袁健東　陳鑫　高建清　朱譽(yù)　陳雷

【摘 要】 目的：通過對浙江省中國人群AS疾病的流行病學(xué)進(jìn)行調(diào)查，探討ERAP1基因多態(tài)性與HLA-B27陽性AS患者的關(guān)聯(lián)性。方法：選取風(fēng)濕科門診確診的128例AS患者和無自身免疫性及系統(tǒng)性疾病的非AS病史健康對照者154例，通過收集臨床資料和視覺模擬評分對浙江省強(qiáng)直性脊柱炎患者進(jìn)行調(diào)查，分析ERAP1基因單核苷酸多態(tài)性與HLA-B27的相互作用。結(jié)果：AS患者群體中HLA-B27檢出率為91.4%，對照健康組為2.58%。ERAP1基因SNP位點(diǎn)：rs27037、rs27434、rs27980在浙江省強(qiáng)直性脊柱炎患者群體中具有強(qiáng)相關(guān)性（P< 0.05）。結(jié)論：ERAP1基因單核苷酸多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的易感性具有強(qiáng)相關(guān)性，多個(gè)不同種族群體研究表明群體間的ERAP1基因多態(tài)性位點(diǎn)存在差異。

【關(guān)鍵詞】 強(qiáng)直性脊柱炎；單核苷酸多態(tài)性；ERAP1基因

【中圖分類號】R593.23 【文獻(xiàn)標(biāo)志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）04-0085-02

強(qiáng)直性脊柱炎（Ankylosing spondylitis，AS）是一種慢性自身免疫性疾病，以骶髂關(guān)節(jié)炎和附著點(diǎn)炎為特征。經(jīng)統(tǒng)計(jì)，AS在國外歐洲人群中的患病率為0.5%[1]，而在我國的患病率為0.2%～0.4%[2]。AS遺傳多態(tài)性的研究表明，超過90%的AS患者呈現(xiàn)HLA-B27陽性，而健康人群僅存在5%。Burton等[3]首次報(bào)道了歐洲高加索白種人AS患者中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氨基肽酶1基因（endoplasmic reticulum aminopeptidase 1，ERAP1）與AS具有相關(guān)性，其發(fā)現(xiàn)ERAP1的兩個(gè)單核苷酸多態(tài)性（SingleNucleotidePolymorphism，SNP）位點(diǎn)（rs27044，rs30187）與AS發(fā)病相關(guān)。因此，ERAP1和HLA-B27的相互作用在AS患者發(fā)病機(jī)制中具有著重要作用，在中國人群中進(jìn)行大規(guī)模的AS遺傳免疫學(xué)研究也就具有其重要性和必要性。

1 資料與方法

1.1 研究對象 根據(jù)知情同意原則，經(jīng)溫州醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)學(xué)院倫理委員會(huì)同意（NO：2012-092）。本研究組收集風(fēng)濕科門診確診的AS患者128例，另收集的154例對照來自門診就診的無自身免疫性和系統(tǒng)性疾病的非AS病史健康人。所有研究對象間無血緣關(guān)系且均為漢族，簽署知情同意書，并自愿捐獻(xiàn)血液樣品。

1.2 臨床表型評估 所有AS患者需全程參與體檢和臨床評估，并進(jìn)行問卷調(diào)查。記錄患者的一般資料（姓名、年齡、性別和病程等）、發(fā)病年齡、家族史及臨床表型特征等與AS疾病活動(dòng)度相關(guān)的臨床表型評估資料。疼痛評價(jià)采用基于自我報(bào)告的視覺模擬評分（Visual Analogue Scale，VAS）法評價(jià)[4]，包括患者晝、夜疼痛的VAS，病情活動(dòng)性指數(shù)[5]（Bath Ankylosing Spondylitis Disease Activity Index，BASDAI），功能性指數(shù)[6]（BathAnkylosingSpondylitisFunctional Index，BASFI）。

1.3 基因組DNA提取 AS患者與健康對照組于無菌條件下用乙二胺四乙酸（EDTA）-K2 抗凝管采集外周靜脈血4ml。血液樣品基因組DNA的提取使用AxyPrep Blood Genomic DNA Miniprep Kit （Axygen， UnionCity， CA），DNA濃度檢測使用QuantiTPicoGreen dsDNA assay （Invitrogen，Carlsbad， CA），置于-20℃冰箱保存。

1.4 基因分型 通過文獻(xiàn)篩選出報(bào)道較多的公認(rèn)的8個(gè)ERAP1基因SNP位點(diǎn)，包括rs27038（A/G）， rs27037（G/T），rs27434（A/G），rs27980（A/C），rs7711564（C/G），rs30187（C/T），rs10050860（C/T）和rs17482078（C/T），用于ERAP1基因多態(tài)性位點(diǎn)的基因型檢測。采用美國Sequenom公司的MassARRAY iPLEX系統(tǒng)進(jìn)行SNP分型檢測。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 病例對照關(guān)聯(lián)分析應(yīng)用PLINK軟件。PLINK進(jìn)行病例對照群體SNP多態(tài)性之間的病例對照關(guān)聯(lián)分析，P< 0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 AS患者的一般特征和臨床特點(diǎn) 兩組的年齡和性別分布無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?；颊邥?、夜疼痛的視覺模擬評分（VAS）分別為（38.10±23.58）和（32.21±21.84）；病情活動(dòng)性指數(shù)（BASDAI）評分為（3.91±2.84）；功能性指數(shù)評分為（3.14±2.27）。見表1。AS患者群體中HLA-B27檢出率為91.4%，對照健康組為2.58%，AS患者HLA-B27抗原陽性率遠(yuǎn)超健康人群。說明HLA-B27與AS之間在存關(guān)聯(lián)。

2.2 ERAP1基因多態(tài)性位點(diǎn)的AS病例對照關(guān)聯(lián)分析 3個(gè)SNP：rs27037、rs27434和rs27980，表現(xiàn)出強(qiáng)相關(guān)性（P<0.05）。P值最小的SNP位點(diǎn)為rs27434（P=0.000612），OR值為1.13，95% 置信區(qū)間CI為1.031.46。見表2。通過文獻(xiàn)篩選處的8個(gè)高頻ERAP1基因SNP位點(diǎn)在中國浙江人群中的分布具有特殊性，其中僅有3個(gè)SNP位點(diǎn)具有AS疾病關(guān)聯(lián)性。

3 討論

ERAP1是肽結(jié)合HLA-Ⅰ類分子（如HLA-B27）過程中相關(guān)的重要成分，能夠?qū)κ杷聂然┒说?-16個(gè)殘基的底物進(jìn)行水解，ERAP1作為抗原提呈過程中的重要蛋白酶在處理外來抗原時(shí)與HLA-B27分子聯(lián)動(dòng)作用，參與AS的發(fā)病。

本實(shí)驗(yàn)分析結(jié)果顯示，患者晝、夜疼痛的視覺模擬評分（VAS）分別為（38.10±23.58）和（32.21±21.84），AS患者疼痛程度高；病情活動(dòng)性指數(shù)（BASDAI）評分為（3.91±2.84），AS患者處于中等疼痛；同時(shí)，功能性指數(shù)評分為（3.14±2.27），AS患者的活動(dòng)能力消弱至中等水平。AS患者群體中HLA-B27檢出率為91.4%，對照健康組為2.58%，AS患者HLA-B27抗原陽性率遠(yuǎn)超健康人群。說明HLA-B27影響AS發(fā)病機(jī)制。ERAP1基因多態(tài)性位點(diǎn)的AS病例對照關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，通過文獻(xiàn)篩選出的8個(gè)高頻ERAP1基因SNP位點(diǎn)在中國浙江人群中的分布具有特殊性，其中僅有3個(gè)SNP位點(diǎn)（rs27037、rs27434、rs27980）具有AS疾病關(guān)聯(lián)性。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)證實(shí)了ERAP1基因多態(tài)性與HLA-B27的相互作用影響AS發(fā)病機(jī)制，為ERAP1基因多態(tài)性進(jìn)一步的深度挖掘和AS的診斷治療提供了可靠依據(jù)和重要參考。

參考文獻(xiàn)

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（收稿日期：2015.12.10）