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豬流行性腹瀉病毒分子生物學(xué)檢測(cè)方法研究進(jìn)展

2016-03-27 12:15:32李天芝于新友梅建國(guó)李峰沈志強(qiáng)
養(yǎng)豬 2016年5期
關(guān)鍵詞:流行性毒株定量

李天芝,于新友,梅建國(guó),李峰,沈志強(qiáng)

(1.山東綠都生物科技有限公司,山東濱州256600;2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院,山東濱州256600)

豬流行性腹瀉病毒分子生物學(xué)檢測(cè)方法研究進(jìn)展

李天芝1,于新友1,梅建國(guó)2,李峰2,沈志強(qiáng)2

(1.山東綠都生物科技有限公司,山東濱州256600;2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院,山東濱州256600)

文章綜述了豬流行性腹瀉病毒分子生物學(xué)檢測(cè)方法,主要包括核酸探針、常規(guī)PCR方法、套式PCR方法、多重PCR方法、熒光定量PCR方法、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增等6種方法,對(duì)豬流行性腹瀉防控有一定的參考價(jià)值。

豬流行性腹瀉病毒;分子生物學(xué);檢測(cè)方法

豬流行性腹瀉病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)可感染豬導(dǎo)致豬流行性腹瀉,該病的主要特征是豬嘔吐、脫水和水樣腹瀉,是一種高度接觸性腸道傳染病,多發(fā)生于冬、春季節(jié),但夏季也可發(fā)病。該病最初發(fā)生在英國(guó),隨后世界各地均有相關(guān)報(bào)道,我國(guó)于1976年最初報(bào)道該病。各日齡的豬均可感染PEDV發(fā)病,其中哺乳仔豬受到的危害最嚴(yán)重,給養(yǎng)豬業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。分子生物學(xué)檢測(cè)方法以檢測(cè)速度快、靈敏度高、特異性好等特點(diǎn)已經(jīng)廣泛應(yīng)用于細(xì)菌和病毒病的檢測(cè),并展示良好的應(yīng)用前景。筆者就目前國(guó)內(nèi)外PEDV檢測(cè)的分子生物學(xué)方法的最新研究進(jìn)展進(jìn)行綜述,為豬流行性腹瀉的診斷和防控提供參考。

1 核酸探針

核酸探針又稱(chēng)核酸雜交,利用核苷酸堿基順序互補(bǔ)的原理,用特異的基因探針即識(shí)別特異堿基序列(靶序列)的有標(biāo)記的一段單鏈DNA(或RNA)分子,與被測(cè)定的靶序列互補(bǔ),以檢測(cè)被測(cè)靶序列的技術(shù)。Kim等[1]將標(biāo)記地高辛的核酸探針(0.1 ng/μL)加入300 μL的標(biāo)準(zhǔn)雜交緩沖液中,95℃加熱10 min后,在冰上淬火,標(biāo)記地高辛的核酸探針可以與人工感染仔豬的PEDV的核衣殼蛋白基因進(jìn)行堿基互補(bǔ)配對(duì),通過(guò)透射電鏡下觀(guān)察到仔豬的空腸和結(jié)腸的上皮細(xì)胞的胞質(zhì)呈黑色,從而可以證明是PEDV感染的仔豬腹瀉,該試驗(yàn)在79個(gè)陽(yáng)性樣本中檢測(cè)出71個(gè)是陽(yáng)性的,檢出率為89.87%。

2 常規(guī)PCR方法

PCR方法是根據(jù)目的片段設(shè)計(jì)引物,借助儀器和DNA聚合酶體外大量擴(kuò)增部分或全部目的片段,是一種快速、簡(jiǎn)便、特異的診斷方法。陳宏智等[2]建立了檢測(cè)PEDV的RT-PCR檢測(cè)方法,結(jié)果顯示,該法對(duì)豬瘟病毒(CSFV)、大腸桿菌、偽狂犬病病毒(PRV)、豬圓環(huán)病毒2型(PCV2)、豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)均為陰性,具有特異性。該法最低可檢測(cè)到2.3×10-3μg/μL的PEDV RNA,將建立的方法與商品試劑盒相比較,分別對(duì)126份臨床疑似PEDV感染的病料進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示,二者的符合率為100%。于新友等[3]建立了檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒一步法RT-PCR方法,并對(duì)其特異性、敏感性進(jìn)行了研究。結(jié)果顯示,該法對(duì)豬流行性腹瀉病毒(PEDV)擴(kuò)增結(jié)果為陽(yáng)性,對(duì)照毒株擴(kuò)增結(jié)果均為陰性,對(duì)豬流行性腹瀉病毒檢測(cè)的靈敏性為100 pg總RNA量。李長(zhǎng)龍等[4]在PEDV ORF3基因缺失區(qū)域兩端設(shè)計(jì)合成引物,建立了可對(duì)PEDV野毒株和疫苗株進(jìn)行鑒別診斷RT-PCR方法,野毒株擴(kuò)增產(chǎn)物為319 bp,疫苗株擴(kuò)增產(chǎn)物為270 bp,用該鑒別診斷方法對(duì)豬傳染性胃腸炎病毒、豬輪狀病毒、豬瘟病毒、豬偽狂犬病病毒和豬繁殖與呼吸綜合征病毒的cDNA進(jìn)行擴(kuò)增均無(wú)特異性條帶,說(shuō)明該方法特異性強(qiáng)。秦毅斌等[5]建立了檢測(cè)PEDV變異毒株的RTPCR方法結(jié)果顯示,建立的RT-PCR鑒別檢測(cè)方法能特異性區(qū)分疫苗株CV777和PEDV變異毒株,僅能擴(kuò)增出PEDV變異毒株826 bp的目的片段,與豬傳染性胃腸炎病毒、A群豬輪狀病毒、豬嵴病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、偽狂犬病病毒、豬瘟病毒及豬細(xì)小病毒均無(wú)交叉反應(yīng)。敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示,該方法能檢測(cè)到的最低核酸質(zhì)量為11.3 pg。

3 套式PCR方法

套式PCR方法是設(shè)計(jì)內(nèi)、外2對(duì)引物,通過(guò)2次擴(kuò)增對(duì)樣品檢測(cè),該法能節(jié)省時(shí)間和試劑用量,且敏感性較高。王金良等[6]根據(jù)已發(fā)表的PEDV N基因核苷酸序列,設(shè)計(jì)合成2對(duì)引物,建立了檢測(cè)PEDV的套式RT-PCR方法,其中外引物擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為297 bp,內(nèi)引物擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為212 bp。鄧祖麗穎等[7]根據(jù)GenBank中PEDV基因組序列,設(shè)計(jì)并合成針對(duì)M基因的內(nèi)、外2對(duì)特異性引物,通過(guò)優(yōu)化反應(yīng)條件,建立了檢測(cè)PEDV的巢式RT-PCR方法。結(jié)果顯示,該法對(duì)豬傳染性胃腸炎病毒、豬輪狀病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒及豬瘟病毒的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。當(dāng)使用外引物或內(nèi)引物進(jìn)行常規(guī)RT-PCR時(shí)檢測(cè)限量均為50 pg PEDV RNA模板,而使用巢式RT-PCR可檢測(cè)到50 fg PEDV RNA。劉琪等[8]根據(jù)GenBank中豬流行性腹瀉病毒(PEDV)的基因序列分別設(shè)計(jì)兩對(duì)引物,在完成最佳條件篩選、特異性、敏感性試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,建立一種快速區(qū)分PEDV疫苗毒株與野毒株的巢式PCR檢測(cè)方法。建立的PCR快速檢測(cè)方法能分別對(duì)PEDV疫苗毒株和野毒株擴(kuò)增出特異性片段,片段大小分別為774 bp和150 bp。該方法對(duì)TGEV、輪狀病毒(RV)、CSFV、PRV則不能擴(kuò)增出特異性片段。

4 多重PCR方法

多重PCR是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上發(fā)展起來(lái)的,在同一PCR體系中,加入多對(duì)引物,同時(shí)檢測(cè)2種或多種病原核酸,它具有快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)廣泛用于各種臨床疾病的快速診斷。吳洋等[9]建立了可同時(shí)檢測(cè)PEDV、TGEV、RV的多重RTPCR方法,結(jié)果顯示,該方法可以同時(shí)擴(kuò)增PEDV(682 bp)、TGEV(480 bp)和RV(297 bp)的特異性DNA片段,而對(duì)豬瘟病毒和豬偽狂犬病病毒的PCR擴(kuò)增結(jié)果均為陰性,敏感性試驗(yàn)結(jié)果表明,該多重RT-PCR方法對(duì)PEDV、TGEV和RV的最低檢出量分別為3.3×103拷貝/μL、3.2×103拷貝/μL、2.8×103拷貝/μL。賈銳等[10]根據(jù)GenBank中已登錄的TGEV、PEDV的序列,利用Primer 5.0計(jì)合成了2對(duì)特異性引物。用這2對(duì)引物對(duì)TGEV、PEDV cDNA模板首先進(jìn)行單項(xiàng)PCR條件優(yōu)化,然后采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化多重RT-PCR反應(yīng)條件,結(jié)果同時(shí)擴(kuò)增到2條與試驗(yàn)設(shè)計(jì)相符的492 bp(PEDV)和211 bp(TGEV)特異性條帶,建立了能夠同時(shí)檢測(cè)2種病毒混合感染的特異、靈敏的多重PCR檢測(cè)方法,可檢測(cè)出約11 pg的PEDV和13 pg的TGEV。譚飛等[11]根據(jù)Gen-Bank中發(fā)表的CSFV和PEDV的基因組序列,設(shè)計(jì)篩選出兩對(duì)用于雙重RT-PCR反應(yīng)的特異性引物,通過(guò)對(duì)特異性、靈敏性和穩(wěn)定性等試驗(yàn),建立了檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒和豬瘟病毒的雙重RT-PCR核酸檢測(cè)技術(shù)。利用建立的CSFV-PEDV雙重RTPCR核酸檢測(cè)技術(shù),對(duì)某規(guī)?;i場(chǎng)病料進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果表明,擴(kuò)增出約311 bp和501 bp大小的特異性條帶,為豬瘟與豬流行性腹瀉病毒混合感染。于新友等[12]根椐GenBank中登錄的PEDV、TGEV和豬A群輪狀病毒(PARV)基因序列,分別設(shè)計(jì)3對(duì)引物,在建立各病毒單項(xiàng)一步法RT-PCR技術(shù)的基礎(chǔ)上,優(yōu)化多重RT-PCR反應(yīng)條件,建立了3種病毒的一步法多重RT-PCR檢測(cè)方法,用這3對(duì)引物對(duì)同一樣品中的PEDV、TGEV和PARV核酸模板進(jìn)行多重RT-PCR擴(kuò)增,結(jié)果可同時(shí)擴(kuò)增PEDV的450 bp、TGEV的609 bp、PARV的241 bp特異性片段,而對(duì)其它4種病原的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。敏感性測(cè)定結(jié)果表明,該多重RT-PCR技術(shù)能檢出10pg的PEDV、10pg的TGEV和1 pg的PARV模板。任玉鵬等[13]根據(jù)GenBank中PEDV和TGEV基因序列保守區(qū)設(shè)計(jì)2對(duì)引物,參照文獻(xiàn)合成1對(duì)豬Delta冠狀病毒(PDCoV)引物,優(yōu)化3對(duì)引物在同一RT-PCR擴(kuò)增體系下的濃度、退火溫度等反應(yīng)條件,同時(shí)優(yōu)化方法的靈敏度、特異性。結(jié)果表明,建立的多重RT-PCR在引物量分別為PEDV 0.2 L,PDCoV 0.2 L和TGEV 0.4 L,退火溫度為53℃時(shí)的擴(kuò)增效果最佳,最低檢測(cè)量分別為PEDV:60.96 pg、PDCoV:58.85 pg、TGEV:102.69 pg,用該法對(duì)多種豬傳染病病原DNA或cDNA進(jìn)行擴(kuò)增時(shí)均無(wú)非特異性擴(kuò)增條帶出現(xiàn)。朱海俠等[14]根據(jù)GenBank中PED疫苗株與野毒株ORF3的特點(diǎn)設(shè)計(jì)特異性引物,建立能夠快速區(qū)分PEDV疫苗株與野毒株的RT-PCR檢測(cè)方法。建立的RT-PCR檢測(cè)方法能夠?qū)EDV疫苗株與野毒株擴(kuò)增出特異性片段,其大小分別為278 bp和327 bp。該方法具有快速、特異、通用等特點(diǎn),可用于實(shí)驗(yàn)室快速診斷、野毒株的區(qū)分,為該病的診斷及免疫防控提供參考依據(jù)。

5 熒光定量PCR方法

熒光定量PCR技術(shù)是指采用熒光探針或SYBR GreenⅠ熒光染料通過(guò)連續(xù)監(jiān)測(cè)熒光信號(hào)強(qiáng)弱的變化來(lái)測(cè)定特異性產(chǎn)物的量,不需要分離PCR產(chǎn)物,即能準(zhǔn)確定量起始模板數(shù)。且與常規(guī)PCR相比,它具有特異性更強(qiáng)、有效解決PCR污染問(wèn)題、自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)。沈?qū)W懷等[15]建立了PEDV的SYBR GreenⅠ熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法,該法在1.21× 103~1.21×108拷貝/μL范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線(xiàn)性,相關(guān)系數(shù)R2為0.999,擴(kuò)增效率為99%,擴(kuò)增產(chǎn)物的熔解曲線(xiàn)為單個(gè)特異峰,產(chǎn)物Tm值為85.5~86℃,最低檢測(cè)限為1.21×101拷貝/μL。張志等[16]根據(jù)豬流行性腹瀉病毒N基因序列設(shè)計(jì)合成引物和探針,通過(guò)對(duì)熒光定量RT-PCR反應(yīng)條件的優(yōu)化,建立了TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)PEDV的方法。結(jié)果顯示,該方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的相關(guān)系數(shù)為0.99,檢測(cè)敏感性達(dá)到26.1拷貝/μL,且具有很好的特異性和重復(fù)性,對(duì)豬瘟病毒、豬傳染性胃腸炎病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒等檢測(cè)結(jié)果均為陰性,批內(nèi)和批間變異系數(shù)均小于2.5%。董世娟等[17]建立檢測(cè)PEDV的TaqMan熒光定量PCR方法,并驗(yàn)證其敏感性、特異性及重復(fù)性。結(jié)果表明:建立的定量標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Ct值和模板起始拷貝數(shù)對(duì)數(shù)在108~11拷貝/μL有良好的線(xiàn)性關(guān)系,相關(guān)系數(shù)R2為0.997,該方法可檢測(cè)到初始模板中6.368拷貝/pL的質(zhì)粒DNA,應(yīng)用該方法檢測(cè)49份臨床樣品,陽(yáng)性率達(dá)98%,比普通RT-PCR方法檢測(cè)的陽(yáng)性率高18%。于長(zhǎng)青等[18]用RT-PCR方法擴(kuò)增PEDV的M基因片段,并克隆到PUC-T載體中,構(gòu)建含有PEDV M基因片段的重組質(zhì)粒。以系列稀釋后的重組質(zhì)粒為模板,基于SYBR GreenⅠ進(jìn)行PEDV檢測(cè)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR擴(kuò)增。結(jié)果顯示,擴(kuò)增效率為100.4%,相鄰擴(kuò)增曲線(xiàn)之間間距均勻,所有產(chǎn)物的熔解曲線(xiàn)具有單一整齊的峰,標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)具有優(yōu)良的線(xiàn)性關(guān)系,最低可準(zhǔn)確檢測(cè)520拷貝/μL的核酸模板,重復(fù)性試驗(yàn)的變異系數(shù)小于3%。用所建立方法對(duì)3種常見(jiàn)豬源RNA病毒的檢測(cè)結(jié)果均為陰性,對(duì)臨床樣品的檢出率顯著(P< 0.05)高于常規(guī)PCR方法。曹貝貝等[19]根據(jù)GenBank中登錄的PEDV ZKHFQ株的N基因序列的保守區(qū)設(shè)計(jì)1對(duì)特異性引物,經(jīng)過(guò)對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行優(yōu)化,建立了檢測(cè)PEDV的SYBR GreenⅠ熒光定量RTPCR方法。該方法對(duì)常見(jiàn)的病毒均未檢測(cè)到熒光信號(hào),而僅對(duì)PEDV檢測(cè)為陽(yáng)性,其靈敏度為57拷貝/μL,組內(nèi)和組間變異系數(shù)均小于1%。利用該方法對(duì)26份疑似PEDV感染的病料樣品進(jìn)行檢測(cè),結(jié)果顯示本研究所建立的方法對(duì)PED的檢出率比常規(guī)PCR高23.07%。勞秀杰等[20]根據(jù)GenBank報(bào)道的N基因高度保守核苷酸序列,設(shè)計(jì)并合成1對(duì)引物。上下游引物與GenBank中登錄的153株P(guān)EDV N基因全長(zhǎng)序列匹配度分別是100%和97%。以本實(shí)驗(yàn)室分離流行毒株為模板,利用SYBR GreenⅠ熒光染料法進(jìn)行RT-PCR擴(kuò)增,獲得擴(kuò)增產(chǎn)物構(gòu)建重組質(zhì)粒作為陽(yáng)性對(duì)照,建立檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒核酸的方法。同一樣品進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn),變異系數(shù)<0.9%。通過(guò)對(duì)臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)和測(cè)序驗(yàn)證,核酸檢測(cè)結(jié)果中的陽(yáng)性樣品準(zhǔn)確率為100%。

6 環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)

環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)方法(LAMP)是一種新興的分子生物學(xué)檢測(cè)方法,已廣泛應(yīng)用于多種細(xì)菌病和病毒病的檢測(cè)。以操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)速度快、敏感性高、特異性好等優(yōu)勢(shì)適合基層部門(mén)應(yīng)用。鄭新添等[21]針對(duì)PEDV的NP基因設(shè)計(jì)LAMP引物,對(duì)反應(yīng)體系優(yōu)化并進(jìn)行特異性及敏感性等試驗(yàn),建立了PEDV LAMP檢測(cè)方法,結(jié)果表明,該方法在65℃下恒溫?cái)U(kuò)增60 min,經(jīng)SYBR GreenⅠ染色后僅肉眼觀(guān)察即可判定結(jié)果。該方法特異性好,與傳染性胃腸炎病毒、豬輪狀病毒、豬瘟病毒及大腸桿菌等無(wú)交叉反應(yīng),對(duì)重組質(zhì)粒最低檢測(cè)限度為16拷貝/μL。Yu等[22]建立了可視化檢測(cè)PEDV的RT-LAMP方法,該方法在62℃水浴條件下,45 min即可完成試驗(yàn)反應(yīng),結(jié)果顯示,該法特異性好,對(duì)常見(jiàn)豬病毒的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性,其敏感性是一步法RT-PCR的100倍。Gou等[23]建立了PEDV的LAMP檢測(cè)方法,該方法在62℃水浴條件下,40 min即可完成反應(yīng),結(jié)果顯示,該法最低可檢測(cè)10 pg的RNA量,該法特異性好對(duì)常見(jiàn)豬病毒的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性,且不與其它常見(jiàn)豬病毒核酸發(fā)生交叉反應(yīng),特異性較好。時(shí)建立等[24]根據(jù)PEDV S基因設(shè)計(jì)特異性引物,通過(guò)優(yōu)化各種反應(yīng)條件,建立了檢測(cè)PEDV的LAMP快速檢測(cè)方法。此方法敏感度強(qiáng),將反轉(zhuǎn)錄后的病毒cDNA稀釋到108倍仍可檢出,是PCR方法的100倍,該法特異性好,對(duì)其它病原的擴(kuò)增結(jié)果均為陰性。

7 小結(jié)與展望

隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,各國(guó)專(zhuān)家、學(xué)者先后建立了多種PEDV分子生物學(xué)檢測(cè)方法,但這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn),如常規(guī)PCR方法、套式PCR方法和多重PCR方法雖然檢測(cè)簡(jiǎn)單、快速、方便但不能精確定量,且敏感性有限,容易漏檢。熒光定量PCR技術(shù)彌補(bǔ)了常規(guī)PCR方法的缺點(diǎn),但由于所用儀器和試劑價(jià)格昂貴,成本高,且對(duì)操作人員有很高的要求,不利于其在基層獸醫(yī)部門(mén)大規(guī)模推廣應(yīng)用。LAMP方法是一種新興的方法,不需要特殊的儀器設(shè)備,操作簡(jiǎn)便,更適合基層應(yīng)用。單獨(dú)使用任何一種方法都很難正確診斷該病,做好將各種方法結(jié)合起來(lái),綜合判斷,不同單位可根據(jù)自身的情況選擇適合的方法,相信隨著分子生物學(xué)的不斷發(fā)展,將會(huì)有更多的新型分子生物學(xué)診斷方法建立,從而為豬流行性腹瀉的診斷、分子流行病學(xué)調(diào)查和防控提供保障。

[1]Kim O,Chae C.Comparison of reverse transcription polymerase chain reaction,immunohistochemistry,and in situ hybridization for the detection of porcine epidemic diarrhea virus in pigs[J].Can J Vet Res,2002,66(2):112-116.

[2]陳宏智,曲哲會(huì),易本馳,等.豬流行性腹瀉病毒RT-PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J].畜牧與獸醫(yī),2014,46(7):99-101.

[3]于新友,李天芝,王金良,等.一步法RT-PCR快速檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒[J].養(yǎng)豬,2014(5):118-120.

[4]李長(zhǎng)龍,陳建飛,張?chǎng)?,?豬流行性腹瀉病毒野毒株/疫苗株RTPCR鑒別診斷方法的建立[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2014,50(6):6-8.

[5]秦毅斌,盧冰霞,趙武,等.豬流行性腹瀉病毒變異毒株與經(jīng)典毒株RT-PCR鑒別檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué),2014,44(5):509-514.

[6]王金良,謝金文,唐娜,等.應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄套式PCR檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2012,39(9):86-88.

[7]鄧祖麗穎,陳陸.豬流行性腹瀉病毒巢式RT-PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī),2014,41(1):34-37.

[8]劉琪,馮曉聲,周如月,等.鑒別豬流行性腹瀉疫苗毒株與野毒株巢式PCR檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J].廣東畜牧獸醫(yī)科技,2015,40(2):36-38.

[9]吳洋,杜彩虹,張博,等.豬腹瀉相關(guān)病毒多重RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2014,36(5):376-378.

[10]賈銳,葉佳欣,俞向前,等.豬傳染性胃腸炎及流行性腹瀉病毒二重RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J].上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(農(nóng)業(yè)科學(xué)版),2014,32(4):71-75.

[11]譚飛,馬士博,王瑞翀,等.豬瘟病毒和豬流行性腹瀉病毒雙重RT-PCR方法的建立[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志,2015,51(10):28-30.

[12]于新友,李天芝,沈志強(qiáng).一步法多重RT-PCR檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒、豬傳染性胃腸炎病毒和豬A群輪狀病毒方法的建立和應(yīng)用[J].養(yǎng)豬,2016(2):105-108.

[13]任玉鵬,張斌,湯承,等.同時(shí)檢測(cè)PEDV和TGEV及PDCoV的多重RT-PCR方法的建立及初步應(yīng)用[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué),2016,46(6):756-762.

[14]朱海俠,曾亮明,傅星源,等.豬流行性腹瀉病毒疫苗株與野毒株RT-PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J].福建畜牧獸醫(yī),2016,38(3):14-16.

[15]沈?qū)W懷,潘孝成,鞏雅靜,等.豬流行性腹瀉病毒實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J].養(yǎng)豬,2014(6):109-112.

[16]張志,劉自立,董雅琴,等.豬流行性腹瀉病毒TaqMan熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2014,31(4):76-84.

[17]董世娟,石明明,朱于敏,等.豬流行性腹瀉病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立及應(yīng)用[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),2015,31(1):11-16.

[18]于長(zhǎng)青,林樹(shù)伯,劉樂(lè)榮,等.豬流行性腹瀉病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法的建立與應(yīng)用[J].北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報(bào),2015,30(3):44-47.

[19]曹貝貝,韓麗,于朋飛,等.豬流行性腹瀉病毒SYBR GreenⅠ熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2015,37(6):461-464.

[20]勞秀杰,王靜靜,鄭東霞,等.豬流行性腹瀉病毒實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)方法的建立[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2016,33(1):62-66.

[21]鄭新添,黃其春,黃翠琴,等.環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)快速檢測(cè)豬流行性腹瀉病毒[J].中國(guó)預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào),2014,36(10):780-783.

[22]Yu X,Shi L,Lv X,et al.Development of a real-time reverse transcription loop-mediated isothermal amplification method for the rapid detection of porcine epidemic diarrhea virus[J]. Virol J,2015,12:76.

[23]Gou H,Deng J,Wang J,et al.Rapid and sensitive detection of porcine epidemic diarrhea virus by reverse transcription loopmediated isothermal amplification combined with a vertical flow visualization strip[J].Mol Cell Probes,2015,29(1):48-53.

[24]時(shí)建立,彭喆,王莉莉,等.豬流行性腹瀉病毒LAMP檢測(cè)方法的建立及初步應(yīng)用[J].中國(guó)動(dòng)物檢疫,2016,33(7):82-85,89.

(編輯:郭玉翠)

延緩衰老跑步最好

【德國(guó)《世界報(bào)》網(wǎng)站8月17日?qǐng)?bào)道】題:這樣訓(xùn)練最能保持年輕

端粒像保護(hù)罩一樣位于染色體的末端。隨著年齡增長(zhǎng),端粒變得越來(lái)越短并在某個(gè)時(shí)刻完全消失。這時(shí)染色體粘在一起,細(xì)胞死亡。專(zhuān)家稱(chēng),人們可以對(duì)這一過(guò)程多少施加些影響。

德國(guó)薩爾蘭大學(xué)醫(yī)學(xué)中心的心臟專(zhuān)科醫(yī)生克里斯蒂安·維爾納及其同事對(duì)哪種運(yùn)動(dòng)最有助于防止細(xì)胞老化進(jìn)行了研究。他們將200多名年齡在30至60歲、從不做運(yùn)動(dòng)但也不吸煙、沒(méi)有血壓或心臟問(wèn)題的成年人分成四組,其中三組分別進(jìn)行耐力訓(xùn)練、間歇運(yùn)動(dòng)訓(xùn)練與力量訓(xùn)練。另外一組則保持不運(yùn)動(dòng)的狀態(tài),以便進(jìn)行比較。

結(jié)果發(fā)現(xiàn),三種訓(xùn)練都達(dá)到了穩(wěn)定端粒的效果,所有從事運(yùn)動(dòng)的人的端粒數(shù)量都多于不運(yùn)動(dòng)的人。但是只有跑步激活了端粒酶。這種酶存在于人體細(xì)胞內(nèi),并負(fù)責(zé)生成端粒。維爾納說(shuō),不管參加者是進(jìn)行了間歇跑訓(xùn)練還是繞著跑道跑圈,端粒酶在細(xì)胞內(nèi)的活動(dòng)都增加至兩倍。這不僅對(duì)端粒有益,總體來(lái)說(shuō)也對(duì)細(xì)胞有好處。

他說(shuō):“適度和定期的耐力訓(xùn)練能遏制血管細(xì)胞的老化并降低患心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。訓(xùn)練令心臟和血管的抗壓能力提高。”

雖然人們無(wú)法將心臟訓(xùn)練得更年輕,卻可以令其保持年輕。因此在50歲時(shí)開(kāi)始跑步也是值得的。“在最理想的情況下,到80歲時(shí)你還可以擁有50多歲的人的心臟?!?/p>

對(duì)力量訓(xùn)練愛(ài)好者來(lái)說(shuō)也有令人欣慰的消息:器械訓(xùn)練也強(qiáng)化了端粒,只不過(guò)是以另外的方式,而且效果沒(méi)有跑步好。

美國(guó)近期的一項(xiàng)研究顯示,力量訓(xùn)練也能延長(zhǎng)壽命。賓夕法尼亞州立大學(xué)的珍妮佛·克瓦什涅夫斯基,將針對(duì)退休人員進(jìn)行的一次大規(guī)模健康調(diào)查的數(shù)據(jù)與死亡登記的數(shù)據(jù)進(jìn)行了比較。

有3萬(wàn)多名65歲以上的人接受了調(diào)查,回答的問(wèn)題包括他們是否像醫(yī)生建議的那樣進(jìn)行了肌肉訓(xùn)練,因?yàn)檫@可以預(yù)防骨折和其他老年問(wèn)題。調(diào)查顯示,其中9%的老年人每周進(jìn)行兩次力量訓(xùn)練。

研究者將從事力量訓(xùn)練者與其他老年人的死亡風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)前者的死亡風(fēng)險(xiǎn)低了近一半。當(dāng)然,運(yùn)動(dòng)的老年人過(guò)胖、吸煙、喝酒的也少,進(jìn)行耐力訓(xùn)練的也更多。

具體到每個(gè)人,很難說(shuō)其中哪個(gè)因素延長(zhǎng)了壽命。但即便如此,力量訓(xùn)練仍被證明是有益的,死亡風(fēng)險(xiǎn)降低了。

“任何訓(xùn)練都好過(guò)沒(méi)有訓(xùn)練?!本S爾納說(shuō)。最好是為了保護(hù)心臟進(jìn)行耐力運(yùn)動(dòng),并且為了強(qiáng)健肌肉和增加骨密度而進(jìn)行力量訓(xùn)練。

不管怎么說(shuō),在拖延運(yùn)動(dòng)時(shí)想想染色體,或許會(huì)對(duì)你有所幫助—至少端??隙ㄊ菚?huì)高興的。

(轉(zhuǎn)自參考消息[N],2016-08-19)

S858.285.3

A

1002-1957(2016)05-0081-04

2016-08-29

山東省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系生豬產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(SDAIT-08-17);山東省重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃項(xiàng)目(2015GSF121027)

李天芝(1985-),女,山東菏澤人,助理研究員,碩士,主要從事動(dòng)物傳染病診斷技術(shù)研究.E-mail:517493935@qq.com

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