楊　洋　博　君， 李 舒， 王 爽， 陳 蓉

（1.重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，重慶400016；2.重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥研究室，重慶400016）

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大七氣湯單用及聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV-3細(xì)胞移植瘤Survivin與Caspase-3表達(dá)的影響

楊洋博君1， 李 舒1， 王 爽1， 陳 蓉2*

（1.重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥學(xué)院，重慶400016；2.重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥研究室，重慶400016）

摘要：目的 探討大七氣湯加減方（姜黃、三棱、莪術(shù)、半枝蓮等）單用及聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV-3細(xì)胞移植瘤Survivin 與Caspase-3表達(dá)的影響。方法 將SKOV-3細(xì)胞移植瘤造模成功的40只荷瘤鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、大七氣湯低、高劑量組、順鉑組、順鉑聯(lián)合大七氣湯組，每組8只，給藥21 d后處死所有荷瘤鼠，稱瘤重，測(cè)瘤體積，以逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)瘤組織Survivin、Caspase-3 mRNA及蛋白的表達(dá)。結(jié)果 各用藥組瘤重和瘤體積均小于模型對(duì)照組（P＜0.01）；逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)和蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示中藥組Survivin mRNA及蛋白表達(dá)明顯低于模型對(duì)照組（P＜0.01），且大七氣湯低劑量組與DDP順鉑組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且DDP聯(lián)合大七氣湯組表達(dá)最低；用藥組Caspase-3 mRNA和蛋白表達(dá)明顯高于模型對(duì)照組（P＜0.01），且大七氣湯低劑量組與順鉑組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），且順鉑聯(lián)合大七氣湯組表達(dá)最高。結(jié)論 大七氣湯加減方能夠下調(diào)Survivin和上調(diào)Caspase-3的表達(dá)來(lái)達(dá)到抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡，且大七氣湯聯(lián)合順鉑對(duì)SKOV-3細(xì)胞移植瘤治療具有增效作用。

關(guān)鍵詞：大七氣湯；順鉑；人卵巢癌細(xì)胞株SKOV-3；Survivin；Caspase-3

Effects of single Daqiqi Decoction and combined w ith DDP on Survivin and Caspase-3 expressions of SKOV-3 cell transplanted tumor

YANG Yang-bo-jun1， LIShu1， WANG Shuang1， CHEN Rong2*
（1.College of TCM，Chongqing Medical University，Chongqing 4OOO16，China；2.Institute of TCM，Chongqing Medical University，Chongqing 4OOO16，China）

ABSTRACT：AIM To exp1ore the effects of sing1emodified DaqiqiDecoction（Rhizoma curcumae 1ongae，Sparganii Rhizoma，Curcumae Rhizoma，Scutellariae barbatae Herba，etc.）and combined with DDP on Survivin and Caspase-3 expressions of human ovarian cancer ce111ine SKOV-3.METHODS A mode1 of SKOV-3 ce11 transp1anted tumor was estab1ished and fortymice with tumor were divided intomode1 contro1group，Daqiqi Decoction 1ow-，high-dose groups，DDP group and DDP combined with Daqiqi Decoction group，eightmice in each group. After successive administration for 21 d，the weights of tumor and vo1ume weremeasured，and the expressions of Survivin，Caspase-3 mRNA and protein were detected by reverse transcription po1ymerase chain reaction（PCR）and Western b1otmethod.RESULTS Each group's tumor weight and vo1ume were 1ess than those of themode1 contro1group（P＜0.01）.The detection resu1ts of reverse transcription PCR and Western b1ot showed that the expressions of Survivin mRNA and protein in treatment groupswere significant1y 1ower than those of themode1group （P＜0.01）.There was no statistica1difference as compared with the DDP group（P＜0.05），the DDP combined with the Daqiqi Decoction group was the 1owest，and the expressions of Caspase-3 mRNA and protein in the test group were significant1y higher than those in the mode1group（P＜0.01）.There was no statistica1 difference as compared with the DDP group（P＞0.05），and the DDP combined with Daqiqi Decoction group was the highest. CONCLUSION Themodified Daqiqi Decoction can achieve the inhibition of tumor ce11growth and promotion of apoptosis of tumor ce11s by reducing the expression of Survivin and raising the expression of Caspase-3.It a1so has synergistic effect in the combination with DDP on SKOV-3 ce11 transp1antation tumor.

KEY WORDS：Daqiqi Decoction；DDP（cis-dich1orodiaminep1atinum）；human ovarian cacer ce11 1ine SKOV-3；Survivin；Caspase-3

卵巢癌是女性生殖系統(tǒng)中死亡率最高的惡性腫瘤之一［1］。化學(xué)藥物治療是目前卵巢癌治療的重要手段［2］，其主要通過(guò)抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡發(fā)揮作用；而由凋亡相關(guān)基因調(diào)控的細(xì)胞凋亡是腫瘤細(xì)胞死亡的主要方式，因此通過(guò)檢測(cè)凋亡相關(guān)基因表達(dá)是判斷卵巢癌治療是否有效的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。順鉑（cis-dich1orodiaminep1atinum，DDP）作為第一代的鉑類抗腫瘤藥物，是卵巢癌一線標(biāo)準(zhǔn)化療方案用藥，其具有作用強(qiáng)、活性高、廣泛抗腫瘤的特點(diǎn)；但化療藥物所產(chǎn)生耐藥性、敏感性降低和毒副作用直接導(dǎo)致了治療中后期的無(wú)效和預(yù)后不良［3］。因此，只有研究如何增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性、減輕毒副作用，制定合理有效的綜合治療方案才能提高生存率和延長(zhǎng)生存期。

大七氣湯是《醫(yī)宗金鑒》中的抗癌經(jīng)方，我們?cè)谂R床運(yùn)用其加減方輔助順鉑治療卵巢癌患者得到了較好的反饋，具有增效減毒作用，故探討其作用機(jī)制十分迫切。本研究通過(guò)建立裸鼠SKOV-3細(xì)胞皮下移植瘤模型進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，通過(guò)測(cè)量各組荷瘤鼠瘤體積、瘤重，并檢測(cè)腫瘤組織中Survivin和Caspase-3 mRNA和蛋白量的表達(dá)，從而進(jìn)一步研究大七氣湯加減方對(duì)卵巢癌SKOV-3細(xì)胞移植瘤的影響，觀察大七氣湯加減方在人卵巢癌移植瘤裸鼠中的抗腫瘤作用和作用機(jī)制，為臨床治療該惡性腫瘤尋找更有效的藥物。

1 材料

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 BALB/c裸鼠，雌性，4～6周齡，體質(zhì)量（16±2）g，購(gòu)于重慶醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，生產(chǎn)許可證號(hào)SCXK（渝）2012-0002，飼養(yǎng)于恒濕（40％～60％）、恒溫（22～26℃）的獨(dú)立換氣凈化籠（individua11y venti1ated cages，IVC）中，裸鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料、飲用水、墊料等一切與鼠接觸物品均經(jīng)高壓滅菌處理。裸鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 實(shí)驗(yàn)藥物、試劑 大七氣湯加減方主要組成有姜黃、三棱、莪術(shù)、半枝蓮、陳皮、青皮、桔梗、半夏、藿香、木香、益智仁、肉桂、炙甘草等，購(gòu)于重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院中藥房（所有藥材均由重慶醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)藥研究室何先元教授鑒定），實(shí)驗(yàn)前制備1 g/mL湯劑，高壓滅菌后4℃冰箱備用。RPMI-1640培養(yǎng)基、胎牛血清、0.25％胰蛋白酶（EDTA）均購(gòu)自美國(guó)Hyc1one公司，二甲基亞砜（DMSO）購(gòu)自美國(guó)Sigma公司。0.9％氯化鈉注射液購(gòu)于湖南康源制藥有限公司，注射用順鉑購(gòu)于齊魯制藥有限公司。RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）試劑盒購(gòu)于日本TaKaRa公司，兔抗人Survivin、Caspase-3單克隆抗體購(gòu)自美國(guó)Santa Cruz公司。

2 方法

2.1 細(xì)胞培養(yǎng)及動(dòng)物模型建立 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞人卵巢癌漿液性乳頭狀囊腺癌SKOV-3細(xì)胞株購(gòu)于美國(guó)物種保存中心（american type cu1ture co11ection，ATCC），細(xì)胞培養(yǎng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，培養(yǎng)于含10％胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)基中并置于5％ CO2、37℃條件下的培養(yǎng)箱內(nèi)孵育。裸鼠皮下接種實(shí)驗(yàn)在IVC動(dòng)物房超凈工作臺(tái)內(nèi)進(jìn)行，收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至3×107細(xì)胞/mL，以0.2 mL/只（約含6×106個(gè)細(xì)胞）于右大腿外側(cè)皮下接種，接種后可見(jiàn)皮下出現(xiàn)一半球形突起。接種造模成功率為100％。

2.2 實(shí)驗(yàn)分組與給藥 將造模成功的40只荷瘤鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法［4］分為模型對(duì)照組、大七氣湯低劑量組、大七氣湯高劑量組、順鉑組、順鉑聯(lián)合大七氣湯組。給藥劑量根據(jù)《藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)》［5］制定，大七氣湯低劑量組中藥灌胃劑量為12 g/（kg.d），高劑量組中藥灌胃劑量為24 g/（kg.d），0.2 mL/10 g，模型對(duì)照組以等量生理鹽水灌胃，順鉑組腹腔注射3 mg/（kg.d）順鉑，順鉑聯(lián)合大七氣湯組為腹腔注射順鉑3 mg/（kg. d）聯(lián)合大七氣湯灌胃12 g/（kg.d）。大七鹽水灌胃每天1次，連續(xù)21 d；順鉑腹腔注射隔天注射1次，連續(xù)7次。

2.3 標(biāo)本采集與檢測(cè) 于停止給藥后第2天進(jìn)行標(biāo)本采集，1％戊巴比妥腹腔麻醉后取出各皮下卵巢癌移植瘤組織于液氮罐中保存待測(cè)。

2.3.1 觀察荷瘤鼠一般狀態(tài)及腫瘤情況 給藥期間，每日觀察荷瘤鼠的飲食、精神狀態(tài)及腫瘤生長(zhǎng)情況；每3日稱體質(zhì)量并用游標(biāo)卡尺分別測(cè)量瘤體的最長(zhǎng)徑（a）和最短徑（b），計(jì)算腫瘤體積（依據(jù)公式V=1/2ab2），繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，觀察腫瘤生長(zhǎng)情況；腫瘤組織取出后稱瘤重并按照公式計(jì)算抑瘤率，抑瘤率（％）=（對(duì)照組平均瘤重-給藥組平均瘤重）/對(duì)照組平均瘤重×100％。

2.3.2 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法檢測(cè)Survivin和Caspase-3 mRNA的表達(dá) 瘤組織經(jīng)勻漿、Trizo1裂解、提取瘤組織總RNA后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，進(jìn)行RT-PCR。引物均由生工生物工程（上海）有限公司合成，Survivin正向?yàn)?′-TCCGTGTCCTCGTCCTCCTAC-3′，反向?yàn)?′-CGCTGCCCAGGCTGTAGG-3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為219 bp；Caspase-3正向?yàn)?′-TTTTTCAGAGGGGATCGTTGTAG-3′，反向?yàn)?′-GCATGGCACAAAGCGACTGG-3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為244 bp；Gapdh正向：5′-AGGCCGAGAATGGGAAGCTTGTC-3′，反向：5′-GCCCCGGCATCGAAGGTGGAAG-3′，擴(kuò)增長(zhǎng)度為725 bp。RT-PCR反應(yīng)條件為94℃3 min，94℃30 s，56℃30 s，72℃30 s，30個(gè)循環(huán)，72℃延伸5 min，所得產(chǎn)物經(jīng)1.5％瓊脂糖凝膠電泳成像掃描，Quantity one軟件對(duì)圖像進(jìn)行分析，分別以Survivin/Gapdh和Caspase-3/Gapdh的灰度值比值來(lái)代表mRNA的相對(duì)表達(dá)水平。

2.3.3 蛋白質(zhì)印跡法檢測(cè)Survivin和Caspase-3蛋白量的表達(dá) 提取移植瘤組織標(biāo)本蛋白，BCA法分析測(cè)定蛋白質(zhì)水平；將蛋白進(jìn)行SDS-PAGE電泳并轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素（NC）膜上，5％脫脂奶粉封閉2 h后，分別加入稀釋的兔抗人Survivin、Caspase-3單克隆抗體，ECL發(fā)光試劑盒進(jìn)行顯色、曝光，凝膠成像系統(tǒng)對(duì)膠片進(jìn)行掃描處理分析。

3 結(jié)果

3.1 荷瘤鼠一般情況、瘤重及瘤體積 SKOV-3細(xì)胞接種8 d后，裸鼠接種處皮下出現(xiàn)質(zhì)地較硬的球狀突起。接種后觀察荷瘤鼠，模型對(duì)照組荷瘤鼠精神狀態(tài)與活動(dòng)情況欠佳，體質(zhì)量減輕速度較快，用藥組精神狀態(tài)與活動(dòng)情況均較良好，體質(zhì)量維持較好。各用藥組瘤重與模型對(duì)照組比較均有減輕（P＜0.01）；其中順鉑組瘤重較大七氣湯低劑量、高劑量組低，組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；順鉑聯(lián)合大七氣湯組瘤重最低，與其他治療組經(jīng)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)意義（P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1　各組荷瘤鼠瘤重和抑瘤率（n=8，±s）Tab.1 Each group of tumor weight and inhibitory rate （n=8，±s）

表1　各組荷瘤鼠瘤重和抑瘤率（n=8，±s）Tab.1 Each group of tumor weight and inhibitory rate （n=8，±s）

注：與模型對(duì)照組比較，*P＜0.01；與順鉑組比較，#P＜0.01；與順鉑聯(lián)合大七氣湯組比較，△P＜0.01

組別　　平均瘤/mg　　抑瘤率/％模型對(duì)照組　805.63±47.63#△-55.07大七氣湯低劑量組　636.75±43.36*#△　20.96大七氣湯高劑量組　491.13±33.52*#△　39.04順鉑組　423.88±34.68*△　47.39順鉑+大七氣湯組　362.00±32.71*#

根據(jù)腫瘤生長(zhǎng)曲線顯示，從接種之日起到第14天，腫瘤生長(zhǎng)速度相當(dāng)，之后呈現(xiàn)不同生長(zhǎng)趨勢(shì)，其中模型對(duì)照組瘤體積增長(zhǎng)速度最快，稍后依次為大七氣湯低劑量組、大七氣湯高劑量組、順鉑組、順鉑聯(lián)合大七氣湯組；治療末次各治療組瘤體積標(biāo)準(zhǔn)差分別是模型對(duì)照組45.861，大七氣湯低劑量組21.758，大七氣湯高劑量組24.798，順鉑組13.999，順鉑+大七氣湯組13.988，治療末次各治療組瘤體積與模型對(duì)照組相比較均減?。≒＜0.01），大七氣湯高劑量組、順鉑組、順鉑聯(lián)合大七氣湯組經(jīng)組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)圖1。

圖1　腫瘤生長(zhǎng)曲線圖Fig.1 Tumor grow th curves

3.2 Survivin、Caspase-3 mRNA在各組中的表達(dá)情況 RT-PCR結(jié)果顯示，與模型對(duì)照組比較，各用藥組Survivin mRNA表達(dá)降低，而Caspase-3 mRNA表達(dá)增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，P＜0.01）。順鉑聯(lián)合大七氣湯組的Survivin mRNA表達(dá)最低，Caspase-3 mRNA表達(dá)最高，與大七氣湯低劑量組及順鉑組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），見(jiàn)圖2、圖3。

M.標(biāo)準(zhǔn) 1.模型對(duì)照組 2.大七氣湯低劑量組 3.大七氣湯高劑量組 4.順鉑組 5.順鉑+大七氣湯組M.standard 1.mode1 contro1 group 2.Daqiqi Decoction group （1ow dose） 3.Daqiqi Decoction group（high dose）4.DDP group 5.DDP+Daqiqi Decoction group圖2　Survivin m RNA在各組腫瘤組織的表達(dá)Fig.2 mRNA expressions of Survivin in tumor tissues

圖3　Caspase-3 mRNA在各組腫瘤組織的表達(dá)Fig.3 mRNA expressions of Caspase-3 in tumor tissues

3.3 Survivin、Caspase-3蛋白在各組中的表達(dá)情況

Western b1ot結(jié)果顯示，模型對(duì)照組腫瘤組織中Survivin蛋白表達(dá)明顯高于各治療組（P＜0.01）；各治療組間，順鉑聯(lián)合中藥組Survivin蛋白表達(dá)量最低，與其余各組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；大七氣湯高劑量組與順鉑組Survivin蛋白表達(dá)量相比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。模型對(duì)照組腫瘤組織中Caspase-3蛋白表達(dá)量明顯低于各治療組（P＜0.01）；各治療組間，順鉑聯(lián)合大七氣湯組Caspase-3蛋白表達(dá)量最高，與其余各組相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；大七氣湯高劑量組與順鉑組Caspase-3蛋白表達(dá)量相比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)圖4、圖5。

圖4　Survivin蛋白在各組腫瘤組織的表達(dá)Fig.4 Protein expressions of Survivin in tumor tissues

圖5　Caspase-3蛋白在各組腫瘤組織的表達(dá)Fig.5 Protein expressions of Caspase-3 in tumor tissues

4 討論

凋亡抑制蛋白家族（inhibitor of apoptosis proteins，IAPs）是一類重要的抗細(xì)胞凋亡因子，其中Survivin是目前為止發(fā)現(xiàn)的最強(qiáng)凋亡抑制因子，具有抑制細(xì)胞凋亡和調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的雙重功能，并且其高表達(dá)與腫瘤預(yù)后密切相關(guān)，主要通過(guò)抑制Caspase-3、9等酶的活性而發(fā)揮阻斷凋亡的作用［6］。Cohen等對(duì)Survivin在卵巢癌中的表達(dá)及相關(guān)性進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)Survivin基因的表達(dá)與卵巢癌的發(fā)生、演變及化療耐藥相關(guān)［7］。Caspase是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的一組存在于胞質(zhì)溶膠中的凋亡執(zhí)行蛋白，其中Caspase-3在各種原因?qū)е碌募?xì)胞凋亡中起著不可替代的作用，Caspase-3活性增加是細(xì)胞凋亡的重要機(jī)制，而它的失活或表達(dá)異常與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展有關(guān)［8］。

大七氣湯加減方具有理氣活血化瘀、軟堅(jiān)散結(jié)解毒之功效。其中姜黃破血行氣，通經(jīng)止痛；近年研究發(fā)現(xiàn)，姜黃素可以抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和誘導(dǎo)其凋亡［9］；三棱、莪術(shù)具有破血消積之效，臨床上常相需而用；研究發(fā)現(xiàn)三棱具有抗血小板聚集、鎮(zhèn)痛、抗腫瘤等作用，而被認(rèn)為是莪術(shù)特征成分的莪術(shù)醇在新近研究中發(fā)現(xiàn)能抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及RNA的合成并誘導(dǎo)其凋亡［10-11］。半枝蓮的主要活性成分為黃酮類，具有清熱解毒、化瘀利尿之功效，是一種傳統(tǒng)的抗腫瘤中藥，郭麗華等發(fā)現(xiàn)半枝蓮5個(gè)黃酮類單體對(duì)SKOV-3細(xì)胞增殖均具有明顯抑制作用，并可增強(qiáng)卡鉑的細(xì)胞毒作用［12］。陳皮功效理氣健脾，燥濕化痰，錢士輝等研究發(fā)現(xiàn)其能使G2-M細(xì)胞減少，G0-G1期細(xì)胞增多，同時(shí)能促使癌細(xì)胞凋亡的作用［13］。木香能行氣止痛、調(diào)中導(dǎo)滯，近年來(lái)大量藥理學(xué)研究也證實(shí)木香中有效成分對(duì)多種癌細(xì)胞具有殺傷作用［14］。桔梗具有祛痰抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、保肝、心血管、鎮(zhèn)痛等作用［15］。半夏燥濕化痰，降逆止嘔，消痞散結(jié)，趙永娟研究發(fā)現(xiàn)其主要成分半夏多糖具有抗腫瘤作用，可抑制PC12細(xì)胞生長(zhǎng)及增殖，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［16］。因此，大七氣湯既符合中醫(yī)治療腫瘤清熱解毒，活血化瘀之原則，又跟現(xiàn)代藥理學(xué)理論研究相匹配，故療效可觀。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，大七氣湯加減方作用于卵巢癌荷瘤鼠，能減輕瘤重，各治療組與模型對(duì)照組相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；各組腫瘤體積治療末次后與模型對(duì)照組比較均減小（P＜0.01），大七氣湯高劑量組、DDP組、DDP聯(lián)合大七氣湯組經(jīng)組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.01）；瘤重和瘤體積均以DDP聯(lián)合大七氣湯組作用最強(qiáng)，提示大七氣湯輔助DDP化療可以增強(qiáng)荷瘤鼠對(duì)DDP的敏感性，提高抑瘤效果。通過(guò)檢測(cè)瘤體凋亡相關(guān)基因和蛋白的表達(dá)：DDP及大七氣湯高、低劑量組均能上調(diào)卵巢癌移植瘤Caspase-3表達(dá)及下調(diào)Survivin表達(dá)，發(fā)揮促凋亡作用，化療藥物DDP的作用優(yōu)于單純大七氣湯高、低劑量組，且DDP聯(lián)合大七氣湯組效果強(qiáng)于所有治療組，亦說(shuō)明單純大七氣湯治療可促進(jìn)卵巢癌移植瘤凋亡，而大七氣湯聯(lián)合化療仍為最佳療效組。

綜上所述，大七氣湯加減方可抑制卵巢癌移植瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，促進(jìn)移植瘤細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)卵巢癌移植瘤對(duì)DDP敏感性，其機(jī)制可能是上調(diào)Caspase-3表達(dá)，下調(diào)Survivin表達(dá)，誘導(dǎo)裸鼠體內(nèi)卵巢癌細(xì)胞凋亡。

參考文獻(xiàn)：

［1］ Kim A，Ueda Y，Naka T，et al.Therapeutic strategies in epithe1ia1ovarian cancer［J］.J Exp Clin Cancer Res，2012，31 （1）：1-8.

［2］ Chen H，Hardy T M，To11efsbo1T O.Epigenomics of ovarian cancer and its chemoprevention［J］.Front Gen，2011，2011 （2）：1-8.

［3］ Ga11uzzi L，Vita1e I，Miche1s J，etal.Systems bio1ogy of cisp1atin resistance：past，presentand future［J］.Cell Death Dis，2014，5（5）：e1257.

［4］ 趙 偉，孫國(guó)志.常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組方法［J］.畜牧獸醫(yī)科技信息，2009（4）：61-62.

［5］ 魏 偉，吳希美，李元建.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)［M］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2010：70-72.

［6］ Schimmer A D，Da1i1i S.Targeting the IAP fami1y of caspase inhibitors as an emerging therapeutic strategy［J］.Hematology Am Soc Hematol Educ Program，2005，2005（1）：215-219.

［7］ Cohen C，Lohmann C M，Cotsonis G，et al.Survivin expression in ovarian carcinoma：corre1ation with apoptotic markers and prognosis［J］.Mod Pathol，2003，16（6）：574-583.

［8］ Patrick H，Mur1iM，Natasha K.Targeting caspases in cancer therapeutics［J］.JBiol Chem，2013，394（7）：831-843.

［9］ 蔣建蘭，靳曉麗，張 歡，等.姜黃素類化合物及其抗腫瘤機(jī)理研究進(jìn)展［J］.中藥材，2012，35（2）：325-330.

［10］ 戴仕林，吳啟南，殷 婕.中藥三棱的現(xiàn)代研究進(jìn)展［J］.中國(guó)民族民間醫(yī)藥，2011，20（1）：63-64.

［11］ 鐘章鋒，陳修平，吳 鐵，等.莪術(shù)醇的研究進(jìn)展［J］.中國(guó)藥房，2010，21（31）：2959-2960.

［12］ 郭麗華，齊 聰，楊 紅，等.半枝蓮黃酮類單體對(duì)人卵巢癌SKOV3細(xì)胞增殖的影響［J］.上海中醫(yī)藥雜志，2013，47（1）：61-65.

［13］ 錢士輝，王佾先，亢壽海，等.陳皮提取物體內(nèi)抗腫瘤作用及其對(duì)癌細(xì)胞增殖周期的影響［J］.中國(guó)中藥雜志，2003，28（12）：1167-1170.

［14］ 魏 華，彭 勇，馬國(guó)需，等.木香有效成分及藥理作用研究進(jìn)展［J］.中草藥，2012，43（3）：613-620.

［15］ 李 婷，徐文珊，李西文，等.中藥桔梗的現(xiàn)代藥理研究進(jìn)展［J］.中藥藥理與臨床，2013，29（2）：205-208.

［16］ 趙永娟，王 蕾，侯 琳，等.半夏多糖抗腫瘤作用研究［J］.中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2006，22（3）：368-371.

［臨 床］

*通信作者：陳 蓉（1963—），女，教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)閶D科腫瘤與不孕癥中醫(yī)治療。Te1：13512337203，E-mai1：cr8093 @126.com

作者簡(jiǎn)介：楊洋博君（1989—），女，碩士生，研究方向?yàn)橹嗅t(yī)藥治療婦科腫瘤與不孕癥。Te1：13650534197，E-mai1：yybj1989@ 126.com

基金項(xiàng)目：重慶市衛(wèi)生局中醫(yī)重點(diǎn)課題（2013-54號(hào)）

收稿日期：2014-08-10

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.01.006

中圖分類號(hào)：R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

文章編號(hào)：1001-1528（2016）01-0029-06

網(wǎng)絡(luò)出版日期：2015-04-07

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detai1/31.1368.R.20150407.1335.001.htm1