖2所示。由圖中結(jié)果可知，隨著堿濃度的升高，皂化液中蝦紅素含量逐漸增加，后期趨于穩(wěn)定。由于堿濃度過(guò)高會(huì)造成后續(xù)脫鹽較困難，因此，綜合考慮選擇堿液濃度為7%；皂化過(guò)程中，隨反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)，蝦紅素生成量增加，140和120min皂化液中蝦紅素含量相差不大，考慮時(shí)間過(guò)長(zhǎng)可能會(huì)導(dǎo)致蝦紅素二次氧化降解，因此，選擇120min作為合適的皂化時(shí)間；通過(guò)對(duì)比反應(yīng)溫度對(duì)蝦紅素生成量的影響發(fā)現(xiàn)，4℃下皂化反應(yīng)速率緩慢，蝦紅素生成量明顯低于其他溫度，15℃下蝦紅素含量最高，當(dāng)溫度高于15℃時(shí)，溫度升高蝦紅素含量反而略有下降，推測(cè)溫度升高有可能加快蝦紅素降解，故選擇15℃作為合適的皂化溫度。綜上所述，制備蝦紅素的最佳工藝條件為：堿液濃度7%，反應(yīng)溫度15℃，反應(yīng)時(shí)間為120min。在此條件下制備蝦紅素，計(jì)算蝦紅素得率為62.16%。

圖2　堿濃度、皂化時(shí)間和溫度對(duì)雨生紅球藻藻油皂化反應(yīng)的影響

3.2 蝦紅素制備過(guò)程表征

采用HPLC法檢測(cè)皂化液中蝦紅素在蝦青素類物質(zhì)中的含量。圖3為皂化前(a)和皂化過(guò)程中(b)的HPLC圖。皂化前全部為蝦青素酯，皂化后蝦青素酯降解，產(chǎn)生了游離的蝦青素和蝦紅素，隨反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)，酯全部水解，蝦青素含量逐漸降低，蝦紅素含量逐漸升高。經(jīng)HPLC-DAD-(APCI)MS/MS分析表明，峰1(保留時(shí)間8.634min)為蝦青素([M+H]+597.5)，峰2(保留時(shí)間9.565min)為半蝦紅素(分子量[M+H]+595.5)，峰3(保留時(shí)間10.718min)為蝦紅素([M+H]+593.3)。

3.3 LC-MS/MS結(jié)果

蝦紅素粉末與標(biāo)準(zhǔn)品液相對(duì)照結(jié)果(見(jiàn)圖4)表明所得粉末成分主要為蝦紅素。結(jié)合文獻(xiàn)[3]，由皂化液純化后得到的粉末MS譜圖分析蝦紅素裂解規(guī)律如圖5所示。m/z593.4為蝦紅素質(zhì)子化的分子離子峰，m/z575.5為[M+H-H2O]+，即蝦紅素分子失去一分子水所產(chǎn)生的碎片離子峰，為蝦紅素骨架的特征碎片離子，因此推斷粉末成分為蝦紅素。根據(jù)蝦紅素的二級(jí)質(zhì)譜圖分析其裂解規(guī)律，發(fā)現(xiàn)蝦紅素的裂解易發(fā)生在共軛不飽和雙鍵的長(zhǎng)鏈上，分析其特征碎片可以為研究其降解機(jī)理提供理論基礎(chǔ)。

圖3　雨生紅球藻藻油皂化前(a)和皂化過(guò)程中(b)HPLC-DAD圖譜及峰1、2和3的質(zhì)譜圖

圖4　蝦紅素標(biāo)準(zhǔn)品(a)和樣品(b)HPLC圖譜

圖5　樣品二級(jí)質(zhì)譜圖及蝦紅素裂解規(guī)律

3.4 蝦紅素純度

繪制的蝦紅素標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為y=4.000 9x-20.700，且R2=1.000 0，經(jīng)計(jì)算，制得的樣品中蝦紅素純度為80.36%。

3.5 蝦紅素光譜特性

光譜掃描結(jié)果(見(jiàn)圖6)顯示蝦青素的最大吸收波長(zhǎng)為480nm左右，蝦紅素最大吸收波長(zhǎng)為495nm，表明蝦紅素增加2個(gè)雙鍵后吸收光譜發(fā)生了紅移，所以蝦紅素比蝦青素在溶劑中顏色更為鮮艷。

圖6　蝦青素和蝦紅素光譜掃描結(jié)果

3.6 穩(wěn)定性

3.6.1光照條件由圖7(a)比較不同光源照射8h后蝦紅素的穩(wěn)定性。紫外光對(duì)蝦紅素破壞最嚴(yán)重，在連續(xù)照射8h后蝦紅素完全變?yōu)闊o(wú)色。日光對(duì)蝦紅素也有一定的破壞作用，原因可能是日光中有一定紫外線。而自然光和燈光相對(duì)較柔和，因此自然光、燈光和避光條件對(duì)蝦紅素影響較小。與其他類胡蘿卜素相似，蝦紅素對(duì)光的敏感性歸結(jié)于其分子內(nèi)部不飽和雙鍵等特殊結(jié)構(gòu)在光作用下自身的氧化分解，從而導(dǎo)致雙鍵消失，使得吸收光譜發(fā)生變化，吸收波長(zhǎng)不再出現(xiàn)于可見(jiàn)區(qū)域，色澤消褪[9-11]。所以蝦紅素要盡量避光保存，蝦紅素著色的食品在運(yùn)輸和儲(chǔ)藏過(guò)程中也要注意避光以保證其品質(zhì)。

3.6.2 金屬離子在色素的提取加工及應(yīng)用的過(guò)程中往往要接觸到金屬離子，研究色素在金屬離子存在條件下的穩(wěn)定性對(duì)加工應(yīng)用而言是很有參考價(jià)值的。如圖7(b)所示，F(xiàn)e3+存在時(shí)蝦紅素?fù)p失最嚴(yán)重，保留率僅為19.47%，其次是Ca2+、Cu2+，而Mg2+、Zn2+、Na+和Fe2+對(duì)蝦紅素影響不大。宋素梅等[12]研究結(jié)果表明，Cu2+、Fe2+和Fe3+對(duì)南極磷蝦蝦殼中的蝦青素破壞最為嚴(yán)重，其中Fe3+對(duì)蝦青素的影響最大，對(duì)蝦紅素而言，同樣是Fe3+對(duì)其穩(wěn)定性影響最大，猜測(cè)可能是與Fe3+氧化能力有關(guān)。因此在蝦紅素制取和應(yīng)用過(guò)程中要盡量避免使用鐵器。

圖7　光照(a)、金屬離子(b)、pH(c)和溫度(d)對(duì)蝦紅素穩(wěn)定性的影響

3.6.3 pH考慮到蝦紅素在食品中的應(yīng)用，測(cè)定其在pH為3～8范圍內(nèi)的穩(wěn)定性。圖7(c)表明，蝦紅素在pH為3～8范圍內(nèi)，隨pH升高，蝦紅素保留率提高，故弱堿性有利于蝦紅素的穩(wěn)定，而過(guò)酸則會(huì)對(duì)蝦紅素產(chǎn)生破壞作用。

3.6.4 溫度由圖7(d)可知，在溫度為15 和40℃時(shí)蝦紅素較為穩(wěn)定，加熱60min時(shí)吸光值分別下降了1.89%和4.04%。而60和80℃時(shí)蝦紅素會(huì)產(chǎn)生降解，吸光值下降7.77%和38.20%。表明蝦紅素對(duì)溫度具有一定的穩(wěn)定性，在較低溫度下穩(wěn)定性較好，溫度越高，蝦紅素越不穩(wěn)定，越容易發(fā)生降解從而褪色，影響其著色效果。所以蝦紅素的保存和使用要避免高溫。

4結(jié)語(yǔ)

本文創(chuàng)新性地以雨生紅球藻為原料，采用皂化法和溶劑分配法分離制備高純度蝦紅素，確定了最佳皂化工藝:堿液濃度為7%，皂化時(shí)間為120min，溫度為15℃，并采用酸洗、醇洗和水洗的方法純化出蝦紅素。此方法較合成法操作更為簡(jiǎn)便，且能夠得到較高純度的蝦紅素，適合工業(yè)化生產(chǎn)。采用HPLC-DAD-MS/MS方法對(duì)純化后粉末進(jìn)行分析，確定蝦紅素結(jié)構(gòu)及裂解規(guī)律。另外，本文系統(tǒng)研究了蝦紅素的穩(wěn)定性，考察了光照條件、金屬離子、pH和溫度對(duì)其穩(wěn)定性的影響。發(fā)現(xiàn)紫外光對(duì)蝦紅素的破壞作用最強(qiáng)，其次是太陽(yáng)光，燈光和室內(nèi)自然光在考察期內(nèi)對(duì)蝦紅素?zé)o明顯影響；Fe3+存在時(shí)蝦紅素?fù)p失嚴(yán)重，Ca2+、Cu2+有一定破壞作用；弱堿性條件有利于蝦紅素的穩(wěn)定；在較高溫度(80℃)下蝦紅素會(huì)產(chǎn)生降解。上述研究結(jié)果可以為蝦紅素生物活性研究及其應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

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責(zé)任編輯朱寶象

Preparation of Astacene fromHaematococcuspluvislisand Analysis of its Stability

LI Xue-Min, ZHOU Qing-Xin, XU Jie, YANG Lu, YANG Shu, ZHANG Ting, XUE Chang-Hu

(College of Food Science and Engineering, Ocean University of China, Qingdao 266003, China)

Abstract：Astacene is a kind of carotenoid which can be used as colorant and antioxidant. Its structure is similar to astaxanthin. While astaxanthin has been studied for years, no much attention has been paid on astacene. The purpose of this study is to prepare astacene from Haematococcus pluvislis extract and to study some properties of it. In this study, Haematococcus pluvislis extract was used as the raw material of preparing purifying astacene with saponification method and solvent distribution method with its structure and stability determined. In terms of the saponification condition, alkali concentration, reaction time and reaction temperature were optimized. The optimal condition was as follows: the concentration of alkali was 7%, saponification time was 120 min, and the temperature was 15 ℃. After saponification under this condition, the saponification solution was placed under 4 ℃ overnight to make astacene precipitate as much as possible. Then the solution was centrifuged and the sediment was washed with HCl-ethonal solution(v/v, 1∶9)and 50% ethonal for 4～5 times to remove alkali and impurities. At last, the sediment was freeze-dried and astacene was obtained. The conversion rate of astacene was up to 96.12% with a 62.16% yield of astacene. The purity of the sample was 80.36%. The product was analyzed by HPLC-DAD-(APCI)MS/MS, and the MS decomposition rule of astacene was parsed. It was found that astacene mainly lost water and ruptured on its conjugated double bonds in MS/MS. Finally, the effects of light conditions, metal ions, pH and temperature on astacene stability were studied. The results showed that ultraviolet had the strongest damaging effect on astacene. Fe3+, Ca2+and Cu2+caused damage to astacne at different degrees, while Zn2+, Mg2+, Na+and Fe2+had little effect on it. Acidity between pH 3 and 8, the stability of astacene increased with pH. With the increase of temperature, retention rate of astacene decreased. This study provided a reference for the research of astacene in terms of its activity, toxicology and application in food.

Key words:Haematococcus pluvislis; astacene; HPLC-MS; stability

中圖法分類號(hào)：TS254.9

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1672-5174(2016)01-049-07

作者簡(jiǎn)介：李學(xué)敏(1991-)，女，碩士。E-mail: haidalixuemin@163.com

收稿日期：2014-12-18；

修訂日期：2015-05-03

*基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(U1406402;31571864)；“泰山學(xué)者”建設(shè)工程專項(xiàng)經(jīng)費(fèi)項(xiàng)目資助

DOI：10.16441/j.cnki.hdxb.20140415

引用格式：李學(xué)敏， 周慶新， 徐杰， 等. 雨生紅球藻蝦紅素的制備及其穩(wěn)定性研究[J]. 中國(guó)海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)， 2016， 46(1)： 49-55.

LI Xue-Min, ZHOU Qing-Xin, XU Jie, et al.An integrative evaluation of ecological effect of artificial reefs with entropy-weighted fuzzy matter-element method[J]. Periodical of Ocean University of China, 2016, 46(1): 49-55.

Supported by National Natural Science Foundation of China(U1406402;31571864)； Special Financial Fund of Taishan Scholars Construction Program

**通訊作者： E-mail: xuech@ouc.edu.cn