趙娜 楊建萍 尹玉慧 齊靜雯 王玉豪 張紅 陳奎生(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 河南鄭州 450052)

?

M asson染色在宮頸微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用

趙娜 楊建萍 尹玉慧 齊靜雯 王玉豪 張紅 陳奎生
(鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科 河南鄭州 450052)

【摘要】目的 探討Masson染色在宮頸微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌診斷中的應(yīng)用價(jià)值?方法 收集疑似宮頸微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌病例108例,分別對(duì)其進(jìn)行Masson和免疫組化染色?結(jié)果 Masson染色和免疫組化(抗體:IV型膠原)均能清晰地顯示出基底膜變薄或者缺損程度?Masson染色:70例(64.8%)為宮頸微小浸潤鱗狀細(xì)胞癌,20例(18.5%)宮頸原位鱗狀細(xì)胞癌,18例(16.7%)為宮頸鱗狀細(xì)胞癌;免疫組化染色:60例(55.6%)為宮頸微小浸潤鱗狀細(xì)胞癌,24例(22.2%)為宮頸原位鱗狀細(xì)胞癌,24例(22.2%)為宮頸鱗狀細(xì)胞癌?兩者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)?結(jié)論 Mas-son染色法可用來輔助診斷宮頸微小浸潤鱗狀細(xì)胞癌,尤其可在快速術(shù)中冰凍切片中輔助HE染色確診有無微浸潤性?

【關(guān)鍵詞】宮頸微小浸潤鱗狀細(xì)胞癌;基底膜;Masson染色;免疫組化染色

宮頸癌(invasive carcinoma of cervix,ICC)是起源于宮頸上皮細(xì)胞的惡性腫瘤,以鱗狀細(xì)胞癌最為常見(60%～85%)[1],其中育齡期(20～49歲)是微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌好發(fā)年齡階段[2]?近年來,隨著全民醫(yī)療保健與普查意識(shí)的逐步加強(qiáng),微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌的檢出率較以往明顯增高?值得關(guān)注的是,明確的宮頸癌病變?cè)\斷分級(jí)對(duì)臨床治療方案的選擇具有重要的指導(dǎo)意義,尤其在年輕女性患者中?截止目前,宮頸病變的診斷分級(jí)主要依據(jù)其基底膜[3](basement membrane,BM)完整與否來判定其是否發(fā)生浸潤,進(jìn)而完成明確診斷?因常規(guī)的HE染色對(duì)基底膜著色能力較差,現(xiàn)臨床上主要采用特異性較強(qiáng)的免疫組化對(duì)基底膜進(jìn)行著色?本研究收集2008年1月至2015年1月疑似宮頸微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌108例,分別采用Masson和免疫組化染色對(duì)其基底膜進(jìn)行顯色對(duì)比分析,現(xiàn)報(bào)告如下?

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 病例選擇 收集2008年1月至2015年1月鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院病理科108例疑似宮頸微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌的病例,年齡為21～67歲,中位年齡43.4歲?

1.1.2 主要試劑與儀器 10%福爾馬林;Ⅳ型膠原(一抗);PV-9000(二抗);胃蛋白酶消化液;Masson復(fù)合染色液(試劑A:Weigert鐵蘇木素液;試劑B:麗春紅酸性復(fù)紅;試劑C:1%磷鉬酸水溶液;試劑D:亮綠液,中山金橋);包埋盒;LEICA ST5020切片機(jī);LEI-CA CV5030封片機(jī);BENCHMARK XT免疫組化機(jī)(羅氏);顯微鏡(Olymps)?

1.2 治療方法

1.2.1 制片 取宮頸標(biāo)本組織,10%福爾馬林固定,常規(guī)制成石蠟切片?連續(xù)切片5張,切片厚3μm,常規(guī)脫蠟脫水?

1.2.2 免疫組化 按EnVision二步法染色步驟進(jìn)行,所用試劑一抗小鼠抗人Ⅳ型膠原單克隆抗體,以肝癌組織標(biāo)本為陽性對(duì)照,以PBS代替一抗作陰性對(duì)照?購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司?

1.2.3 Masson染色法 ①切片脫蠟至蒸餾水中;②Weigert鐵蘇木素液染5～10 min;③流水沖洗;④1%的鹽酸酒精分化;⑤流水沖洗,鏡下觀察;⑥麗春紅酸性復(fù)紅液染5～10 min;⑦流水少洗;⑧1%磷鉬酸水溶液染5～10 min,鏡下觀察;⑨直接用苯胺藍(lán)復(fù)染5 min;⑩1%的冰醋酸水溶液處理2 min;95%的乙醇脫水3次;無水酒精脫水,二甲苯透明,中性樹膠封片?

1.2.4 結(jié)果判定 Masson染色膠原纖維呈藍(lán)色,肌纖維呈紅色,紅細(xì)胞呈橘紅色,基底膜含有膠原纖維,故染成藍(lán)色?基底膜呈連續(xù)線狀結(jié)構(gòu)為(+),基底膜部分呈變薄或連續(xù)缺失均為(-)?免疫組化染色基底膜Ⅳ型膠原表達(dá)為連續(xù)棕色線性結(jié)構(gòu)為(+),呈變薄或連續(xù)缺失均為(-)[4]?

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,率的比采用Mann-Whitney Test(秩和檢驗(yàn))或Fisher確切概率法?

2 結(jié)果

免疫組化染色下60例(55.6%),Masson染色下70例(64.8%)病灶周邊基底膜樣物質(zhì)減少或者部分缺如,結(jié)合形態(tài)學(xué)特點(diǎn)證實(shí)為宮頸微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌;免疫組化染色下24例(22.2%),Masson染色下20例(18.5%)病灶周邊基底膜有完整的著色,將其暫定為宮頸原位鱗狀細(xì)胞癌,但不排除因上皮腳橫切或斜切面造成的假象;免疫組化染色下24例(22.2%),Masson染色下18例(16.7%)病灶周邊基底膜完全缺如,將其診斷為宮頸浸潤性鱗狀細(xì)胞癌?統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示,免疫組化與Masson染色分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.883)?Masson染色和免疫組化均能清晰地顯示基底膜的變化(有無破損或厚薄不均)?見圖1?

圖1 宮頸癌不同染色結(jié)果對(duì)比

3 討論

宮頸微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌于1947年由Mest werdt首次提出,近年來有關(guān)其確切定義一直比較模糊,但間質(zhì)浸潤深度一直是一個(gè)公認(rèn)的生物學(xué)行為指標(biāo),同時(shí)有研究發(fā)現(xiàn)不同的間質(zhì)浸潤深度其淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移率有明顯的差異?世界衛(wèi)生組織(WHO)起初推薦認(rèn)可國際婦產(chǎn)科聯(lián)合會(huì)(FIGO)標(biāo)準(zhǔn)和美國婦科腫瘤醫(yī)師學(xué)會(huì)(SGO)標(biāo)準(zhǔn),即FIGO分期:1a1(浸潤深度≤3 mm,水平寬度≤7 mm)和1a2(3 mm≤浸潤深度≤5 mm,水平寬度≤7 mm),有無脈管與淋巴管瘤栓與分期無關(guān),與此同時(shí)SGO標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定為上皮基底膜下浸潤深≤3 mm,水平寬度≤7 mm,且無血管淋巴管瘤栓形成?截至2014年WHO對(duì)宮頸病變分級(jí)進(jìn)行重新修訂:低級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變和高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變?微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌(相當(dāng)于FIGO分期系統(tǒng)中的1a期宮頸病變,其定義為最大浸潤深度為5 mm,最大水平擴(kuò)張范圍為7 mm?)?浸潤癌,其死亡率隨臨床分期的增加而明顯增高?盡管近年來綜合治療已成為宮頸癌治療的一個(gè)重要策略[5],但手術(shù)仍是一致公認(rèn)的宮頸癌的主要治療手段,尤其是不同的臨床分期所采用的手術(shù)方案大有不同[6],如對(duì)低?高級(jí)別鱗狀上皮內(nèi)病變者大多給予保留子宮的宮頸錐切術(shù)治療;對(duì)明確為浸潤癌的患者通常為改良子宮全切術(shù)加盆腔淋巴結(jié)清掃以及后續(xù)的輔助治療;但對(duì)早期浸潤性癌患者,手術(shù)方案的選擇必須綜合考慮患者年齡和意愿,該級(jí)對(duì)育齡期女性(具有生育要求的育齡期女性,一般采用宮頸錐切即可;若無生育要求,一般采用根治性子宮全切術(shù);如果存在著淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,無論患者有無生育要求,均采用改良子宮全切術(shù)加盆腔淋巴結(jié)清掃)尤為重要,其主要目的便于臨床醫(yī)生給患者以個(gè)體化?人性化治療方案,進(jìn)而提高醫(yī)療質(zhì)量,促進(jìn)患者術(shù)后恢復(fù),改善生活質(zhì)量?

宮頸癌發(fā)病率僅次于乳腺癌,約88%的病例發(fā)生在發(fā)展中國家?據(jù)不完全統(tǒng)計(jì),現(xiàn)我國每年約有10萬新增病例,約占全球20%,為我國女性最常見的婦科惡性腫瘤之一?過去宮頸病變主要依賴于常規(guī)的HE染色和免疫組化等方法,HE染色判定主觀性較強(qiáng),對(duì)臨床病例醫(yī)師專業(yè)要求較高,限制了其在確定宮頸病變,尤其是在確定微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌方面的診斷?免疫組化作為一種新興的技術(shù),其本身具有特異性強(qiáng)?敏感性高?定位準(zhǔn)確?形態(tài)與功能相結(jié)合,可自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn),但該技術(shù)因成本較高?技術(shù)操作要求苛刻?耗時(shí)較長等導(dǎo)致其難以大范圍進(jìn)行普及推廣?

本研究分別采用Masson染色和免疫組化對(duì)108例疑似微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌進(jìn)行基底膜著色,進(jìn)而對(duì)其進(jìn)行臨床分期,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析二者差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.883),進(jìn)一步得出Masson染色法可用來輔助診斷宮頸微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌的結(jié)論?Masson染色是傳統(tǒng)經(jīng)典的膠原纖維染色法,常用于膠原纖維和肌纖維的鑒別染色,在實(shí)驗(yàn)教學(xué)?組織的觀察研究?疾病診斷等方面起著舉足輕重的作用,現(xiàn)逐漸推廣并應(yīng)用于疾病的病理診斷?鑒別診斷以及科學(xué)研究中[7],但是運(yùn)用于宮頸微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌的研究于國內(nèi)尚屬首次?該方法操作簡便?經(jīng)濟(jì)?染色效果好?易于觀察,同時(shí)耗時(shí)短,可與HE染色同步進(jìn)行,輔助其診斷宮頸微小浸潤性鱗狀細(xì)胞癌,這一點(diǎn)在快速術(shù)中冰凍診斷時(shí)顯得尤為重要?

此外,研究發(fā)現(xiàn)宮頸癌發(fā)病年齡有“年輕化"的趨勢,與以往的研究結(jié)果相一致[8]?近年來我國經(jīng)濟(jì)?人民生活水平?思想觀念尤其在晚婚晚育方面有了很大提高,Masson染色技術(shù)可作為一種簡便易行的宮頸病變?cè)\斷與分級(jí)的方法,在一定程度提高該病的檢出率,同時(shí)也可被大范圍推廣應(yīng)用,改善患者的生活質(zhì)量?

參考文獻(xiàn)

[1] 楊雷英.WWOX?Bcl-2和S-100A4在宮頸浸潤性鱗狀細(xì)胞癌的表達(dá)及意義[D].濟(jì)南:山東大學(xué),2009.

[2] Gutnik H,Matisic JP,Zakelj M P,et al.Microinvasive cervical squa-mous cel carcinoma in Slovenia during the period 2001-2007[J].Radiol Oncol,2014,48(3):282-288.

[3] 彭向陽,彭偉雄,黃振華,等.IL-6和MMP-9在胃癌組織中的表達(dá)及其相關(guān)性[J].中國熱帶醫(yī)學(xué),2012,12(8):928-930,933.

[4] 田澄,金玉蘭,趙曉麗,等.微波輻射PAS染色顯示聲帶鱗狀細(xì)胞癌早期的基底膜改變[J].診斷病理學(xué)雜志,2011,18(6):450-453.

[5] 朱曉艷.宮頸癌手術(shù)治療進(jìn)展[D].蘭州:蘭州大學(xué),2013.

[6] Lytwyn A,Zaino R,Colgan T J,et al.Superficialy Invasive Squamous Cel Carcinoma of the Uterine Cervix[J].Pathology Case Reviews,2013,18(4):183-189.

[7] 李甜,陳紅香,廖禮彬,等.人結(jié)腸切片三種特殊染色的比較[J].中國組織化學(xué)與細(xì)胞化學(xué)雜志,2015,24(1):109-111.

[8] 馬曉潔,李莎莎,譚榜憲.宮頸癌淋巴結(jié)微轉(zhuǎn)移的研究進(jìn)展[J].現(xiàn)代婦產(chǎn)科進(jìn)展,2015,(4):303-305.

App lication of M asson staining in the diagnosis ofm icroinvasive squamous cel carcinoma of the cervix

Zhao Na,Yang Jianping,Yin Yuhui,Qi Jingwen,Wang Yuhao,Zhang Hong,Chen Kuisheng.
(Department of Pathology,the First Afiliated Hospital of Zhengzhou University,Zhengzhou 450052,China)

【Abstract】Objective To investigate the application value of Masson staining in the diagnosis of microinvasive squamous cellbook=18,ebook=24carcinoma of the cervix.M ethods 108 cases suspected asmicroinvasive squamous cel carcinoma of the cervix were colected.Immunohistochemistry and Masson staining were used to detect them.Results Both Masson and immunohistochemistry staining can show basementmembrane thinning or defect.Masson staining:70(64.8%)casesweremicroinvasive squamous cel carcinoma,20(18.5%)caseswere cervical carcinoma in situ,18(16.7%)caseswere cervical squamous cel carcinoma.Immunohistochemistry staining:60(55.6%)cases weremicroinvasive squamous cel carcinoma,24(22.2%)cases were cervical carcinoma in situ,24 (22.2%)caseswere cervical squamous cel carcinoma.There were no statisticaly diference between Masson and Immunohisto-chemical staining(P>0.05).Conclusion Masson staining can be used in the diagnosis ofmicroinvasive squamous cel carcino-ma of the cervix,especialy in assisting HE in fast frozen.

【Key words】microinvasive squamous cel carcinoma;basementmembrane;Masson staining;immunohistochemical staining

(收稿日期:2015-08-02)

通訊作者:陳奎生,E-mail:chenksh2002@163.com?

【中圖分類號(hào)】R 737.33

doi:10.3969/j.issn.1004-437X.2016.01.004