黃鳳祥張輝高增艷孫盼鋒趙娣苗麗君(.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)二科 河南鄭州 45005;.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸科 山東濰坊 603)

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外周血T-SPOT.TB檢測對多系統(tǒng)結(jié)核感染的診斷價值

黃鳳祥1張輝1高增艷2孫盼鋒1趙娣1苗麗君1
(1.鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院呼吸與危重癥醫(yī)學(xué)二科 河南鄭州 450052;2.濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院呼吸科 山東濰坊 261031)

【摘要】目的 探討結(jié)核分枝桿菌感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(spot test of T cels infected with Mycobacterium tuberculosis,TSPOT.TB)評分在多系統(tǒng)結(jié)核感染診斷中的應(yīng)用價值?方法 回顧性納入2013年10月至2014年9月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院并確診為結(jié)核感染的530例患者,所有患者均應(yīng)用T-SPOT.TB試劑盒檢測?分別將外周血中經(jīng)6 kD早期分泌靶抗原(early secretory antigenic target6,ESAT-6)和10 kD培養(yǎng)濾過蛋白(culture filtrate protein 10,CFP-10)刺激后T細(xì)胞斑點(diǎn)形成數(shù)記為其A值?B值?根據(jù)病變侵及范圍分為單系統(tǒng)結(jié)核感染組和多系統(tǒng)結(jié)核感染組,分析兩組間陽性檢出率及兩組A值?B值的差異?結(jié)果 T-SPOT.TB診斷結(jié)核感染的總敏感性為87.7%(465/530)?多系統(tǒng)結(jié)核感染組的陽性檢出率94.1%(143/152)高于單系統(tǒng)結(jié)核感染組的陽性檢出率85.1%(322/378)?多系統(tǒng)感染組的A值(202.32±4.57)/106PBMCs及B值(207.20±4.98)/106PBMCs均顯著高于單系統(tǒng)感染組的A值(35.51±2.38)/106PBMCs 及B值(38.48±1.91)/106PBMCs,差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(tA=5.33;tB=4.48;P＜0.001)?結(jié)論 T-SPOT.TB在診斷單系統(tǒng)及多系統(tǒng)結(jié)核感染中具有較高的敏感性,其值越高,提示多系統(tǒng)結(jié)核感染的可能性越大?

【關(guān)鍵詞】結(jié)核分枝桿菌感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn);斑點(diǎn)形成細(xì)胞數(shù);多系統(tǒng)結(jié)核感染

據(jù)世界衛(wèi)生組織統(tǒng)計(jì),目前全球約有20億人感染結(jié)核分枝桿菌,并且近年來結(jié)核感染發(fā)病率有上升趨勢?結(jié)核桿菌侵入人體后,可引起肺內(nèi)和(或)肺內(nèi)的單系統(tǒng)或全身多系統(tǒng)病變的疾病?多系統(tǒng)(兩個及以上)結(jié)核感染因臨床表現(xiàn)不典型?缺乏“金標(biāo)準(zhǔn)"或者忽略尋找合并有其他系統(tǒng)結(jié)核感染的證據(jù),極易造成漏診,影響治療和預(yù)后,因此尋找能夠安全?有效?快速地提示結(jié)核感染致病范圍的診斷方法非常重要?結(jié)核分枝桿菌感染T細(xì)胞斑點(diǎn)形成實(shí)驗(yàn)(T-SPOT.TB)是一種具有較高敏感性及特異性[1]的快速診斷結(jié)核感染的方法,逐漸被臨床醫(yī)生認(rèn)知并接納?本研究以結(jié)核感染患者T-SPOT.TB評分(A值?B值)為基礎(chǔ),對照分析單系統(tǒng)結(jié)核感染組和多系統(tǒng)結(jié)核感染組A值?B值的差異,為臨床中多系統(tǒng)結(jié)核感染的診斷和治療提供依據(jù)?

1 對象及方法

1.1 一般資料 回顧性納入2013年10月至2014年

9月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院住院的530例結(jié)核感染患者,男性307例,女性223例,平均年齡(42.05± 19.21)歲?所有患者均行T-SPOT.TB檢查?根據(jù)病變范圍進(jìn)一步分為:單系統(tǒng)感染組和多系統(tǒng)感染組(兩個或以上系統(tǒng)感染)?共分為以下8個系統(tǒng)感染:呼吸系統(tǒng)(鼻?咽?喉?氣管?肺組織和胸膜)?消化系統(tǒng)(口?咽?食道?胃?小腸?大腸和肛門)?運(yùn)動系統(tǒng)(骨骼?關(guān)節(jié)?骨骼肌)?泌尿系統(tǒng)(腎臟?膀胱?輸尿管和尿道)?生殖系統(tǒng)(卵巢?子宮?輸卵管?睪丸?附睪?輸精管?盆腔)?免疫系統(tǒng)(骨髓?胸腺?脾臟?淋巴結(jié)?扁桃體?小腸集合淋巴結(jié)?闌尾)?神經(jīng)系統(tǒng)(腦膜?脊髓)?循環(huán)系統(tǒng)(心包?血管)?納入標(biāo)準(zhǔn):①菌陰與菌陽肺結(jié)核:痰涂片?痰培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)抗酸桿菌;組織病理學(xué)提示干酪樣壞死?肉芽腫性炎或TB-DNA陽性等結(jié)核感染表現(xiàn),并參照肺結(jié)核的診斷標(biāo)準(zhǔn)排除其他疾病?②生殖系統(tǒng)?泌尿系統(tǒng)?運(yùn)動系統(tǒng)?免疫系統(tǒng)?消化系統(tǒng)結(jié)核病:分泌物涂片或培養(yǎng)提示抗酸桿菌生長;組織病理學(xué)提示干酪樣壞死?肉芽腫性炎或TB-DNA檢測陽性等,并除外腫瘤及其他微生物感染?③神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)核:腦脊液行常規(guī)?生化?腺苷脫氨酶(ADA)?結(jié)核菌培養(yǎng)?結(jié)核菌涂片等檢查提示結(jié)核桿菌感染,且患者癥狀及體征?影像學(xué)檢查支持結(jié)核菌感染,抗結(jié)核治療有效?該研究獲得所有納入研究對象的知情同意?

1.2 試驗(yàn)方法 按T-SPOT.TB試劑盒(英國Oxford immunotec公司)操作規(guī)范進(jìn)行:①采集受檢者靜脈血4～6 ml,肝素抗凝?②6 h內(nèi),加入Ficol淋巴細(xì)胞分離液離心分離外周血單個核細(xì)胞,用培養(yǎng)液將濃度調(diào)整至2.5×106/ml,加入已包被抗IFN-γ單抗的96孔板上?③分別于相應(yīng)單孔加入50μl細(xì)胞培養(yǎng)基?植物血凝素?抗原A(ESAT-6)和抗原B(CFP-10)?④孵育?洗板,加入生物素標(biāo)記的二抗及顯色液?⑤結(jié)果判定:出現(xiàn)以下結(jié)果時判斷為陽性,空白對照孔點(diǎn)數(shù)＜6時,A或B抗原斑點(diǎn)數(shù)減去空白對照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6;空白對照孔斑點(diǎn)數(shù)≥6時,A或B抗原斑點(diǎn)數(shù)≥2倍空白對照孔斑點(diǎn)數(shù)?

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件,定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)描述,兩組的評分比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn),P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義?

2 結(jié)果

2.1 結(jié)核感染患者病變范圍分析 530例結(jié)核感染患者中,單系統(tǒng)感染者378例,多系統(tǒng)感染者152例?單系統(tǒng)感染中以呼吸系統(tǒng)發(fā)病率最高(n=322),其次為運(yùn)動系統(tǒng)(n=26)和免疫系統(tǒng)(n=15),神經(jīng)系統(tǒng)和循環(huán)系統(tǒng)最低(n=1)?多系統(tǒng)感染中,以呼吸并免疫系統(tǒng)最高(n=41),其次為呼吸并消化系統(tǒng)(n=30)?呼吸并運(yùn)動系統(tǒng)(n=20)?呼吸并神經(jīng)系統(tǒng)(n=7)?具體病例分布見表1?

表1 530例結(jié)核感染患者病例分布及構(gòu)成比

2.2 兩組T-SPOT.TB的檢測結(jié)果 530例結(jié)核感染患者中,T-SPOT.TB陽性者465例,敏感性為87.7%?多系統(tǒng)感染組的T-SPOT.TB陽性檢出率(94.1%)高于單系統(tǒng)感染組的T-SPOT.TB陽性檢出率(85.1%)?見表2?

表2 兩組T-SPOT.TB的檢測結(jié)果(n,%)

2.3 兩組A值?B值比較 多系統(tǒng)感染組的A值及B值均顯著高于單系統(tǒng)感染組的A值及B值,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001)?見表3?

表3 兩組A值?B值水平比較(±s)

表3 兩組A值?B值水平比較(±s)

分組 n A值/106PBMCs B值/106PBMCs單系統(tǒng)感染組378 35.51±2.38 38.48±1.91多系統(tǒng)感染組 152 202.32±4.57 207.20±4.98 t 5.33 4.48 P ＜0.001 ＜0.001

3 討論

結(jié)核感染多以肺結(jié)核為主,肺外結(jié)核占結(jié)核感染的25%～30%,死亡率達(dá)14.1%～17.6%?肺外結(jié)核臨床表現(xiàn)復(fù)雜?不特異,現(xiàn)有的輔助檢查包括結(jié)核桿菌培養(yǎng)及涂片,結(jié)核抗體檢測陽性率均較低,加上取材困難,使其診斷更加困難?而且,目前沒有一種檢測方法能夠很好提示結(jié)核感染的病變范圍?因此,當(dāng)合并有多個系統(tǒng)結(jié)核感染時,往往出現(xiàn)漏診,影響預(yù)后?

近年來,結(jié)核分枝桿菌感染T細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)(TSPOT.TB)因較高的準(zhǔn)確性和快速性在臨床診斷中廣泛開展?T-SPOT.TB是以結(jié)核桿菌所特有,而BCG和其他分枝桿菌缺失的RD1區(qū)基因編碼的ESAT-6(早期分泌靶抗原-6,A抗原)和CFP-10(培養(yǎng)過濾蛋白-10,B抗原)為特異性抗原[2],體外刺激結(jié)核桿菌感染患者特異的記憶T細(xì)胞,釋放IFN-γ,計(jì)數(shù)產(chǎn)生IFN-γ的細(xì)胞來判斷結(jié)核感染?國內(nèi)外研究證實(shí),T-SPOT.TB敏感性可達(dá)83.3%～95.5%,特異性可達(dá)80.8%～86%,明顯優(yōu)于傳統(tǒng)診斷方法,如TST?痰培養(yǎng)等[3-5]?Kim等[6]研究證實(shí),T-SPOT.TB對肺外結(jié)核的敏感性也明顯高于TST?本研究中TSPOT.TB在單系統(tǒng)及多系統(tǒng)結(jié)核感染中的總敏感度為87.7%,與國內(nèi)外文獻(xiàn)報道相符?

李紅等[7]發(fā)現(xiàn)血T-SPOT.TB的菌陽組結(jié)核感染敏感度明顯高于菌陰組,提示T-SPOT.TB評分可能與痰菌數(shù)量有關(guān)?Aiken及Bosshard等[8-9]對患者在診斷結(jié)核病和治療后用T-SPOT.TB進(jìn)行檢測,發(fā)現(xiàn)治療后分泌IFN-γ的淋巴細(xì)胞數(shù)在減少,TSPOT.TB的陽性檢出率降低,提示T-SPOT.TB可以作為一個較好的免疫監(jiān)測工具來判斷結(jié)核感染治療效果?因此我們從T-SPOT.TB評分(A?B值)的角度,來探究它在提示結(jié)核感染病變范圍中的價值?本研究顯示,多系統(tǒng)結(jié)核感染組陽性檢出率較高,并且單系統(tǒng)結(jié)核感染組與多系統(tǒng)結(jié)核感染組的T-SPOT.TB的評分(A?B值)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.001),并且評分越高,提示多系統(tǒng)結(jié)核感染的可能性越大?我們分析,此可能與機(jī)體免疫與結(jié)核菌數(shù)量有關(guān)[10],當(dāng)機(jī)體免疫力低下時,免疫系統(tǒng)與結(jié)核菌之間的平衡被打破,結(jié)核菌得以大量復(fù)制,從而導(dǎo)致活動性結(jié)核病,機(jī)體免疫力越低,結(jié)核菌復(fù)制的越多,容易引起感染的系統(tǒng)就越多?結(jié)核菌數(shù)量的增加,使被加工呈遞的抗原也會增加,因此被活化的抗原特異性效應(yīng)T細(xì)胞的數(shù)量也會隨之增加,在T-SPOT.TB就反映為斑點(diǎn)數(shù)目的增加,即評分的增加?

總之,T-SPOT.TB在單系統(tǒng)及多系統(tǒng)結(jié)核感染中均具有較高的敏感性?臨床工作中,考慮存在多系統(tǒng)的結(jié)核感染時,T-SPOT.TB評分可以提示重要的輔助診斷價值?但其具體界值的確定及在不同人群中的應(yīng)用,仍需更大樣本的資料來確定?

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The diagnostic value of T-SPOT.TB scores in multi-system tuberculosis

Huang Fengxiang1,Zhang Hui1,Gao Zengyan2,Sun Panfeng1,Zhao Di1,Miao Lijun1
(1.Department of Respiratory and Critical Care Medicine,the First Afiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450000,China;2.Department of Respiratory Medicine,the Afiliated Hospital ofWeifang University,Weifang 261031,China)

【Abstract】Objective To evaluate the diagnostic value of T-SPOT.TB scores inmulti-system tuberculosis.Methods A retrospective analysis of530 tuberculosis patients hospitalized from October of2013 to September of2014 was performed.Al pa-tients were tested with T-SPOT.TB assay.The T-SPOT.TB assay yielded values A and B,which represented the number of T cels thatwere stimulated by the antigens for early secreting antigen target 6(ESAT-6)or culture filtrate protein-10 peptide (CFP-10).The patientswere divided into single-system and multiple-system group according to the extent of the disease.Independent-samples t testswere used to compare the values A and B between the two groups.Results In 530 patients includ-ed in this study,465 tested positivewith a sensitivity of87.7%.Inmulti-system groups,the positive rate(94.1%,143/152)was higher than that(85.1%,322/378)in single-system groups.The mean A and B values in the multi-system group[(202.32±4.57)/106PBMCs and(207.20±4.98)/106PBMCs],were significantly greater than those in the single-system group[(35.51±2.38)/106PBMCs and(38.48±1.91)/106PBMCs](tA=5.33,tB=4.48,P＜0.001).Conclusion TSPOT.TB score could play an important role in identifying single-system and multi-system tuberculosis infections.Higher score indicates a greater likelihood ofmultiple-system tuberculosis infection.

【Key words】T-SPOT.TB assay;spot foming cel frequency;multi-system tuberculosis

(收稿日期:2015-09-01)

通訊作者:苗麗君,E-mail:miaolily@126.com?

【中圖分類號】R 52

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.01.012