鄧海英， 賴為國(guó)（欽州市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣西欽州535099）

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柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠血管緊張素、醛固酮、降鈣素基因相關(guān)肽的影響

鄧海英， 賴為國(guó)
（欽州市第二人民醫(yī)院藥劑科，廣西欽州535099）

摘要：目的 對(duì)柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠模型的作用機(jī)制進(jìn)行探討。方法 50只SD大鼠采用結(jié)扎左腎血管法進(jìn)行腎性高血壓大鼠模型造模。造模4周后測(cè)血壓，將造模成功的大鼠隨機(jī)分為模型組，卡托普利組，柿葉黃酮高（400 mg/kg）、中（200 mg/kg）、低劑量組（100 mg/kg），每組各10只大鼠。另設(shè)空白組大鼠10只?？ㄍ衅绽M、柿葉黃酮組每天灌胃給藥一次，連續(xù)給藥12周，空白組和模型組給予等體積的生理鹽水。末次給藥2 h后，使用無(wú)創(chuàng)血壓測(cè)量系統(tǒng)對(duì)各組大鼠血壓進(jìn)行測(cè)量，放射免疫法測(cè)大鼠血漿中血管緊張素Ⅰ（AngⅠ）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）、降鈣素基因相關(guān)肽（CGIP）及主動(dòng)脈組織中AngⅡ的含有量。稱量左腎與右腎的總質(zhì)量，計(jì)算左腎重與右腎重比值（LK/IK）。結(jié)果 與空白組相比，模型組的血壓顯著升高（P＜0.05），AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGIP的含有量也顯著升高（P＜0.05），左腎重與右腎重的比值下降（P＜0.05）。與模型組相比，卡托普利組、柿葉黃酮組的大鼠的血壓以及血漿中AngⅡ、ALD含有量較模型組低，AngⅠ和CGIP的含有量較模型組高（P＜0.05）?？ㄍ衅绽M、柿葉黃酮組主動(dòng)脈中AngⅡ的含有量較模型組低（P＜0.05），左腎重與右腎重的比重有所增加（P＜0.05）。結(jié)論 柿葉黃酮具有良好的降血壓效果，能通過(guò)增加血漿中AngⅠ、CGIP的含有量并降低AngⅡ、ALD和主動(dòng)脈組織中的AngⅡ含有量，從而調(diào)節(jié)腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（IAAS），舒張血管平滑肌，使血管收縮力減弱而達(dá)到降壓的效果。

關(guān)鍵詞：柿葉黃酮；腎性高血壓；血管緊張素；醛固酮；降鈣素基因相關(guān)肽

腎性高血壓是一種與腎臟實(shí)質(zhì)性病以及腎動(dòng)脈病變等其他多種因素所引起的患者血壓升高的心血管疾病。腎性高血壓屬于繼發(fā)性高血壓，其病發(fā)人群多為30歲前或50歲后［1］。臨床癥狀常表現(xiàn)為病程短、進(jìn)展快舒張期常伴隨腰酸背痛［2］。目前臨床上治療腎性高血壓的手段以藥物治療為主。常用的治療藥物有鈣離子通道阻滯劑、利尿劑、血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制、β受體阻滯劑、α受體阻滯劑、硝酸脂類降壓藥［3］。

經(jīng)廣西中醫(yī)藥研究院鑒定柿葉為柿樹(shù)科（Ebenaceae）柿樹(shù)屬（Diospyros）植物柿（Diospyros kaki L.f.）的新鮮或干燥葉［4］。其味苦、性寒。柿葉含有黃酮甙、鞣質(zhì)、酚類、多糖、揮發(fā)油、有機(jī)酸等物質(zhì)。具有抗菌消炎、生津止渴、清熱解毒、潤(rùn)肺強(qiáng)心、鎮(zhèn)咳止血、抗癌防癌等多種功能［5］。本研究主要研究探討柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠模型的作用機(jī)制，為柿葉黃酮的研究開(kāi)發(fā)提供科學(xué)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SD大鼠，SPF級(jí)，雌雄各半，體質(zhì)量（200±20）kg，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，試驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（桂）2009-0002，試驗(yàn)動(dòng)物合格證號(hào)SCXK（桂）2009-0005。

1.2 儀器與試劑 Ge1 doc 2000低溫高速離心機(jī)（德國(guó)西門子公司）；BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司）；-40℃低溫冰箱（青島海爾股份有限公司）；DFM-96眾成γ計(jì)數(shù)儀；卡托普利片（汕頭金石制藥總廠，批號(hào)140617）；血管緊張素Ⅰ（北京北方生物技術(shù)研究所，批號(hào)20140705）；血管緊張素Ⅱ（北京北方生物技術(shù)研究所，批號(hào)20140709）；醛固酮（北京北方生物技術(shù)研究所，批號(hào)20140628）；降鈣素基因相關(guān)肽放射免疫試劑盒（北京北方生物技術(shù)研究所，批號(hào)20140704）。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 腎性高血壓大鼠模型建立［6］3%戊巴比妥鈉（45 mg/kg）腹腔注射到SD大鼠體內(nèi)，用75%酒精對(duì)大鼠腹部左側(cè)皮膚消毒，切口，沿左季肋下1.5～2.0 cm，距脊柱約1.0 cm處用玻璃棒小心分離左腎動(dòng)脈，用縫線對(duì)左腎動(dòng)脈進(jìn)行結(jié)扎，對(duì)肌肉及皮膚逐層縫合?？p合后腹腔注射青霉素鈉2×105U預(yù)防術(shù)后傷口感染。空白組10只SD大鼠進(jìn)行不結(jié)扎左腎動(dòng)脈的假手術(shù)操作。術(shù)后4周測(cè)定手術(shù)大鼠尾動(dòng)脈收縮壓，高于160 mmHg的大鼠可視為腎性高血壓模型成功。

1.3.2 柿葉黃酮提?。?］新鮮柿葉用80%乙醇在80℃下回流提取2 h，乙酸乙酯將乙醇對(duì)提取液萃取分離后用聚酰胺樹(shù)脂將乙酸乙酯萃取液吸附分離出柿葉黃酮，含有量達(dá)73%。

1.3.3 給藥及給藥方法 將50只腎性高血壓大鼠隨機(jī)分為5組，即模型組，卡托普利組（40 mg/kg），柿葉黃酮

高、中、低劑量組（400、200、100 mg/kg），每組10只。另設(shè)空白組大鼠10只。灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥12周?？瞻捉M與模型組每天灌胃給予等體積的生理鹽水。

1.3.4 觀察指標(biāo) 末次給藥2 h后，對(duì)各組大鼠血壓進(jìn)行測(cè)量，頸椎脫臼處死大鼠。取血，分離血漿。放射免疫法測(cè)大鼠血漿中血管緊張素Ⅰ（AngⅠ）、血管緊張素Ⅱ（AngⅡ）、醛固酮（ALD）、降鈣素基因相關(guān)肽（CGIP）的含有量。切取0.1 g胸主動(dòng)脈組織，勻漿后測(cè)定AngⅡ的含有量。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 本研究數(shù)據(jù)應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)分析。數(shù)據(jù)以（±s）表示，多樣本均數(shù)間比較采用one-way ANOVA分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)腎性高血壓大鼠血壓的影響 與空白組比較，模型組的血壓明顯升比空白組高，證明造模成功（P＜0.05）；與模型組比較，各治療組大鼠的血壓均有所下降（P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠血壓的影響（±s，n＝10，1 mm Hg＝0.133 kPa）

表1 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠血壓的影響（±s，n＝10，1 mm Hg＝0.133 kPa）

注：與空白組比較，1）P＜0.01；與術(shù)前比較，2）P＜0.01；與術(shù)后4周比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01

組別 　　劑量/（mg·kg-1）　　血壓/mmHg術(shù)前　　術(shù)后4周　　給藥6周空白組120.42±15.72　118.96±16.88　118.85±17.46模型組　-　119.83±17.31　169.42±24.271）2）　170.35±23.411）卡托普利組　40　120.25±15.56　170.33±20.142）　129.87±22.764）柿葉黃酮組　400　119.87±19.97　170.07±19.322）　140.24±21.894）柿葉黃酮組　200　120.12±15.42　168.42±17.962）　148.73±22.724）柿葉黃酮組　100　119.94±16.85　169.38±19.222）　155.61±20.873）-

2.2 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠血漿中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGIP的影響 與空白組相比，模型組血漿中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGIP的含有量顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，各給藥治療組大鼠的血漿中AngⅡ、ALD含有量有所降低，AngⅠ、CGIP的含有量增加（P＜0.05）。見(jiàn)表2。

表2 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠血漿中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGRP的影響（±s，n＝10）

表2 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠血漿中AngⅠ、AngⅡ、ALD、CGRP的影響（±s，n＝10）

注：與空白組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與模型組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01

組別　　劑量/（mg·kg-1）　AngⅠ/（ng·L-1）　AngⅡ/（ng·L-1）　ALD/（μg·L-1）　CGIP/（pg·mL-1）空白組10.53±2.26　390.28±38.56　0.21±0.02　82.76±20.54模型組　-　14.35±3.041）　1 292.11±37.952）　0.30±0.031）　115.16±37.862）卡托普利組　40　15.74±2.651）3）　356.81±40.754）　0.16±0.031）3）　126.83±26.972）3）柿葉黃酮高劑量組　400　15.65±3.432）3）　368.43±36.524）　0.22±0.023）　153.51±24.182）4）柿葉黃酮中劑量組　200　15.14±2.811）3）　429.65±34.931）4）　0.23±0.043）　140.72±23.512）3）柿葉黃酮低劑量組　100　14.75±2.961）3）　573.74±48.592）4）　0.25±0.021）　133.68±23.892）3）-

2.3 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠主動(dòng)脈組織中AngⅡ的影響 與空白組相比，模型組主動(dòng)脈組織中AngⅡ的含有量顯著升高（P＜0.05）；與模型組相比，各給藥治療組大鼠的主動(dòng)脈組織中AngⅡ的含有量均下降（P＜0.05）。見(jiàn)表3。

2.4 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠左腎重與右腎重比值的影響 與空白組相比，模型組左腎重與右腎重比值明顯降低（P＜0.01）；與模型組相比，各給藥治療組左腎重與右腎重比值均有增加（P＜0.05）。見(jiàn)表4。

表3 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠主動(dòng)脈組織中AngⅡ的影響（±s，n＝10）

表3 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠主動(dòng)脈組織中AngⅡ的影響（±s，n＝10）

注：與空白組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與模型組比較，3）P＜0.05，4）P＜0.01

組別　　劑量/（mg·kg-1）　AngⅡ/（ng·L-1）空白組538.82±58.54模型組　-　1 027.91±72.862）卡托普利組　40　602.68±66.794）柿葉黃酮高劑量組　400　650.43±57.431）4）柿葉黃酮中劑量組　200　721.85±68.161）4）柿葉黃酮低劑量組　100　826.37±73.982）3）-

表4 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠左腎重與右腎重比值的影響（±s，n＝10）

表4 柿葉黃酮對(duì)腎性高血壓大鼠左腎重與右腎重比值的影響（±s，n＝10）

注：與空白組比較，1）P＜0.05，2）P＜0.01；與模型組比較，3）P＜0.05

-1左腎重與右腎重比值空白組組別　　劑量/（mg·kg）　　左腎/mg　　右腎/mg 1 435.86±68.40　1 439.95±72.47　0.99±0.01模型組　-　902.41±65.522）　1 526.83±70.83　0.59±0.022）卡托普利組　40　1 035.37±52.471）3）　1 560.87±65.81　0.66±0.031）3）柿葉黃酮高劑量組　400　1 006.82±56.311）3）　1 549.04±79.84　0.64±0.021）3）柿葉黃酮中劑量組　200　987.43±69.572）　1 558.49±81.67　0.63±0.022）柿葉黃酮低劑量組　100　942.75±57.792）　1 551.78±60.75　0.60±0.032）-

3 討論

造模后的大鼠左腎重量和左腎重與右腎重比值較空白組明顯降低，而右腎的重量則明顯高于空白術(shù)組，證明造模術(shù)后的大鼠左腎明顯萎縮，右腎出現(xiàn)了代償性肥大說(shuō)明動(dòng)物模型復(fù)制成功。

通過(guò)對(duì)大鼠左腎動(dòng)脈進(jìn)行結(jié)扎，腎動(dòng)脈血流量減少，激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)（IAAS）。IAAS失去平衡后，由肝臟產(chǎn)生的血管緊張素原被釋入靜脈血中的腎素水解為AngⅠ，再經(jīng)肺循環(huán)中血管緊張素轉(zhuǎn)化酶（ACE）的催化轉(zhuǎn)化為AngⅡ。AngⅡ含有量增加，小動(dòng)脈平滑肌收縮，外周阻力增加。同時(shí)刺激腎上腺皮質(zhì)球狀帶，使ALD分泌增加，從而使腎小管遠(yuǎn)端集合管鈉再吸收增強(qiáng)，導(dǎo)致體內(nèi)水與鈉潴留，引起血壓升高［6，8-9］。

AngⅠ在正常的血漿濃度下無(wú)生理活性，只作為轉(zhuǎn)換酶的底物，的含有量能夠反映生成底物的含有量［10］。AngⅠ需通ACE的催化才能轉(zhuǎn)化成AngⅡ。由于卡托普利是一種血管緊張素轉(zhuǎn)化酶抑制劑，抑制ACE的活性，因此AngⅠ向AngⅡ的轉(zhuǎn)換受阻，血漿中剩余AngⅠ增多，故卡托普利組血漿AngⅠ含有量比模型組的高，AngⅡ含有量降低。實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果顯示柿葉黃酮組的AngⅠ含有量也比模型組高，AngⅡ含有量低于模型組。推測(cè)柿葉黃酮通過(guò)抑制血管緊張素轉(zhuǎn)化酶，減少AngⅠ向AngⅡ的轉(zhuǎn)換，使血管收縮力減弱而使血壓下降。ALD的生成主要受AngⅡ、促腎上腺皮質(zhì)激素以及體液中Na＋、K＋水平調(diào)節(jié)［11］。AngⅡ的含有量下降A(chǔ)LD的含有量也隨之降低，故卡托普利組與柿葉黃酮組中ALD的含有量較模型組低。CGIP是一種具有強(qiáng)大生理活性的舒血管因子。CGIP的含有量上升可使腎動(dòng)脈舒張、外周阻力降低，血壓下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，柿葉黃酮組CGIP的含有量比模型組高，推測(cè)柿葉黃酮提高血漿CGIP的含有量，舒張血管平滑肌使血壓下降。

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作者簡(jiǎn)介：鄧海英（1970—），女，主管藥師，從事腎性高血壓基礎(chǔ)研究工作。Te1：13977776009，E-mai1：denghaiying2012@163.com

基金項(xiàng)目：廣西高?？茖W(xué)技術(shù)研究項(xiàng)目（LX2014085）

收稿日期：2014-12-24

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.03.044

中圖分類號(hào)：I966

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：1001-1528（2016）03-0680-03