肖潤梅， 王俊俊， 李德秀， 陳 勇*

（1.湖北省中西醫(yī)結合醫(yī)院，湖北武漢430015；2.湖北省中藥生物技術省重點實驗室，湖北武漢430062）

?

氫溴酸檳榔堿誘導大鼠肝臟氧化應激性損傷

肖潤梅1，2， 王俊俊2， 李德秀1， 陳 勇2*

（1.湖北省中西醫(yī)結合醫(yī)院，湖北武漢430015；2.湖北省中藥生物技術省重點實驗室，湖北武漢430062）

摘要：目的 通過肝微粒細胞色素P4502E1（CYP2E1）觀察氫溴酸檳榔堿（areco1ine hydrobromide）誘導大鼠肝臟氧化應激性損傷。方法 雄性Wistar大鼠連續(xù)灌胃給藥氫溴酸檳榔堿7 d，測定大鼠肝組織中抗氧化活性指標，HPLC法測定探針底物在大鼠肝微粒溫孵體系中特征代謝物的生成量評價CYP2E1的酶活性。RT-PCR技術檢測肝臟組織Cyp2e1 mRNA水平。結果 與對照組相比，大鼠灌胃7 d后，肝組織中過氧化氫酶（CAT）、還原性谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性隨口服氫溴酸檳榔堿劑量的加大都出現(xiàn)不同程度的降低，100 mg/（kg.d）氫溴酸檳榔堿時出現(xiàn)顯著性差異（P＜0.01）；4 mg/（kg.d）氫溴酸檳榔堿使大鼠肝臟CYP2E1的活性提高了1.66倍（P＜0.05）。結論 氫溴酸檳榔堿對大鼠肝臟CYP2E1的誘導作用與肝臟氧化應激性損傷有關。

關鍵詞：氫溴酸檳榔堿；大鼠；肝微粒體；細胞色素P4502E1；高效液相色譜（HPLC）；氧化應激

檳榔（areca nut，AN）是棕櫚科（Palmae）植物檳榔樹（Areca Catechu Linn.）的干燥成熟種子，是世界上第4種（煙草、酒精和咖啡因）被廣泛使用的嗜好品［1］，檳榔堿（areco1ine）是從檳榔中提取的一種主要生物堿，含有量約0.3％～0.63％［2］。氧化應激是指機體內(nèi)的活性氧自由基ROS在遭受各種有害刺激時大量產(chǎn)生，超出了組織的抗氧化能力，導致體內(nèi)組織抗氧化系統(tǒng)和氧化系統(tǒng)失衡［3］，最終導致細胞的氧化損傷［4］，是肝臟損傷的主要機制之一［5］。CYP2E1是被醫(yī)學界廣泛研究的產(chǎn)生氧自由基的重要原因之一，其升高能產(chǎn)生氧自由基而導致脂質過氧化。這一過程能導致細胞膜受損、細胞損傷，甚至可以導致癌癥。雖然已有研究表明檳榔咀嚼物和檳榔堿的使用與肝硬化和肝細胞癌發(fā)生有高度關聯(lián)性［6-7］，但它們對肝臟氧化應激損傷的機制，以及對肝臟CYP2E1酶表達與活性的影響目前尚不十分清楚。本課題擬從氫溴酸檳榔堿（AH）（化學結構見圖1）對大鼠體內(nèi)肝臟氧化應激損傷及CYP2E1酶表達與活性的影響，探討其對肝臟氧化應激損傷的作用機制。為設計預防和治療氫溴酸檳榔堿誘導的肝損傷提供理論基礎。

圖1　氫溴酸檳榔堿的化學結構Fig.1 Chem ical structure of arecoline

1 材料與方法

1.1 化學試劑 氫溴酸檳榔堿（areco1ine hydrobromide，98％，上海阿拉丁生化科技股份有些公司）、還原性谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）、過氧化氫酶（CAT）活性或含有量測定試劑盒（南京建成生物工程研究所）。其他所用試劑均為分析純。6-羥基氯唑沙宗（TRC，Canada）；Nicotinamide adenine dinuc1eotide phosphate reduced（NADPH，Roche，Switzer1and）；BCA蛋白試劑盒（Thermo Scientific，USA）；色譜純甲醇和乙腈（Merck，Germany）；Trizo1試劑（Invitrogen，USA）；異丙醇、氯仿、無水乙醇、ReverTra Ace qPCR逆轉錄試劑盒（TOYOBO，JAP）；THUNDERBIRD SYBR qPCR SuperMix （TOYOBO，JAP）；DEPC（Sigma，USA）；瓊脂糖（Invitrogen，USA）其他所用試劑均為分析純。

1.2 儀器 HPLC-20A高效液相色譜儀（日本島津公司），包括LC-20AD泵2個、SIL-20A自動進樣器、DGU-20A3R脫氣機、CTO-20A柱溫箱；LC-MS-8040三重四級桿液質聯(lián)用儀（日本島津公司），包括LC-20AD泵兩個、SIL-20A自動進樣器、DGU-20A3R脫氣機、CTO-20A柱溫箱、MS-8040質譜儀；CFX Connect熒光定量PCR儀（BIORAD，USA）；BP211D電子天平（Sartorius，Germany）；Vortex-5型漩渦震蕩器（天津儀器廠）；P型移液器（Gi1son，F(xiàn)rance）；5417 R小型臺式高速冷凍離心機（Eppendorf，Germany）、iMark酶標儀和ChemiDocTMXRS +凝膠成像儀（Bio-Rad公司，Germany）、DYY-6C型電泳儀和DYC-40A型垂直電泳槽（北京市六一儀器廠）。

1.3 動物處理 SPF級雄性健康Wistar大鼠，體質量（200±20）g，購于湖北省疾病預防控制中心實驗動物研究中心SPF動物房，動物生產(chǎn)許可證號：SCXK（鄂）2008-0005。大鼠飼養(yǎng)于實驗動物房，飼養(yǎng)環(huán)境相對濕度（60±5）％，溫度（22±2）℃，光照與黑暗12 h交替循環(huán)。將24只大鼠隨機分成4組，每組6只。第1至3組分別灌胃4、20、100 mg/（kg.d）的氫溴酸檳榔堿（溶于生理鹽水），第4組灌胃等體積生理鹽水，連續(xù)灌胃7 d，每天給藥1次。最后一次灌胃1 h后處死大鼠，將肝組織迅速取出凍存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 氧化應激指標測定 將0.9％生理鹽水加入肝組織進行勻漿，制成20％組織勻漿液，按試劑盒說明書操作，測定肝臟中CAT、GSH、GSH-Px的量或活性水平。

1.5 肝微粒體制備 將0.25 mo1/L蔗糖、1 mmo1/L乙二胺四乙酸（EDTA）和0.01 mo1/L三羥甲基氨基甲烷（Tris），雙蒸水溶解后鹽酸調pH至7.4制成Buffer A，倒入肝組織進行勻漿，制成20％組織勻漿液，4℃，12 000×g，20 min離心，加0.1 mL CaC12溶液混合，4℃7 500×g，10 min離心，洗滌所得肝微粒體碎片沉淀，PBS重懸后分裝至1.5 mL離心管，-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.6 探針底物特異性代謝產(chǎn)物的檢測方法 選取氯唑沙宗的6-羥基化作用來測定大鼠肝微粒體中CYP2E1的活性。反應體系：1.0 mg/mL大鼠肝微粒體、5 mmo1/LMgC12、0.1 mo1/L PBS、0.075 mmo1/L氯唑沙宗，總反應體積為0.4 mL。在37℃水浴條件下預溫孵3 min后，加入NADPH（1 mmo1/L）啟動溫孵反應，反應40 min后迅速向反應體系中加入冰冷的乙酸乙酯0.8 mL終止反應?；靹蚝笥?0 000×g離心10 min取0.6 mL上清液，上清液經(jīng)真空冷凍濃縮機揮干，殘余物用100 μL流動相復溶后進HPLC檢測。檢測代謝產(chǎn)物的HPLC條件為［8］：保護柱Zorbax C18guard co1umn（12.5 mm× 4.6 mm，5 μm）；反相C18色譜柱Zorbax Ec1ipse XDB-C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）；水∶乙腈（78∶22）流動相；柱溫25℃；檢測波長282 nm；進樣量60 μL；體積流量1.0 mL/min。

1.7 探針底物特異性代謝產(chǎn)物的測定方法學考察

專屬性考察：通過比較空白大鼠肝微粒體溫孵液、空白大鼠肝微粒體溫孵液加入特異性代謝產(chǎn)物的標準品后、大鼠肝微粒體代謝探針底物后的色譜圖，判斷代謝產(chǎn)物的定量是否有雜質干擾以及預實驗所摸索的條件是否合理。

線性考察：自低而高的將每種探針底物的特異性代謝產(chǎn)物的標準品加入大鼠肝微粒體溫孵液中。用PBS代替NADPH加至各溫孵體積，按照探針底物特異性代謝產(chǎn)物測定的操作條件進行其他操作。橫坐標為特異性代謝產(chǎn)物標準品的濃度，縱坐標為其峰面積（或測量值），進行線性回歸（標準曲線），并得出其回歸方程和相關性。

回收率和精密度考察：向滅活大鼠肝微粒體溫孵液中加入各探針底物的特異性代謝產(chǎn)物的標準品，使體系內(nèi)的特異性代謝產(chǎn)物終濃度為低、中、高3個質控（QC）濃度，每一濃度平行6份樣品。用PBS代替NADPH加至各溫孵體積，其他操作均按照“1.6”項下方法操作?；厥章适峭ㄟ^質控點的實際測定值與它的標準值的比值來衡量是否良好的。實驗操作精密度根據(jù)6份樣品所測結果的離散程度，用相對標準偏差（re1ative standard deviation，RSD）來反映。

1.8 肝臟總RNA的提取和逆轉錄 用DEPC處理并滅菌烘干塑料制品。解剖剪、藥匙、鑷子先用氯仿泡然后用錫紙包裹送至烘箱180℃干烤4 h，提取肝臟總RNA參照Trizo1試劑說明書。

1.8.1 逆轉反應液的配制 見表1。

1.8.2 逆轉錄反應 在37℃條件下，進行15 min的逆轉錄反應→在98°C條件下，進行5 min的酶失活反應→反應結束之后，保存于4℃或者-20℃條件下，用于熒光定量PCR分析。見表1。

表1　逆轉錄反應體系Tab.1 Reverse transcription reaction system

1.9 熒光定量PCR

1.9.1 定量PCR引物序列（購自上海Sunny公司） 見表2。

表2　引物序列Tab.2 Primer sequences

1.9.2 熒光定量PCR反應條件 94℃變性15 s，58℃退火30 s，72℃延伸30℃，38個循環(huán)。

2 結果

2.1 對大鼠肝臟中抗氧化性指標的影響 灌胃氫溴酸檳榔堿1周對大鼠肝臟GSH、CAT和GSH-Px活性的影響見表3。和對照組相比，大鼠連續(xù)灌胃氫溴酸檳榔堿（4、20、120 mg/（kg.d）1周，導致肝臟中CAT和GSH-Px活性以及GSH的量降低。其高劑量組肝臟中CAT、GSH-Px的活性降低出現(xiàn)顯著性差異（P＜0.05），低、中、高劑量組肝臟中GSH的量降低并呈現(xiàn)劑量性依賴（P＜0.01）。

表3　氫溴酸檳榔堿對大鼠肝臟GSH、CAT和GSH-Px的影響（±s，n=6）Tab.3 Effects of arecoline hydrobrom ide on hepatic GSH，CAT and GSH-Px（±s，n=6）

表3　氫溴酸檳榔堿對大鼠肝臟GSH、CAT和GSH-Px的影響（±s，n=6）Tab.3 Effects of arecoline hydrobrom ide on hepatic GSH，CAT and GSH-Px（±s，n=6）

注：與正常對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別　　劑量/（mg.kg-1.d-1）　CAT/（U.mg prot-1）　GSH-Px/（U.mg prot-1）　GSH/（μg.mg prot-1）正常對照組75.4±8.7　1848.1±91.5　10.9±1.6氫溴酸檳榔堿低劑量組　4　70.6±4.9　1804.7±27.9　8.4±1.3*氫溴酸檳榔堿中劑量組　20　66.8±9.0　1770.1±26.3　7.5±1.6**氫溴酸檳榔堿高劑量組　100　61.2±4.9*　1735.8±25.9*　7.0±1.2 0 **

2.2 方法學考察實驗結果 專屬性考察：將不加探針底物的空白大鼠肝微粒體溶液、加探針底物代謝物標準品的大鼠肝微粒體溶液和加特異性探針底物后肝微粒體樣品，根據(jù)“1.6”項中各探針底物代謝產(chǎn)物的檢測條件進行操作，得到各探針底物代謝產(chǎn)物的專屬性色譜分離圖（不加探針底物的大鼠肝微粒體溫孵液空白對照組色譜圖、各探針底物的特異性代謝產(chǎn)物標準品溶液色譜圖以及各探針底物經(jīng)肝微粒體代謝后產(chǎn)生代謝產(chǎn)物的色譜圖），見圖2。由色譜圖可知，代謝產(chǎn)物測定專屬性良好，代謝產(chǎn)物峰無明顯干擾。

1.6-羥基氯唑沙宗 2.氯唑沙宗1.6-OHCLZ 2.CLZ圖2　6-羥基氯唑沙宗（6-OHCLZ）在大鼠肝微粒體（RLM）溫孵體系中的色譜分離圖Fig.2 Represstative chromatogram s of 6-OHCLZ in RLM incubation solution

線性范圍、精密度和回收率考察：大鼠肝微粒體各代謝產(chǎn)物的標準曲線，精密度和相對回收率見表4。根據(jù)結果可知，6-羥基氯唑沙宗在5.0～320.0 μmo1/L范圍內(nèi)測定的精密度良好，方法準確度較高。

表4　大鼠體內(nèi)肝微粒代謝產(chǎn)物的精密度和回收率（±s，n=6）Tab.4 Precisions and recovery rates ofmetabolite in RLM （±s，n=6）

表4　大鼠體內(nèi)肝微粒代謝產(chǎn)物的精密度和回收率（±s，n=6）Tab.4 Precisions and recovery rates ofmetabolite in RLM （±s，n=6）

肝微粒代謝產(chǎn)物　　標準曲線　　質控濃度/ （μmo1.L-1）RSD/％回收率/ ％ 6-羥基氯唑沙宗Y=54.1X+58.9 r2=0.999 10　5.4 97.3±5.3 20　2.9 96.3±2.8 40　2.4 90.2±2.2

2.3 氫溴酸檳榔堿對大鼠體內(nèi)肝臟CYP2E1活性的影響 灌氫溴酸檳榔堿服后對大鼠肝臟CYP450酶活氫溴酸檳榔堿性的影響如圖3所示。結果表明，大鼠灌胃1周對肝臟CYP450酶活性有一定誘導作用。與對照組相比，灌服低劑量［4 mg/（kg.d）］、中劑量［20 mg/（kg.d）］氫溴酸檳榔堿使大鼠肝臟CYP2E1活性分別提高了1.66倍、1.22倍，結果有顯著差異（P＜0.05）；灌胃高劑量［100 mg/（kg. d）］組AH雖然使大鼠肝臟CYP2E1活性提高，但與對照組相比沒有明顯區(qū)別。

圖3　氫溴酸檳榔堿對大鼠肝臟CYP2E1酶活性的影響（±s，n=6）Fig.3 Effect of arecoline hydrobrom ide on CYP2E1 activity in RLM（±s，n=6）

2.4 氫溴酸檳榔堿對大鼠體內(nèi)肝臟Cyp2e1 mRNA表達的影響 灌服氫溴酸檳榔堿1周后對大鼠肝臟Cyp2e1 mRNA表達的影響如圖4所示。結果表明，與對照組相比，灌服低、中、高劑量［4、20、100 mg/（kg.d）］組AH 1周對Cyp2e1 mRNA表達增大了但沒有顯著差異（P＞0.05）。

3 討論

活性氧（reactive oxygen species，ROS）作為機體氧化還原反應各器官和系統(tǒng)所產(chǎn)生的中間代謝產(chǎn)物，包括過氧化氫（H2O2）、超氧陰離子（O2 -）和羥自由基（-OH）等。當肝細胞內(nèi)抗氧化劑水平降低導致抗氧化機制低下，或者有過量的ROS產(chǎn)生時，就容易發(fā)生細胞膜脂質過氧化、炎癥反應、細胞器功能異常、核的氧化損傷等氧化應激損傷。本實驗發(fā)現(xiàn)，隨著氫溴酸檳榔堿灌胃劑量的加大，大鼠肝臟CAT、GSH-Px活性逐漸降低，且在高劑量時顯著低于正常對照組（P＜0.05）。GSH的量隨氫溴酸檳榔堿灌胃劑量的加大逐漸降低并呈劑量依賴性（P＜0.01）。CAT是一種以鐵卟啉為輔基的結合酶，可清除體內(nèi)自由基，分解H2O2為水和分子氧［9］。GSH可清除體內(nèi)O2 -、LOOH、H2O2，是分解氫過氧化物GSH-Px和GST兩種酶所必需的底物［10］。GSH-Px能催化GSH變?yōu)檠趸虶SH，同時促進H2O2的分解，從而減少自由基對細胞膜結構與功能的破壞，在消除自由基的同時這些抗氧化酶的活性降低。結果表明大鼠口服氫溴酸檳榔堿后，肝臟中自由基增多，組織細胞受到自由基攻擊的程度升高，從而使大鼠肝臟受到損傷。實驗同時發(fā)現(xiàn)，給大鼠灌胃氫溴酸檳榔堿1周后，大鼠肝臟CYP2E1活性顯著升高，尤其是低劑量組每日（4 mg/d）對肝臟CYP2E1的誘導作用明顯，與對照組相比酶活提高了1.66倍，但是隨著氫溴酸檳榔堿灌胃劑量的的增加，肝臟CYP2E1酶活出現(xiàn)下降趨勢。這可能由于，低劑量氫溴酸檳榔堿導致大鼠肝臟氧化性損傷CYP2E1酶活被誘導，隨著氫溴酸檳榔堿劑量的增加，脂質過氧化進一步加重，炎癥反應性損傷誘生的iNOS催化L-精氨酸產(chǎn)生大量NO，可能對CYP2E1酶蛋白有直接的抑制作用，導致CYP2E1代謝活力的下調［11］。CYP2E1是細胞色素P450的主要成員，參與膽固醇、類固醇等脂類物質氧化［12］，它在肝臟中的高表達是導致肝細胞中大量ROS產(chǎn)生與脂質過氧化損傷的主要原因［13］，氫溴酸檳榔堿對大鼠肝臟CYP2E1的誘導作用可能是誘導肝臟氧化應激損傷的重要機制［14-15］。但我們在進一步研究該物質對Cyp2e1 mRNA的基因表達時發(fā)現(xiàn)，與對照組相比，灌服氫溴酸檳榔堿1周后對大鼠肝臟Cyp2e1 mRNA表達沒有顯著影響，提示氫溴酸檳榔堿對大鼠肝臟Cyp2e1 mRNA的上調作用并沒有發(fā)生在轉錄水平，其調控途徑有待進一步研究。

圖4　氫溴酸檳榔堿對大鼠肝臟Cyp2e1 m RNA表達的影響（±s，n=6）Fig.4 Effects of arecoline hydrobrom ide on m RNA expression of Cyp2e1 in RLM（±s，n=6）

參考文獻：

［1］ Gupta P C，Warnaku1asuriya S.G1oba1 epidemio1ogy of areca nut usage［J］.Addict Biol，2002，7（1）：77-83.

［2］ Mujumdar A M，Kapadi A H，Pendse G S.Chemistry and pharmaco1ogy of bete1-nut（Areca catechu Linn.India）［J］.J Plant Crops，1979（7）：69-92.

［3］ Burgoyne JR，Mongue-Din H，Eaton P，etal.Redox signa1ing in cardiac physio1ogy and patho1ogy［J］.Circ Res，2012，111 （8）：1091-1106.

［4］ Serviddio G，Sastre J，Be11antiF，etal.Mitochondria1invo1vement in nona1coho1ic steatohepatitis［J］.Mol Aspects Med，2008，29（1）：22-35.

［5］ 曾民德.脂肪肝發(fā)病機制“二次打擊”的假設［J］.肝臟，2001，6（3）：145.

［6］ Tsai JF，Chuang L Y，Jeng JE，et al.Bete1quid chewing as a risk factor for hepatoce11u1ar carcinoma：a case-contro1 study ［J］.Br JCancer，2001，84（5）：709-713.

［7］ 古桂花，曾 薇，胡 虹.檳榔粗提物及檳榔堿對小鼠肝細胞凋亡的影響［J］.中藥藥理與臨床，2013，29（2）：56-58.

［8］ Hu Y，Inge1man-Sundberg M，Lindros K O.Induction mechanisms of cytochrome P4502E1 in 1iver：interp1ay between ethano1 treatment and starvation［J］.Biochem Pharmacol，1995，50（2）：155-161.

［9］ Luna C M，Pastori G M，Drisco11S，et al.Drought contro1s on H2O2accumu1ation，cata1ase（CAT）activity and CAT gene expression in wheat［J］.Exp Bot，2005，56（411）：417-423.

［10］ Ercan G，Sadu11ah G，Hayrettin O，et al.Resveratro1 attenuates oxidative stress and histo1ogica1a1terations induced by 1iver ischemia/reperfusion in rats［J］.World JGastroenterol，2008，14（46）：7101-7106.

［11］ 武潤生，薛永志，康曉琳.免疫性肝損傷和酒精性肝損傷中CYP2E1代謝活力的差異性變化［J］.中國醫(yī)院藥學雜志，2010，16（3）：1347-1350.

［12］ Schattenberg J M，Wang Y，Singh R，et al.Hepatocyte CYP2E1 overexpression and steatohepatitis 1ead to impaired hepatic insu1in signa1ing［J］.J Biol Chem，2005，280（11）：9887-9894.

［13］ Simon H U，Haj-Yehia A，Levi-Schaffer F.Ro1e of reactive oxygen species（ROS）in apoptosis induction［J］.Apoptosis，2000，5（5）：415-418.

［14］ Zong H，Armoni M，Hare1 C，et al.Cytochrome P-450 CYP2E1 knock outmice are protected against high-fat diet-induced obesity and insu1in resistance［J］.Am JPhysiol Endocri-nol Metab，2012，302（5）：E532-E539.

［15］ LoW S，Lim Y P，Chen C C，et al.A dua1 function of the furanocoumarin cha1epensin in inhibiting Cyp2a and inducing Cyp2b in mice：the protein stabi1ization and receptor-mediated activation［J］.Arch Toxicol，2012，86（12）：1927-1938.

Role of arecoline hydrobrom ide on oxidative stress in ratsw ith hepatic injury by CYP2E1

XIAO Run-mei1，2， WANG Jun-jun2， LIDe-xiu1， CHEN Yong2*
（1.Hubei Provincial Hospital of Integrated Chinese&Western Medicine，Wuhan 43OO15，China；2.Hubei Provincial Key Laboratory of Biotechnology of Traditional ChineseMedicine，Wuhan 43OO62，China）

ABSTRACT：AIM To investigate the effect of areco1ine hydrobromide on hepatic oxidative stress and 1iver injury of rats via the cytochrome P4502E1（CYP2E1）.METHODS Ma1eWistar ratswere ora1administration with areco-1ine hydrobromide for seven consecutive days.The part of 1iver was emp1oyed to measure the 1eve1s and activities of superoxide cata1ase（CAT），g1utathione peroxidase（GSH-Px）and g1utathione（GSH）by enzymatic reaction method using the commercia11y avai1ab1e kits.The hepatic CYP2E1 activitiesweremeasured by HPLC and cocktai1probe substrates.Expression of Cyp2e1 in 1iver was detected by reverse transcription-po1ymerase chain reaction（RT-PCR）assay.RESULTS Compared with themode1group，areco1ine hydrobromide at 100 mg/（kg.d）significant1y decreased the 1eve1s of CAT，GSH-Px and GSH（P＜0.5）in rat 1iver.Ora1administration with areco1ine hydrobromide at4 mg/（kg.d）resu1ted in 1.66 -fo1d increase in the activities of CYP2E1.CONCLUSION The effect of areco1ine hydrobromide on CYP2E1 is an importantmechanism for the hepatic oxidative stress and 1iver injury of rats.

KEY WORDS：areco1ine hydrobromide；rats；1ivermicrosome；cytrochrome P4502E1；high performance 1iquid chromatography（HPLC）；oxidative stress

*通信作者：陳 勇（1966—），男，博士，教授，博士生導師，研究方向為微生物與生化藥學。E-mai1：cy101610@163.com

作者簡介：肖潤梅（1973—），女，副主任藥師，從事藥理學和藥效學研究。E-mai1：runmeixiao2013@163.com

收稿日期：2015-04-24

doi：10.3969/j.issn.1001-1528.2016.01.004

中圖分類號：R966

文獻標志碼：A

文章編號：1001-1528（2016）01-0019-06