何振洋　胡冬華

長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林　長春　130117

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秋葵降糖顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

何振洋胡冬華

長春中醫(yī)藥大學(xué)，吉林長春130117

【摘要】目的：對秋葵降糖顆粒質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。方法：采用薄層色譜法對秋葵降糖顆粒進(jìn)行定性鑒別，采用紫外可見分光光度法對秋葵降糖顆粒中總黃酮進(jìn)行含量測定。結(jié)果：通過定性鑒別，秋葵總黃酮可以鑒別出來。秋葵總黃酮線性范圍為8~48mg/L，平均回收率是98.57%，RSD為0.52% 。結(jié)論：該方法可行，重現(xiàn)性比較好，能有效地控制秋葵降糖顆粒的質(zhì)量。

【關(guān)鍵詞】秋葵降糖顆粒；秋葵總黃酮；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

秋葵為錦葵科秋葵屬植物AbelmoschusesculentusL.Moench[1]，又名黃秋葵、羊角豆、咖啡黃葵、黃蜀葵，民間俗稱“洋辣椒”。原產(chǎn)于非洲，20世紀(jì)初從印度傳入中國，目前多見于中國南方。果莢常見綠色和紅色兩種，口感脆嫩，滑而不膩，有獨(dú)特香味，種子可以榨油[2]。藥用部位為黃葵的根、葉、花、果實(shí)或種子，其味淡，性寒，具有利咽、通淋、下乳、調(diào)經(jīng)之功效。民間用于治療糖尿病、咽喉腫痛、便澀淋癥、養(yǎng)胃護(hù)肝、預(yù)防癌癥。秋葵[3]中黃酮含量為2.8%，不僅具有防治糖尿病的功效，還具有抗氧化、防衰老的作用。另外，秋葵中含有豐富的維生素和礦物質(zhì)，富含的鋅和硒等微量元素對增強(qiáng)人體免疫抗癌能力有很大作用；黏多糖可以增強(qiáng)機(jī)體抵抗力，維持人體關(guān)節(jié)腔里關(guān)節(jié)膜和漿膜的光滑效果，削減脂類物質(zhì)在動脈管壁上的堆積，而且可以避免肝臟和腎臟中結(jié)締組織萎縮[3]。秋葵降糖顆粒是以秋葵莖、葉為藥材基源，利用現(xiàn)代化中藥制劑方法精制而成，實(shí)驗(yàn)依法對秋葵降糖顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究。

1儀器與材料

1.1儀器751GD紫外可見分光光度計(jì)(上海光學(xué)儀器公司)；賽多利斯QUINTIX224-1CN電子天平(上海天普分析儀器有限公司)

1.2材料蘆丁對照品(批號：101180-201401，中國藥品生物制品檢定所)；秋葵對照藥材(批號： SH298869，亳州市康美藥材交易中心)；秋葵降糖顆粒(批號：20140114、20140115、20140116、20140117、20140118、20140119、20140120、20140121、20140122、20140123)；所用試劑均為分析純。

2方法與結(jié)果

2.1總黃酮定性鑒別

2.1.1供試品溶液的制備秋葵降糖顆粒10g，加甲醇30ml，超聲處理25min，過濾，將濾液揮去；加15ml水溶解燒杯中的殘?jiān)黐4]；加正丁醇充分振搖并提取3次，每次用量30ml，合并三次的正丁醇溶液，揮干溶劑后，在殘?jiān)屑尤?.5ml甲醇，溶解后即得供試品溶液。

2.1.2對照品溶液的制備精密稱取4g秋葵對照藥材，研碎，加入30ml甲醇；攪拌后，對其進(jìn)行25min的超聲處理；過濾所得溶液并將濾液揮去[5]；在殘?jiān)屑尤?5ml水，充分?jǐn)嚢柚寥芙?，加正丁醇充分振搖并提取3次，每次正丁醇用量為30ml，合并三次的正丁醇溶液，揮干溶劑，在殘?jiān)屑尤?.5ml甲醇，溶解后即得對照品溶液。

2.1.3陰性對照溶液的制備在制劑過程中，采用的輔料是赤蘚糖醇，利用上述同樣的方法，將赤蘚糖醇配制成實(shí)驗(yàn)所需的陰性對照溶液[6]。

2.1.4蘆丁標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備稱取0.6g蘆丁對照品，按照秋葵降糖顆粒供試品處理方法，制備得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)對照溶液。

2.1.5薄層色譜將上述溶液點(diǎn)在同一薄層板上；將正丁醇，冰醋酸和水按照5∶1∶6的比例混溶，取上層溶液作為展開劑，在紫外光365nm下檢視。結(jié)果見圖1，說明了定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果與理論分析一致。

2.2樣品含量測定

2.2.1配制標(biāo)準(zhǔn)溶液105℃干燥蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品；精密稱取2.5mg蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品，加入5ml甲醇溶解并轉(zhuǎn)移至10ml量瓶中，超純水稀釋至刻度，充分振搖，即得0.25mg/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2.2.2配制供試品溶液精密稱取1.25g秋葵降糖顆粒樣品，加入25ml水，攪拌直到全部溶解；用聚酰胺柱進(jìn)行分離總黃酮；用80ml水做洗脫液，洗脫至濾液無色；然后用乙醇100ml分三次洗脫；收集洗脫液，揮干溶劑；加入適量水，攪拌溶解剩余物后，轉(zhuǎn)移至容量瓶中(100ml)；繼續(xù)加水稀釋，至容量刻度線；從所得溶液中精密移取1ml，轉(zhuǎn)移至容量瓶中(100ml)。用水稀釋定容，即得供試品溶液。

2.2.3檢測波長選定取1ml對照品溶液，甲醇為空白溶液，將二者分別放入751GD紫外可見分光光度計(jì)中，在410~710nm[7-9]范圍內(nèi)進(jìn)行波長掃描范圍，結(jié)果顯示，最大吸收波長為510nm。

2.3方法學(xué)考察項(xiàng)

2.3.1線性關(guān)系的考察精密吸取0.33、0.66、0.99、1.32、1.65和1.98ml標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.25mg/ml)，轉(zhuǎn)移至10ml的容量瓶中，加一定量超純水使之均達(dá)到2.5ml； 然后精密移取5%亞硝酸鈉溶液0.5ml加入到所得溶液里，充分振搖，靜置8min；精取12%硝酸鋁溶液0.5ml，加入，振搖均勻，同樣靜置8min；然后精取4.5ml 4.2%氫氧化鈉溶液,用水稀釋定容，搖勻；將所得溶液全部放置15min，濃度分別為8.25、16.50、24.75、33.00、41.25和49.50mg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液；各自移取標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0ml進(jìn)行吸光度檢測[10-12]；繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，Y軸是吸光度，X軸是濃度，繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程：Y= 0.0144x+0.1012,R2=0.9988。結(jié)果表明：在8~48mg/L的濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度呈線性關(guān)系。見表2、圖2。

表2　線性關(guān)系考察

2.3.2穩(wěn)定性試驗(yàn)對上述標(biāo)準(zhǔn)品溶液和供試品溶液各精密移取1ml[13-14]，按照上述線性考察方法進(jìn)行處理，依法在波長510nm處進(jìn)行可見光檢測，每25min對二者進(jìn)行檢測吸光度。

表3　穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果

由表3可知，供試品溶液和對照品溶液在150min內(nèi)的吸光度測定結(jié)果的RSD(%)分別為0.91%、0.68%。說明供試品溶液在150min內(nèi)有良好的穩(wěn)定性。

2.3.3精密度試驗(yàn)精密吸取標(biāo)準(zhǔn)溶液、樣品溶液各1ml，同樣的方法處理，在波長510nm處進(jìn)行紫外-可見分光光度檢測[15]，分別檢測6次,作好記錄，進(jìn)行精密度考察。

表4　精密度試驗(yàn)結(jié)果

由表4可知，經(jīng)過連續(xù)6次精密測定對照品溶液和供試品溶液的吸光度值，二者檢測結(jié)果的RSD(%)分別為0.14%和0.17%。說明該方法的精密度良好。

2.3.4重現(xiàn)性試驗(yàn)對同一批秋葵降糖顆粒樣品，精密稱取6份，定量為0.2500g，平行配制六份樣品溶液，與上述標(biāo)準(zhǔn)溶液配制方法相同;顯色后，在510nm處分別進(jìn)行紫外-可見分光光度檢測，記錄下各自的吸光度值;同時(shí)計(jì)算樣品中秋葵總黃酮的含量，從而進(jìn)行重現(xiàn)性考察[16]。結(jié)果重現(xiàn)性試驗(yàn)的平均含量為60.17%，RSD(%)為0.85%,說明了該方法的重現(xiàn)性良好。見表5。

表5　重現(xiàn)性試驗(yàn)結(jié)果

2.3.5加樣回收率試驗(yàn)取已知含量的供試品,精密稱取6份，定量為0.6000g;隨后分別精密加入相同的蘆丁對照品，定量為361.0mg;依法對其進(jìn)行顯色，在510nm處分別檢測其吸光度。結(jié)果加樣回收率試驗(yàn)的平均回收率是98.54%，RSD為0.53%，說明該實(shí)驗(yàn)方法的準(zhǔn)確性良好。見表6。

表6　回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.4含量測定按照上述供試品溶液配制方法，將十批秋葵降糖顆粒樣品配制成樣品溶液，每批平行兩份；在這同一批次的兩份中，各自精取1ml，并且依法顯色，測定吸光度，檢測波長是510nm。結(jié)果見表1。

表1　樣品含量測定

3討論

3.1在定性鑒別過程中，對秋葵降糖顆粒采用的是超聲提取法，對過濾所得溶液進(jìn)行揮干，用超純水溶解殘?jiān)?，再次用正丁醇提取兩次，合并提取液并揮干溶劑，加甲醇使所得殘?jiān)芙?，即得?shí)驗(yàn)所需供試品溶液。經(jīng)過系列實(shí)驗(yàn)表明：該方法不僅具有良好的定性鑒別結(jié)果，還具有很高的實(shí)驗(yàn)效率。

3.2含量測定過程中，分離純化秋葵總黃酮是比較關(guān)鍵的一步，研究采用的是聚酰胺柱層析分離法。先用水洗脫，然后用乙醇洗脫，并對收集的洗脫液進(jìn)行快速揮干。進(jìn)一步的研究表明：該分離純化方法能有效地分離出秋葵總黃酮。

3.3經(jīng)過方法學(xué)考察，在8~48mg/L的濃度范圍內(nèi)，標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度與吸光度呈線性關(guān)系。秋葵降糖顆粒中的總黃酮成分在150min內(nèi)表現(xiàn)出良好的穩(wěn)定性，并且，該實(shí)驗(yàn)方法的精密度、重現(xiàn)性和準(zhǔn)確性良好，能有效地控制秋葵降糖顆粒的質(zhì)量。

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Study on the Quality Standard for Okra Hypoglycemic Granules

HE ZhenyangHU Donghua

Changchun University Of Chinese Medicine,Changchun 130117,China

Abstract:Objective To study the quality standard for Okra hypoglycemic granules. Methods Okra hypoglycemic granules were identified by TLC and Okra total flavonoids were determined by UV-Vis spec-trophotometry. Results Okra total flavonoids were well identified through qualitative identification.The methodological study showed that content of total flavonoids of Okra hypoglycemic granule was higher. The linear relationship was in the range of 8~48mg/L,the average of the recovery was 98.57%,RSD(%) was 0.52%.Conclusion This method was available with a good reproducibility and it can control the quality of Okra hypoglycemic granules effectively.

Key words:Okra Hypoglycemic Granules;Okra Total Flavonoids;Quality Standard

(收稿日期：2015.12.25)

【中圖分類號】R284.1

【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】A

【文章編號】1007-8517(2016)04-0031-03