賈偉，蔣紅云，張?zhí)m，張燕寧，毛連剛

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193

4種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑不同劑型對(duì)斑馬魚急性毒性效應(yīng)

賈偉，蔣紅云*，張?zhí)m，張燕寧，毛連剛

中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所，北京 100193

采用半靜態(tài)法測(cè)定了4種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑原藥及制劑對(duì)斑馬魚(Brachydonio rerio)急性毒性。結(jié)果表明，以實(shí)測(cè)濃度計(jì)，250 g·L-1嘧菌酯懸浮劑對(duì)斑馬魚的96 h半數(shù)致死濃度(LC50)值為0.539 mg·L-1，急性毒性為高毒，95%嘧菌酯原藥和50%嘧菌酯水分散粒劑對(duì)斑馬魚的LC50(96 h)值分別為1.09和1.21 mg·L-1，急性毒性均為中毒；98%啶氧菌酯原藥和22.5%的啶氧菌酯懸浮劑對(duì)斑馬魚的LC50(96 h)值分別為0.0974和0.0972 mg·L-1，急性毒性均為劇毒；95%吡唑醚菌酯原藥、15%吡唑醚菌酯懸浮劑和250 g·L-1吡唑醚菌酯乳油對(duì)斑馬魚的LC50(96 h)值為0.0613、0.0549和0.0487 mg·L-1，急性毒性均為劇毒；95%醚菌酯原藥和50%醚菌酯水分散粒劑對(duì)斑馬魚的LC50(96 h)值分別為0.468和0.702 mg·L-1，急性毒性均為高毒。這4種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑對(duì)斑馬魚均有較高風(fēng)險(xiǎn)，會(huì)對(duì)其他水生生物也存在潛在的風(fēng)險(xiǎn)。

甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑；斑馬魚；急性毒性；劑型；中毒癥狀

甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑是基于天然抗生素粘液蜜環(huán)菌(strobilurin A)為先導(dǎo)化合物開發(fā)的新型殺菌劑，幾乎對(duì)所有真菌類病害均具有良好的生物活性。其作用機(jī)理是通過抑制病原菌細(xì)胞線粒體中色素b和c1之間的電子傳遞，從而抑制線粒體呼吸作用，最終導(dǎo)致病原菌細(xì)胞死亡[1]。自1996年巴斯夫開發(fā)了第1個(gè)甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑醚菌酯(kresoxim-methyl)以來，甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑憑借其獨(dú)特的作用方式經(jīng)過多年的發(fā)展，在世界殺菌劑市場(chǎng)中占據(jù)了主導(dǎo)地位，被廣泛應(yīng)用于真菌綱病害防治。目前廣泛應(yīng)用的品種有嘧菌酯、吡唑醚菌酯、肟菌酯、醚菌酯、啶氧菌酯等[2]。

農(nóng)藥在施用過程中由于噴灑和流失會(huì)進(jìn)入附近的土壤和水體環(huán)境中，從而進(jìn)一步污染土壤和水體，并引起土壤和水體中非靶標(biāo)生物的中毒或死亡[3-4]。目前，隨著甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑廣泛應(yīng)用，尤其是在水稻田中的大面積應(yīng)用，使得水生生態(tài)系統(tǒng)面臨這類殺菌劑的污染程度也越來越嚴(yán)重[5]。研究表明，嘧菌酯會(huì)對(duì)水生藻類、大型無脊椎動(dòng)物及脊椎動(dòng)物等水生生物產(chǎn)生影響[6]。嘧菌酯在徑流水中濃度范圍為1～30 μg·L-1[7-9]，此濃度范圍的嘧菌酯會(huì)對(duì)橈足類哲水蚤產(chǎn)生毒性[10]，同時(shí)會(huì)影響線粒體的呼吸作用機(jī)制，對(duì)大西洋鮭魚仔魚產(chǎn)生不利影響[11]。嘧菌酯也可以抑制綠狐尾藻的抗氧化酶系統(tǒng)，產(chǎn)生脂質(zhì)過氧化損傷和DNA損傷[12]，還會(huì)導(dǎo)致無脊椎動(dòng)物和脊椎動(dòng)物染色體斷裂，產(chǎn)生遺傳毒性[13-14]。同時(shí)，李鵬鵬[15]通過研究表明，50%的醚菌酯水分散粒劑和50%嘧菌酯水分散粒劑對(duì)斑馬魚均表現(xiàn)為中等毒性。此外，肟菌酯和烯肟菌酯同樣會(huì)對(duì)水生生物產(chǎn)生影響。Shen等[16]的研究表明，肟菌酯會(huì)影響抗氧化酶的活性，使小球藻的光合作用紊亂，并破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。Junges等[17]通過實(shí)驗(yàn)研究魚和蝌蚪的相互作用發(fā)現(xiàn)，亞致死濃度的肟菌酯可以改變被捕食者行為，間接改變被捕食者與捕食者之間的相互作用。捕食者與被捕食者之間的關(guān)系作為對(duì)毒物暴露的可衡量反應(yīng)提供了污染物如何改變捕食者與被捕食者之前相互作用的生物視角。楊紅蓮等[18]也通過研究表明，烯肟菌胺對(duì)斑馬魚有明顯的毒性作用，造成斑馬魚胚胎發(fā)育遲緩，胚胎孵化率和存活率明顯降低，同時(shí)還出現(xiàn)了卵黃膜外凸、仔魚心包水腫和尾巴彎曲等畸形。生態(tài)毒性效應(yīng)研究結(jié)果表明該類殺菌劑對(duì)水生生物有高生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)。因此，綜合評(píng)價(jià)甲氧基丙烯酸酯類農(nóng)藥對(duì)魚類的安全性對(duì)于規(guī)避農(nóng)藥使用的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。

本文采用半靜態(tài)法研究了95%嘧菌酯原藥、50%嘧菌酯水分散粒劑、250 g·L-1嘧菌酯懸浮劑、95%醚菌酯原藥、50%醚菌酯水分散粒劑、95%吡唑醚菌酯原藥、15%吡唑醚菌酯懸浮劑、250 g·L-1吡唑醚菌酯乳油、98%啶氧菌酯原藥、22.5%啶氧菌酯懸浮劑等10種試劑對(duì)斑馬魚的急性毒性，通過研究不同劑型與原藥對(duì)斑馬魚的毒性，為評(píng)價(jià)此類殺菌劑對(duì)水生生物的影響提供基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)，為指導(dǎo)在實(shí)際生產(chǎn)中綠色環(huán)保劑型的研發(fā)及不同劑型在不同環(huán)境中的合理應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法(Materials and methods)

1.1 材料

1.1.1 受試生物及實(shí)驗(yàn)用水

實(shí)驗(yàn)所用斑馬魚(Brachydanio rerio)購(gòu)于北京仁和水族養(yǎng)殖中心，魚齡3～5個(gè)月，體長(zhǎng)(2.51±0.5) cm，體重(0.305±0.1) g。試驗(yàn)前在實(shí)驗(yàn)室條件下馴養(yǎng)7 d以上，死亡率保持在5‰以下，挑選健康無病個(gè)體進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。每天光照12 h，馴養(yǎng)期間每天喂食1～2次市售成品魚餌料，并及時(shí)清除食物殘?jiān)凹S便。實(shí)驗(yàn)前24 h停止喂食，實(shí)驗(yàn)期間不喂食。

實(shí)驗(yàn)用水為經(jīng)24 h除氯后的自來水，pH值為7.5～8.5，水質(zhì)硬度在250～300 mg·L-1之間(以CaCO3計(jì))，溶氧量保持在5.8 mg·L-1以上，實(shí)驗(yàn)溫度在(23±1) ℃。

1.1.2 供試藥品

供試藥品如表1所示。

1.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器

SG68多參數(shù)測(cè)試儀(梅特勒-托利多儀器有限公司)、YD300便攜式水質(zhì)硬度儀(上海三信儀表廠)、AnKeTDL-5-A離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠)、N-EVAP型氮吹儀(美國(guó)Organomation公司)、Agilent7890A(ECD)氣相色譜儀(美國(guó)安捷倫公司)、超高效液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(ACQUITY TQD)(美國(guó)Waters公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 參比實(shí)驗(yàn)

以斑馬魚為生物試材，進(jìn)行分析純的重鉻酸鉀參比實(shí)驗(yàn)，參比物質(zhì)重鉻酸鉀對(duì)斑馬魚24 h的LC50應(yīng)處于200～400 a.i.mg·L-1之間。

1.2.2 斑馬魚急性毒性實(shí)驗(yàn)

采用OECD(TG 203)實(shí)驗(yàn)方法中的半靜態(tài)法，在農(nóng)業(yè)部認(rèn)證的國(guó)內(nèi)GLP實(shí)驗(yàn)室(中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物保護(hù)研究所農(nóng)藥環(huán)境評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。首先進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法，設(shè)置若干組間距較大的濃度，每組處理10尾馴養(yǎng)好的斑馬魚，不設(shè)重復(fù)，觀察并記錄96 h斑馬魚的中毒癥狀及試驗(yàn)結(jié)果。

根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，正式實(shí)驗(yàn)設(shè)置6個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度梯度設(shè)置3個(gè)平行(表2)，同時(shí)設(shè)置空白對(duì)照組(實(shí)驗(yàn)用水均為曝氣24 h自來水)及溶劑對(duì)照組(丙酮，用量小于0.05 mL·L-1)，取10尾馴養(yǎng)好的斑馬魚于裝有5 L曝氣水的玻璃缸中。實(shí)驗(yàn)期間不喂食，及時(shí)清除死亡斑馬魚，分別于24、48、72、96 h觀察并記錄斑馬魚死亡數(shù)及中毒癥狀。

1.2.3 供試藥劑含量測(cè)定

1.2.3.1 樣品提取與凈化

嘧菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯試液樣品的提取與凈化：分別吸取5 mL不同處理組中的試液于10 mL離心管中，加入5 mL乙腈，震蕩30 s，后加入2 g NaCl和3 g MgSO4，震蕩1 min，后4 000 rmin-1離心5 min，取1 mL上層液體過0.22 μm有機(jī)濾膜于棕色進(jìn)樣瓶中，待測(cè)。

醚菌酯試液樣品的提取與凈化：分別吸取5 mL不同處理組中的試液于10 mL離心管中，加入5 mL乙腈，震蕩30 s，后加入2 g NaCl和3 g MgSO4，再震蕩1 min，后4 000 rmin-1離心5 min，吸取2 mL上層溶液于10 mL塑料離心管中，后用氮吹儀吹干，冷卻后加入2 mL丙酮，吸取1 mL過0.22 μm有機(jī)濾膜于棕色進(jìn)樣瓶中，待測(cè)。

表1 供試藥品信息Table 1 The information of test pesticides

1.2.3.2 分析條件

嘧菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯的分析條件：3種樣品采用超高效液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用(UPLC-MSMS)法檢測(cè)，ACQUITYUPLC?BEHC181.7 μm色譜柱，采用梯度洗脫，柱溫30 ℃，進(jìn)樣體積3 μL。質(zhì)譜采用ESI(電噴霧離子源)正源多重反應(yīng)檢測(cè)(MRM)模式，離子源溫度150 ℃，脫溶劑溫度350 ℃，脫溶劑氣流量600 L·h-1，錐孔氣流量50 L·h-1；此條件下，嘧菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯的保留時(shí)間分別約為2.1 min、2.24 min和2.32 min。

醚菌酯分析條件：采用氣相色譜(GC)法分析，毛細(xì)管色譜柱為HP-5(30 m×0.32 mm×0.5 μm)；升溫程序?yàn)?0 ℃保持1 min，然后以20 ℃·min-1升溫至200 ℃，保持3 min，最后以10 ℃·min-1升溫至250 ℃，保持5 min；檢測(cè)器為微池電子捕獲檢測(cè)器(μECD)，氫氣75 mL·min-1，空氣100 mL·min-1，檢測(cè)器溫度300 ℃；進(jìn)樣口溫度為250 ℃；進(jìn)樣量為1.00 μL；載氣為氮?dú)猓兌取?9.99%，流速為30 mL·min-1；醚菌酯的保留時(shí)間約為14.86 min。

1.2.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線和添加回收

以乙腈為溶劑，采用梯度稀釋，配成各供試藥劑的標(biāo)準(zhǔn)工作液，嘧菌酯溶液濃度為2.4、0.6、0.15、0.05、0.005 mg·L-1，啶氧菌酯溶液濃度為2.4、0.48、0.06、0.02、0.002 mg·L-1，醚菌酯溶液濃度為2.15、0.86、0.43、0.1、0.05 mg·L-1，吡唑醚菌酯溶液濃度為0.6、0.2、0.05、0.01、0.001 mg·L-1，采用以上各試劑的分析條件檢測(cè)。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程分別為嘧菌酯y=58526x+1656.3(R2=0.9995)，啶氧菌酯y=13.9x+538.0(R2=0.9980)，醚菌酯y=5529.7x-127(R2=0.9998)，吡唑醚菌酯y=86580x+1580.9(R2=0.9901)。

將不同濃度的各試劑的標(biāo)準(zhǔn)溶液分別添加至曝氣自來水中，進(jìn)行添加回收率實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明(表3)，嘧菌酯的添加回收率為105%～111%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為0.925%～6.39%；啶氧菌酯的添加回收率為85%～112%，RSD為0.570%～6.58%；醚菌酯的添加回收率為88.5%～108%，RSD為0.486%～2.09%；吡唑醚菌酯的添加回收率為90.6%～104%，RSD為1.11%～6.52%。

1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果處理

實(shí)驗(yàn)結(jié)果數(shù)據(jù)用DPS統(tǒng)計(jì)軟件處理，計(jì)算4種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑對(duì)斑馬魚24、48、72及96 h的LC50和95%置信限。依據(jù)《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》[19](GB/T 31270.12—2014)規(guī)定的化學(xué)農(nóng)藥對(duì)魚類急性毒性的評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)：LC50> 10 mg·L-1，低毒；1.0 mg·L-1≤ LC50≤10 mg·L-1，中毒；0.1 mg·L-1≤LC50≤1.0 mg·L-1，高毒；LC50≤0.1 mg·L-1，劇毒。

2 結(jié)果與分析(Results and analysis)

2.1 參比實(shí)驗(yàn)

為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的有效性，以斑馬魚為生物試材進(jìn)行分析純的重鉻酸鉀實(shí)驗(yàn)，測(cè)得LC50(24 h)為265.7 mg·L-1。因此，斑馬魚參比實(shí)驗(yàn)結(jié)果在標(biāo)準(zhǔn)要求范圍內(nèi)，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠。

2.2 實(shí)測(cè)濃度與標(biāo)示濃度的對(duì)比

由表2可知，除95%醚菌酯原藥最低濃度的實(shí)測(cè)值高于理論值外，其余均低于理論值，這是由于農(nóng)藥在加入水中時(shí)，一部分農(nóng)藥會(huì)擴(kuò)散入大氣中[20]，進(jìn)入水體的部分農(nóng)藥會(huì)因?yàn)殛?yáng)光的照射而發(fā)生光解，也會(huì)受水體的pH、溫度和離子強(qiáng)度等因素的影響發(fā)生不同程度的水解[21]，此外水體中的農(nóng)藥會(huì)通過沉淀、吸附和解吸附及生物體內(nèi)水解酶的作用而發(fā)生生物降解，因此水中農(nóng)藥的實(shí)際含量低于理論值[22]。

2.3 4種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑的不同劑型對(duì)斑馬魚的急性毒性

2.3.1 嘧菌酯原藥及其制劑對(duì)斑馬魚的急性毒性

由表4可知，95%嘧菌酯原藥、50%嘧菌酯水分散粒劑、250 g·L-1嘧菌酯懸浮劑對(duì)斑馬魚的LC50(96 h)值和95%置信限分別為1.09(1.03～1.16)、1.21(1.07～1.39)和0.539(0.519～0.572) mg·L-1，50%嘧菌酯水分散粒劑的LC50(96 h)值是95%嘧菌酯原藥LC50(96 h)值的1.11倍，95%嘧菌酯原藥和50%嘧菌酯水分散粒劑的LC50(96 h)值分別是250 g·L-1嘧菌酯懸浮劑LC50(96 h)值的2.02倍和2.24倍。根據(jù)LC50(96 h)值的大小劃分等級(jí)，250 g·L-1嘧菌酯懸浮劑對(duì)斑馬魚的毒性為高毒，95%嘧菌酯原藥、50%嘧菌酯水分散粒劑對(duì)斑馬魚的毒性為中毒。3種試劑對(duì)斑馬魚96 h毒性大小依次為：250 g·L-1的嘧菌酯懸浮劑>95%嘧菌酯原藥>50%嘧菌酯水分散粒劑。

2.3.2 啶氧菌酯原藥及其制劑對(duì)斑馬魚的急性毒性

由表5可知，98%啶氧菌酯原藥和22.5%啶氧菌酯懸浮劑對(duì)斑馬魚的LC50(96 h)值和95%置信限分別為0.0974(0.0913～0.108)和0.0972(0.0929～0.106) mg·L-1，22.5%啶氧菌酯懸浮劑的LC50(96 h)略低于98%啶氧菌酯原藥。根據(jù)LC50(96 h)值的大小劃分等級(jí)，98%啶氧菌酯原藥和22.5%啶氧菌酯懸浮劑對(duì)斑馬魚的毒性均為劇毒。

2.3.3 醚菌酯原藥及其制劑對(duì)斑馬魚的急性毒性

由表6可知，95%醚菌酯原藥和50%醚菌酯水分散粒劑對(duì)斑馬魚的LC50(96 h)值和95%置信限分別為0.468(0.445～0.523)和0.702(0.658～0.754) mg·L-1，50%醚菌酯水分散粒劑的LC50(96 h)值是95%醚菌酯原藥LC50(96 h)值的1.50倍，但根據(jù)LC50(96 h)值的大小劃分等級(jí)，95%醚菌酯原藥和50%醚菌酯水分散粒劑對(duì)斑馬魚的毒性均為高毒。2種試劑對(duì)斑馬魚的96 h毒性大小依次為：95%醚菌酯原藥>50%醚菌酯水分散粒劑。

2.3.4 吡唑醚菌酯原藥及其制劑對(duì)斑馬魚的急性毒性

由表7可知，95%吡唑醚菌酯原藥、15%吡唑醚菌酯懸浮劑和15%吡唑醚菌酯乳油對(duì)斑馬魚的LC50(96 h)值和95%置信限分別為0.0613(0.0565～0.0657)、0.0549(0.0508～0.0582)和0.0487(0.0446～0.0511) mg·L-1，95%吡唑醚菌酯原藥的LC50(96 h)值分別是15%吡唑醚菌酯懸浮劑和15%吡唑醚菌酯乳油LC50(96 h)值的1.12倍和1.26倍，而15%吡唑醚菌酯懸浮劑的LC50(96 h)值是15%吡唑醚菌酯乳油LC50(96 h)值的1.13倍。根據(jù)LC50(96 h)值的大小劃分等級(jí)，95%吡唑醚菌酯原藥、15%吡唑醚菌酯懸浮劑和15%吡唑醚菌酯乳油對(duì)斑馬魚的毒性均為劇毒。3種試劑對(duì)斑馬魚的96 h毒性大小依次為：15%吡唑醚菌酯乳油>15%吡唑醚菌酯懸浮劑>95%吡唑醚菌酯原藥。

表2 甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑對(duì)斑馬魚急性毒性實(shí)驗(yàn)的暴露濃度Table 2 Experimental concentration of the studied strobilurin fungicides in acute toxicity test on zebrafish

表3 嘧菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯、醚菌酯在曝氣自來水中的平均添加回收率(mean±SD, n=5)Table 3 Average recoveries of azoxystrobin,picoxystrobin, pyraclostrobin and kresoxim-methyl in aerated tap-water (mean±SD, n=5)

2.3 斑馬魚的中毒癥狀

2.3.1 4種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑對(duì)斑馬魚染毒后的相同癥狀

染毒開始后，斑馬魚先靜止在水底，之后開始出現(xiàn)劇烈不規(guī)律游動(dòng)，有頂水現(xiàn)象，呼吸速率隨染毒時(shí)間的延長(zhǎng)而先加快后減慢，呼吸幅度由小變大，體色隨染毒時(shí)間加長(zhǎng)而逐漸加深，身體逐漸失去平衡，上下翻轉(zhuǎn)掙扎游動(dòng)，死亡時(shí)魚肚上翻，魚肚發(fā)白。實(shí)驗(yàn)過程中，染毒劑量越高，斑馬魚中毒癥狀出現(xiàn)越早，表現(xiàn)越明顯，隨劑量的增高，染毒時(shí)間的延長(zhǎng)，斑馬魚的死亡率越高，存在明顯的劑量效應(yīng)。

2.3.2 4種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑對(duì)斑馬魚染毒后的不同癥狀

嘧菌酯染毒后，斑馬魚魚鰓有淤血，而醚菌酯、啶氧菌酯、吡唑醚菌酯處理后的斑馬魚則是胸鰭根部有淤血。斑馬魚死亡后，嘧菌酯和醚菌酯處理的斑馬魚魚體沉入水底，而啶氧菌酯和吡唑醚菌酯處理的斑馬魚則浮于水面。

表4 嘧菌酯對(duì)斑馬魚的急性毒性Table 4 Acute toxicity of azoxystrobin to zebrafish

表5 啶氧菌酯對(duì)斑馬魚的急性毒性Table 5 Acute toxicity of picoxystrobin to zebrafish

表6 醚菌酯對(duì)斑馬魚的急性毒性Table 6 Acute toxicity of kresoxim-methyl to zebrafish

表7 吡唑醚菌酯對(duì)斑馬魚的急性毒性Table 7 Acute toxicity of pyraclostrobin to zebrafish

3 討論(Discussion)

研究結(jié)果表明，嘧菌酯原藥及其2種制劑對(duì)斑馬魚具有很高的毒性風(fēng)險(xiǎn)，其中嘧菌酯懸浮劑比嘧菌酯原藥的毒性高，而嘧菌酯水分散粒劑則低于原藥的毒性，說明嘧菌酯的毒性會(huì)受制劑劑型的影響。對(duì)本研究與張國(guó)福等[23]的研究結(jié)果綜合分析表明，嘧菌酯隨水質(zhì)硬度的降低，有LC50值逐漸減小，毒性增強(qiáng)的趨勢(shì)，雖然結(jié)果略有差異，但其毒性非常接近高毒，說明嘧菌酯對(duì)斑馬魚存在較高毒性風(fēng)險(xiǎn)。啶氧菌酯原藥LC50值與劉小波等[24]的研究結(jié)果略有差異，但都表明啶氧菌酯原藥對(duì)斑馬魚具有很高的毒性風(fēng)險(xiǎn)。啶氧菌酯懸浮劑的毒性為劇毒，對(duì)斑馬魚同樣存在很高的毒性風(fēng)險(xiǎn)，目前還未見到對(duì)其毒性的相關(guān)報(bào)道。吡唑醚菌酯原藥及其制劑的LC50值很接近，對(duì)斑馬魚毒性均為劇毒，說明吡唑醚菌酯對(duì)斑馬魚存在很高的毒性風(fēng)險(xiǎn)[25]。醚菌酯及其制劑的毒性均為高毒，其中50%醚菌酯水分散粒劑的LC50值雖然與李鵬鵬[15]實(shí)驗(yàn)結(jié)果略有差異，但是毒性等級(jí)劃分一致，說明醚菌酯對(duì)斑馬魚存在很高的毒性風(fēng)險(xiǎn)。

此外，由于不同劑型中的成分復(fù)雜，即使是同種劑型，不同廠家的產(chǎn)品的毒性也無法保持一致，因此各種劑型的毒性評(píng)價(jià)非常困難。綜合分析本研究中的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，水分散粒劑的LC50值都高于原藥，而懸浮劑的LC50值則低于原藥，雖然懸浮劑和水分散粒劑均能使藥劑均勻分散并懸浮于水中，但水分散粒劑在水中的懸浮率低于懸浮劑[26]，更容易沉入水底，因而其毒性比懸浮劑低。本研究中的乳油劑型毒性均高于其他劑型，可能是因?yàn)槠淙橛蜕a(chǎn)中需要大量的溶劑，溶劑的主要品種有苯、甲苯、二甲苯、甲醇、二甲基甲酰胺等，會(huì)導(dǎo)致生物慢性中毒，造成嚴(yán)重的環(huán)境污染，而且損害人體健康[27-28]。此外本研究中的結(jié)果顯示，原藥毒性越高，其不同制劑的毒性受劑型的影響越小，反之亦成立。3種劑型的毒性由高到低依次為乳油、懸浮劑、水分散粒劑，且均對(duì)水生生物的毒性很高，因此亟需開發(fā)高效低毒、綠色環(huán)保的新劑型[29]。

綜合以上研究，這4種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑對(duì)斑馬魚均有較高風(fēng)險(xiǎn)，因此可能會(huì)對(duì)其他水生生物存在潛在的風(fēng)險(xiǎn)，農(nóng)藥進(jìn)入水體生態(tài)環(huán)境后，直接影響水生生物的生活環(huán)境[30]，因此在實(shí)際生產(chǎn)中合理規(guī)范地使用此類藥劑，在達(dá)到預(yù)期效果的同時(shí)注意保護(hù)環(huán)境。此外，此類殺菌劑對(duì)斑馬魚的致毒機(jī)理尚不明確，還需進(jìn)一步研究。

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Acute Toxicity of Different Formulation of Four Strobilurin Fungicides to the Zebrafish (Brachydoniorerio)

Jia Wei, Jiang Hongyun*, Zhang Lan, Zhang Yanning, Mao Liangang

Institute of Plant Protection, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100193, China

Received 5 March 2016 accepted 15 May 2016

Acute toxicity of different formulation of four strobilurin fungicides to zebrafish (Brachydonio rerio) was detected with the semi-static method. Based on measured concentrations, results showed that 250 g·L-1azoxystrobin suspension concentrate (SC) is very toxic to zebrafish with an LC50(96 h) value of 0.539 mg·L-1. In contrast, 95% azoxystrobin technical material (TC) and 50% azoxystrobin water dispersible granule (WG) were moderately toxic to zebrafish with LC50(96 h) values of 1.09 and 1.21 mg·L-1, respectively. Both 98% picoxystrobin TC and 22.5% picoxystrobin SC were extremely toxic to zebrafish with LC50(96 h) values of 0.0974 and 0.0972 mg·L-1. All test fungicides pyraclostrobin were also extremely toxic to zebrafish with the relative toxicity (LC50) in decreasing order as follows: 95% pyraclostrobin TC (0.0613 mg·L-1)> 15% pyraclostrobin SC (0.0549 mg·L-1)>250 g·L-1pyraclostrobin emulsifiable concentrates (EC) (0.0487 mg·L-1). 95% kresoxim-methyl TC and 50% kresoxim-methyl WG were very toxic to zebrafish, and their LC50(96 h) values were 0.468 and 0.702 mg·L-1, respectively. These results suggested that all tested strobilurin fungicides have the potential risk to zebrafish and the other aquatic organisms.

strobilurin fungicides; zebrafish; acute toxicity; pesticide formation; toxic symptom

國(guó)家自然科學(xué)基金(31272079，31171967)

賈偉(1990-)，男，山東泰安人，碩士研究生，研究方向?yàn)榄h(huán)境毒理研究，E-mail: weijia0991@126.com

*通訊作者(Corresponding author)， E-mail: ptnpc@vip.163.com

10.7524/AJE.1673-5897.20160305001

2016-03-05 錄用日期：2016-05-15

1673-5897(2016)6-242-10

X171.5

A

蔣紅云(1967—)，女，農(nóng)學(xué)博士，研究員，主要研究方向農(nóng)藥毒理學(xué)，發(fā)表學(xué)術(shù)論文50余篇。

賈偉, 蔣紅云, 張?zhí)m, 等. 4種甲氧基丙烯酸酯類殺菌劑不同劑型對(duì)斑馬魚急性毒性效應(yīng)[J]. 生態(tài)毒理學(xué)報(bào)，2016, 11(6): 242-251

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