黃山珊，沈清

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，重慶 400000)

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尿足細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物在糖尿病腎病領(lǐng)域的研究進(jìn)展

黃山珊，沈清

(重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，重慶 400000)

摘要：足細(xì)胞是一種高度特異性終末分化細(xì)胞，其損傷與糖尿病腎病(DN)進(jìn)展密切相關(guān)，尿足細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物檢測有望成為一項(xiàng)DN早期診斷的無創(chuàng)傷性指標(biāo)。尿液中完整足細(xì)胞以及足細(xì)胞碎片的定量主要是通過標(biāo)記足細(xì)胞特異蛋白、mRNA及mi-RNA，其檢出的陽性率及準(zhǔn)確性有賴于各種定量方法的完善。探尋一種靈敏度高、操作簡便且成本低廉的檢測方法是目前尿足細(xì)胞標(biāo)記物檢測應(yīng)用于DN早期臨床診斷所亟待解決的問題。本文重點(diǎn)介紹了尿足細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志蛋白、mRNA、mi-RNA及胞外體等在該研究領(lǐng)域的新進(jìn)展，并分析目前存在的問題及發(fā)展前景。

關(guān)鍵詞：足細(xì)胞；生物學(xué)標(biāo)記；尿；糖尿病腎??；診斷

世界范圍內(nèi)糖尿病腎病(DN)的發(fā)病率在不斷增加，已成為發(fā)達(dá)國家終末期腎臟病(ESRD)的首要原因，約占我國ESRD病因的16.4%。臨床用于評價(jià)腎臟損傷的指標(biāo)如尿蛋白、血清肌酐、微球蛋白、尿微量白蛋白等都有各自的局限性，幾乎沒有標(biāo)志物可以準(zhǔn)確預(yù)測其進(jìn)程。近年來研究顯示，尿液足細(xì)胞相關(guān)標(biāo)志蛋白、足細(xì)胞mRNA、足細(xì)胞mi-RNA、胞外體等可能為臨床治療、預(yù)測DN進(jìn)展及預(yù)后提供一個(gè)新的無創(chuàng)傷的指標(biāo)。本文就尿液足細(xì)胞相關(guān)標(biāo)記物檢測在DN領(lǐng)域的研究進(jìn)展作一綜述。

1足細(xì)胞的生物學(xué)特點(diǎn)及DN足細(xì)胞損傷的機(jī)制

1.1足細(xì)胞的生物學(xué)特點(diǎn)足細(xì)胞又稱腎小球臟層上皮細(xì)胞，是一種高度特異性終末分化細(xì)胞，與內(nèi)皮細(xì)胞、腎小球基底膜(GBM)共同構(gòu)成腎小球?yàn)V過

屏障，維持正常的腎小球?yàn)V過功能。正常足細(xì)胞由細(xì)胞體、主足突及次級足突組成。足突由基底部、頂部及SD三部分組成，這三部分特異表達(dá)的蛋白分子和以肌動蛋白為主的細(xì)胞骨架系統(tǒng)相互協(xié)同作用，保證了足細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的穩(wěn)定[1]?；啄^(qū)蛋白分子如α3β1整合素、整合素鏈接酶，它們將足細(xì)胞錨定在GBM腎小球基底膜上，在維持足突正確位置、保證濾過膜完整性方面發(fā)揮重要作用；頂膜區(qū)蛋白分子主要有podocalyxin和podoplanin。podocalyxin是一種帶負(fù)電荷的小球唾液黏蛋白，是組成GBM電荷屏障的主要物質(zhì)。podoplanin是一種Ⅰ型跨膜糖蛋白，目前推測podoplanin的表達(dá)異常與足突融合有關(guān)；裂孔膜蛋白分子包括nephrin、podocin、CD2AP、NEPH1、densin、P-cadherin、ZO-1、FAT等，其中較關(guān)鍵的SD分子有nephrin、podocin、CD2AP，它們共同穩(wěn)定裂孔隔膜完整性，同時(shí)作為足細(xì)胞裂孔隔膜分子與骨架蛋白相互鏈接，共同參與足細(xì)胞的黏附、信號傳導(dǎo)、吞噬等生理活動；細(xì)胞骨架蛋白主要包括actin、α-actinin-4和synaptopodin，起橋梁作用分別連接基底膜的整合素和裂孔膜蛋白，對維持足細(xì)胞正常形態(tài)功能起重要作用[2]。

任何影響足細(xì)胞相關(guān)結(jié)構(gòu)蛋白的病理刺激都可導(dǎo)致足細(xì)胞正常骨架結(jié)構(gòu)的改變，如果足突能再次形成指狀突起結(jié)構(gòu)，肌動蛋白細(xì)胞骨架得以修復(fù)，早期的足細(xì)胞損傷是可逆的。但足細(xì)胞長期持續(xù)損傷會使足突融合消失、空泡及假囊腫形成，足細(xì)胞發(fā)育停止、去分化及細(xì)胞凋亡，刺激壁層上皮細(xì)胞增殖，腎小球基底膜皺縮，毛細(xì)血管損失，進(jìn)一步導(dǎo)致球性硬化；同時(shí)足細(xì)胞與基底膜相互作用減弱，鉚釘于腎小球基底膜的足細(xì)胞松動，甚至從基底膜剝離、脫落，殘存足細(xì)胞代償性工作，最終失代償，造成不可逆的細(xì)胞丟失，引起濾過膜機(jī)械及電荷屏障功能異常，蛋白漏出，因此足細(xì)胞損傷常導(dǎo)致臨床出現(xiàn)蛋白尿[3,4]。

1.2DN足細(xì)胞損傷機(jī)制隨著近年對足細(xì)胞損傷機(jī)制的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，DN中足細(xì)胞損傷不是單由某個(gè)因素所誘發(fā)，而是多個(gè)因素的聯(lián)合作用所致[5]。損傷機(jī)制主要包括：①血管緊張素Ⅱ通過破壞裂孔隔膜結(jié)構(gòu)和功能、誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡等多種途徑引起足細(xì)胞損傷；②高糖誘導(dǎo)氧化和抗氧化的失衡及氧自由基產(chǎn)生過多引起足細(xì)胞氧化應(yīng)激及細(xì)胞凋亡；③高糖增強(qiáng)TRPC6(新近發(fā)現(xiàn)的足細(xì)胞裂孔膜蛋白之一)啟動子活性，激活TRPC6通道，引起細(xì)胞氧化應(yīng)激和鈣超載導(dǎo)致足細(xì)胞損傷；④TGF-β1細(xì)胞因子誘導(dǎo)的足細(xì)胞變性增殖，降低足細(xì)胞的運(yùn)動性，最終導(dǎo)致腎小球纖維化；⑤胰島素抵抗(IR)促使葡糖糖在足細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)和吸收障礙，加劇足細(xì)胞損傷；⑥參與維持足細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能的相關(guān)miRNA異常表達(dá)，打破足細(xì)胞骨架結(jié)構(gòu)及內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)；⑦細(xì)胞骨架相關(guān)蛋白破壞改變足細(xì)胞動力學(xué)，促進(jìn)足細(xì)胞損傷。

DN狀態(tài)下足細(xì)胞損傷與蛋白尿的發(fā)生和發(fā)展密切相關(guān)，臨床上DN早期表現(xiàn)為腎小球高濾過狀態(tài)，續(xù)之出現(xiàn)尿微量白蛋白，尿中白蛋白量逐漸增高進(jìn)入臨床腎病期，最后發(fā)展為終末期腎病。在DN各期中均伴腎小球足細(xì)胞數(shù)目及密度的減少，Dalla等[6]發(fā)現(xiàn)2型糖尿病患者在DN早期就已出現(xiàn)足細(xì)胞的密度降低和結(jié)構(gòu)變化，并且與蛋白尿的增加有關(guān)。 Nakamura等[7]證實(shí)，顯性蛋白尿期CKD患者尿足細(xì)胞檢出陽性率高于微量白蛋白尿期CKD患者，且前者尿足細(xì)胞數(shù)高于后者?？梢婋S著DN臨床進(jìn)展，腎小球足細(xì)胞損傷脫落、數(shù)目減少，尿足細(xì)胞檢出率升高；尿足細(xì)胞是DN疾病活動的標(biāo)志物。

2與DN相關(guān)的尿足細(xì)胞標(biāo)記物

2.1尿足細(xì)胞標(biāo)志蛋白①podocalyxin：podocalyxin是足細(xì)胞計(jì)數(shù)中最常用的標(biāo)記物。尿液podocalyxin可通過多種方法檢測，包括間接免疫熒光法、免疫比濁法、ELISA法和流式細(xì)胞儀等[8]。Hara等[9]采用免疫熒光法檢測腎臟組織及尿液中podocalyxin分布表達(dá)，發(fā)現(xiàn)尿液中增加的podocalyxin來源于足細(xì)胞頂膜區(qū)，而非脫落的足細(xì)胞碎片，表明尿液中podocalyxin早于足細(xì)胞及其碎片的脫落，尿液中podocalyxin水平增加出現(xiàn)在腎臟損傷早期。Hara等[10]檢測了142例腎小球疾病和71例2型DN患者尿液中的podocalyxin，并設(shè)立69例健康患者作為對照，結(jié)果DN患者尿液podocalyxin水平高于對照組，且早于尿微量白蛋白的出現(xiàn)；同時(shí)尿液podocalyxin水平與血清HbA1C、尿白蛋白水平呈正相關(guān)，但與血清肌酐、腎小球慮過率水平無明顯關(guān)系。這更好地解釋了DN患者存在高糖誘導(dǎo)足細(xì)胞損傷機(jī)制，其血清肌酐、腎小球慮過率在正常范圍內(nèi)時(shí)已出現(xiàn)腎實(shí)質(zhì)的早期損傷；該研究還發(fā)現(xiàn)尿液podocalyxin水平與腎小管標(biāo)記物β2微球蛋白、α1微球蛋白、N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶水平呈正相關(guān)。De Nicola等[11]研究表明，DN患者腎小管損傷早于腎小球損傷，聯(lián)合檢測腎小球與腎小管標(biāo)記物能提高DN早期腎損傷檢出的準(zhǔn)確性。②nephrin：nephrin主要分布在足細(xì)胞裂孔隔膜區(qū)，nephrin、podocin和CD2AP相互作用構(gòu)成裂孔隔膜的功能單位。采用Western blotting法在健康人尿液中無法檢測到nephrin[12]。Jim等[13]研究證實(shí)，伴有微量至大量尿白蛋白的DN患者尿液nephrin檢出率為100%，而尿白蛋白陰性者檢出率為54%，且尿液nephrin與尿白蛋白/肌酐值、尿白蛋白呈正相關(guān)，與腎小球慮過率呈負(fù)相關(guān)。nephrin可能是糖尿病早期發(fā)展為DN的早期預(yù)測指標(biāo)，監(jiān)測尿液中nephrin蛋白可能為DN的早期診斷提供新的途徑。③podocin：podocin與nephrin共同維持SD結(jié)構(gòu)與功能完整，二者密切相關(guān)，目前多采用腎臟組織podocin蛋白及其mRNA標(biāo)記足細(xì)胞，而尿液中的podocin在DN早期診斷方面的研究鮮有報(bào)道。

podocalyxin還分布于腎臟的內(nèi)皮細(xì)胞和壁層上皮細(xì)胞，并不僅限于足細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌、前列腺癌等腫瘤的發(fā)生與podocalyxin異常表達(dá)有關(guān)[14]；既往研究認(rèn)為，nephrin僅表達(dá)于腎組織，目前仍有爭議[15]。盡管相關(guān)標(biāo)志蛋白已成為最常用的尿足細(xì)胞標(biāo)志物，但腎小球疾病本身會對這些蛋白的表達(dá)及分泌造成怎樣的影響，這些蛋白在腎單位及泌尿系統(tǒng)會有哪些病理生理變化還有待研究。有研究[16]指出，健康人尿液中也可檢出足細(xì)胞；故尿足細(xì)胞標(biāo)志蛋白來源于脫落的足細(xì)胞或足細(xì)胞碎片還是正常凋亡足細(xì)胞，還有待區(qū)別。

2.2尿足細(xì)胞標(biāo)志mRNAs與足細(xì)胞標(biāo)志蛋白相比，足細(xì)胞特異性mRNAs(采用PCR法檢測)更易定量，具有更高的敏感性和特異性。Sato等[17]通過大鼠模型及患者尿液檢測腎小球疾病狀態(tài)下尿足細(xì)胞mRNAs，認(rèn)為尿液足細(xì)胞mRNAs可望成為腎小球疾病診斷及監(jiān)測的有力指標(biāo)。有學(xué)者進(jìn)一步用實(shí)時(shí)PCR方法檢測了不同發(fā)病階段DN患者尿synaptopodin、podocalyxin、CD2-AP、α-actin4和podocin相關(guān)mRNA表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)隨疾病進(jìn)展，DKD患者尿液中以上相關(guān)分子mRNA表達(dá)增加，而且與估計(jì)的腎小球?yàn)V過率呈負(fù)相關(guān)，該作者也認(rèn)為尿中足細(xì)胞相關(guān)分子是DN的標(biāo)記物[18]。Lioudaki等[19]研究發(fā)現(xiàn)，相比非糖尿病患者，2型糖尿病患者尿nephrin及podocin相關(guān)mRNA水平明顯增高，而synaptopodin相關(guān)mRNA水平無明顯差別。該研究還證實(shí)尿液nephrin mRNA與podocin mRNA水平有明顯相關(guān)性，且在尿白蛋白陰性糖尿病患者二者已有顯著增高，尿nephrin mRNA與podocin mRNA可望成為DN患者早期腎臟損傷監(jiān)測指標(biāo)。隨慢性腎臟病的進(jìn)展，相比腎實(shí)質(zhì)及尿液中podocin mRNA水平，nephrin mRNA表達(dá)有下調(diào)趨勢。根據(jù)這一特性，F(xiàn)ukuda等[20]采用尿PNR(podocin/nephrin mRNA值)預(yù)測慢性腎臟病進(jìn)展，相比傳統(tǒng)指標(biāo)，如24 h尿蛋白定量、尿蛋白/肌酐值，PNR與腎臟病理組織分期有良好的相關(guān)性。這些研究均說明足細(xì)胞相關(guān)尿mRNA可作為DN嚴(yán)重程度分級的新的評價(jià)指標(biāo)。

2.3尿足細(xì)胞標(biāo)志mi-RNA血清或尿液足細(xì)胞mi-RNAs的異常表達(dá)與DN密切相關(guān)，在DN尚未出現(xiàn)明顯癥狀，或尿蛋白水平發(fā)生異常改變之前，血清或尿足細(xì)胞mi-RNAs的異常圖譜可能就已出現(xiàn)。尿足細(xì)胞mi-RNAs水平對判斷DN的進(jìn)展分級及預(yù)后有潛在的生物學(xué)標(biāo)志意義。Li等[21]通過體外足細(xì)胞培養(yǎng)模擬DN壓力應(yīng)激實(shí)驗(yàn)，運(yùn)用mi-RNA微陣列分析發(fā)現(xiàn)在壓力應(yīng)激導(dǎo)致足細(xì)胞黏附能力損傷時(shí)miR-124高表達(dá)，螺內(nèi)酯治療后表達(dá)降低，該研究提示miR-124可作為DN潛在性標(biāo)志物。此外，Liu等[22]通過實(shí)時(shí)定量熒光PCR檢測尿miR-126發(fā)現(xiàn)，與非DN患者相比，2型DN患者尿miR-126的水平顯著升高。經(jīng)治療后，多數(shù)DN患者尿miR-126水平顯著降低。這項(xiàng)研究提示，尿miR-126可作為DN有效的預(yù)測標(biāo)志物。Szeto等[23]研究提示，DN患者尿沉渣中miR-21表達(dá)量與腎小球?yàn)V過率呈正相關(guān)，尿沉渣中有高含量miR-21的患者血透生存期較長。由此猜測，高表達(dá)的miR-21或許是DN的保護(hù)因素。mi-RNA在尿液中表達(dá)較穩(wěn)定，有望成為DN的生物標(biāo)記物；但尿液mi-RNAs的表達(dá)量較低，尿液中提取mi-RNAs的過程復(fù)雜，尿足細(xì)胞特異性mi-RNA作為DN早期診斷性標(biāo)志物的報(bào)道甚少，還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

2.4尿足細(xì)胞細(xì)胞外囊泡EVsEVs是由泌尿系統(tǒng)各種細(xì)胞包括足細(xì)胞、腎小管上皮細(xì)胞及泌尿道上皮細(xì)胞等釋放的膜性球形小體，其內(nèi)部和表面可攜帶多種信息傳遞因子，如膜蛋白、胞質(zhì)蛋白及核蛋白[24,25]。Zubiri等[26]通過比較健康正常人群及DN患者尿uEVs，發(fā)現(xiàn)了254種不同蛋白質(zhì)。研究顯示，足細(xì)胞相關(guān)尿EVs水平對DN的進(jìn)展分級及預(yù)后有潛在的生物標(biāo)志學(xué)意義。Kalani等[27]采用差數(shù)離心方法分離48例Ⅰ型糖尿病患者和25例健康對照者尿胞外體WT-1蛋白，發(fā)現(xiàn)伴蛋白尿的糖尿病患者尿胞外體WT-1蛋白水平明顯高于無蛋白尿的糖尿病患者，且后者中僅半數(shù)患者尿胞外體WT-1蛋白陽性。該研究還發(fā)現(xiàn)，DN患者尿胞外體WT-1蛋白水平與尿蛋白/肌酐值、尿白蛋白/肌酐值及血清肌酐呈正相關(guān)，DN患者尿胞外體WT-1蛋白水平隨腎功能損害加重而增加。提示尿WT-1蛋白可反映DN患者足細(xì)胞早期損傷。Barutta等[28]研究發(fā)現(xiàn)，正常人群與微量蛋白尿患者尿液比較有22種不同的胞外體mi-RNA表達(dá)，尿胞外體miR-145及miR-130a在伴有微量蛋白尿的DN患者中表達(dá)更明顯；相反，對比不伴有蛋白尿的糖尿病患者及健康人群，尿胞外體miR-155和miR-424表達(dá)則明顯降低，而且在DN發(fā)病早期，胞外體miR-145水平在尿液和腎小球中都表現(xiàn)為高表達(dá)。該研究通過對早期DN動物模型的研究提示，尿胞外體中miR-145水平升高與腎小球內(nèi)miR-145的過表達(dá)是一致的。這一發(fā)現(xiàn)也預(yù)示著尿胞外體miRNA可能成為DN患者早期腎臟病變的標(biāo)志物。但尿液中只有約3%的蛋白質(zhì)以EVs形式存在[29]，目前的分離尿EVs方法均非常復(fù)雜、昂貴[30]。標(biāo)準(zhǔn)化收集尿液及分離EVs還需要在傳統(tǒng)檢測方法的基礎(chǔ)上加以創(chuàng)新。

糖尿病患者發(fā)展至DN早期是一個(gè)緩慢過程，臨床尚無早期發(fā)現(xiàn)及監(jiān)測DN進(jìn)展的特異性指標(biāo)，尿足細(xì)胞標(biāo)志物檢測作為一項(xiàng)無創(chuàng)且易在臨床開展的檢測方法，有望為DN及腎臟病的診斷和治療以及改善預(yù)后開拓新的思路與空間。尿液中完整足細(xì)胞以及足細(xì)胞碎片的定量主要是通過標(biāo)記足細(xì)胞特異蛋白、mRNA及mi-RNA，其檢出的陽性率及準(zhǔn)確性有賴于各種定量方法的完善。探尋一種靈敏度高、操作簡便且成本低廉的檢測方法是目前尿足細(xì)胞標(biāo)記物檢測應(yīng)用于DN早期臨床診斷所亟待解決的問題。目前該方面的研究尚處于初始階段，缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，有待獨(dú)立的、大樣本研究驗(yàn)證。尿足細(xì)胞標(biāo)記物在DN早期診斷方面的潛在價(jià)值還需要進(jìn)一步探索。

參考文獻(xiàn)：

[1] 徐磊,楊波,鄭金亮,等.足細(xì)胞的結(jié)構(gòu)功能與蛋白尿發(fā)生的研究進(jìn)展[J].中國醫(yī)藥指南,2013,11(36):364-365.

[2] 劉文佳,曹靈.足細(xì)胞轉(zhuǎn)分化及其與腎小球疾病的關(guān)系研究進(jìn)展[J].山東醫(yī)藥,2014,54(44):95-97.

[3] Reidy K, Susztak K.Epithelial-mesenchymal transition and podocyte loss in diabetic kidney disease[J].Am J Kidney Dis, 2009,54(4):590-593.

[4] Kriz W, Shirato I, Nagata M, et al. The podocyte′s response to stress： the enigma of foot process effacement[J].Am J Physiol Renal Physiol, 2013,304(4)：F333-347.

[5] 胡春麗,謝席勝,馮勝剛.糖尿病腎臟疾病足細(xì)胞損傷機(jī)制研究新進(jìn)展[J].臨床腎臟病雜志,2015,15(1):58-60.

[6] Dalla Vestra M, Masiero A, Roiter AM, et al. Is podocyte injury relevant in diabetic nephropathy? Studies in patients with type 2 diabetes[J]. Diabetes, 2003,52(4):1031-1035.

[7] Nakamura T, Ushiyama C, Suzuki S, et al. Urinary excretion of podocytes in patients with diabetic nephropathy[J]. Nephrol Dial Transplant, 2000,15(9):1379-1383.

[8] 陳桂香,顧勇.尿液足細(xì)胞檢測在腎臟病中應(yīng)用的進(jìn)展[J].中華腎臟病雜志,2010,26(1):66-69.

[9] Hara M, Yanagihara T, Kihara I, et al. Apical cell membranes are shed into urine from njured podocytes：a novel phenomenon of podocyte injury[J]. J Am Soc Nephrol, 2005,16(2):408-416.

[10] Hara M, Yamagata K, Tomino Y, et al. Urinary podocalyxin is an early marker for podocyte injury in patients with diabetes: establishment of a highly sensitive ELISA to detect urinary podocalyxin[J]. Diabetologia, 2012,55(11):2913-2919.

[11] De Nicola L, Gabbai FB, Liberti ME, et al. Sodium/glucose cotransporter 2 inhibitors and prevention of diabetic nephropathy: targeting the renal tubule in diabetes[J]. Am J Kidney Dis, 2014,64(1):16-24.

[12] do Nascimento JF, Canai LH, Gerchman F, et al. Messenger RNA levels of podocytes-associated proteins in subjects with different degrees of glucose tolerance with or without nephropathy[J]. BMC Nephrol, 2013,(14):214.

[13] Jim B, Ghanta M, Qipo A, et al. Dysregulated Nephrin in Diabetic Nephropathy of Type 2 Diabetes: A Cross Sectional Study[J]. PLoS One, 2012,7(5):e36041.

[14] Skobeme A, Konieezny A, Schifer M. Glomerular epithelial cells in the urine：what has to be done to make them worthwhile[J]. Am J Physiol Renal Physid, 2009,296(2)：F230-F241.

[15] Kuusniemi AM, Kestil M, Patrakka J, et al. Tissue expression of nephrin in human and pig[J]. Pediatr Res, 2004,55(5):774-781.

[16] Vogelmann SU, Nelson WJ, Myers BD, et al. Urinary excretion of viable podocytes in health and renal disease[J]. Am J Physiol Renal Physiol, 2003,285(1):40-48.

[17] Sato Y, Wharram BL, Lee SK, et al. Urine podocyte mRNAs mark progression of renal disease[J]. J Am Soc Nephrol, 2009,20(5):1041-1052.

[18] Zheng M, Lv LL, Ni J, et al. Urinary podocyte-associated mRNA profile in various stages of diabetic nephropathy[J]. PLoS One, 2011,6(5):e20431.

[19] Lioudaki E, Stylianou KG, Petrakis I, et al. Increased urinary excretion of podocyte markers in normoalbuminuric patients with diabetes[J]. Nephron, 2015,131(1):34-42.

[20] Fukuda A, Wickman LT, Venkatareddy MP, et al. Urine podocin: nephrin mRNA ratio (PNR) as a podocyte stress biomarker[J]. Nephrol Dial Transplant, 2012,27(11):4079-4087.

[21] Li D, Lu Z, Jia J, et al. Changes in microRNAs associated with podocytic adhesion damage under mechanical stress[J]. J Renin Angiotensin Aldosterone Syst, 2015,14(2):97-102.

[22] Liu R, Li G, Cui XF, et al. Methodological evaluation and conparison of five urinary albumin measurements[J]. J Clin Lab Anal, 2011,25(5):324-329.

[23] Szeto CC, Ching-Ha KB, Ka-Bik L, et al. Micro-RNA expression in the urinary sediment of patients with chronic kidney diseases[J]. Dis Markers, 2012,33(3):137-144.

[24] van der Pol E, Boing AN, Harrison P, et al. Classification, functions and clinical relevance of extracellular vesicles[J]. Pharmacol Rev, 2012,64(3):676-705.

[25] Zhou H, Yuen PS, Pisitkun T, et al. Collection, storage, preservation, and normalization of human urinary exosomes for biomarker discovery[J]. Kidney Int, 2006,69(8):1471-147.

[26] Zubiri I, Posada-Ayala M, Sanz-Maroto A, et al. Diabetic nephropathy induces changes in the proteome of human urinary exosomes as revealed by label-free comparative analysis[J]. J Proteomics, 2014(96):92-102.

[27] Kalani A, Mohan A, Godbole MM, et al. Wilm’s tumor-1 protein levels in urinary exosomes from diabetic patients with or without proteinuria[J]. PLoS One, 2013,8(3):e60177.

[28] Barutta F, Triearico M, Corbelli A, et al. Urinary exosomal micro-RNAs in incipient diabetic nephropathy[J]. PLoS One, 2013,8(11):e73798.

[29] Pisitkun T, Johnstone R, Knepper MA. Discovery of urinary biomarkers[J]. Mol Cell Proteomics, 2006,5(10):1760-1771.

[30] Ana Gámez-Valero, Sara Inés Lozano-Ramos, Ioana Bancu, et al. Urinary extracellular vesicles as source of biomarkers in kidney diseases[J]. Front Immunol, 2015(6):6.

(收稿日期：2015-08-15)

中圖分類號：R587.2

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號：1002-266X(2016)04-0094-04

doi:10.3969/j.issn.1002-266X.2016.04.037

通信作者：沈清(E-mail: sq4817@163.com)