姚有娣 程易凡 王丹鳳 章苗芽

【摘要】目的：探討TCT聯(lián)合HPV檢查方法對宮頸癌患者篩查和診斷的臨床效果。方法：選取1560例患者將其分為三組，分別進行HPV、TCT以及TCT+HPV檢查，以陰道鏡病理組織結果為金標準，比較三種檢測方法的靈敏度、特異度和準確度。結果：TCT診斷結果與病理組織學的檢查結果不同，有顯著差異（P<005）；病變級別越高，患者的陽性率就越高，差異有統(tǒng)計學意義（P<005），浸潤癌患者體內(nèi)的高危型HPV-DNA含量最高，差異有統(tǒng)計學意義（P<005）；在446例進行TCT聯(lián)合HPV檢查的患者中，TCT和HPV檢測均為陽性的患者共有234例，TCT和HPV檢測均為陰性的患者共有83例；TCT+HPV檢測對其的靈敏度、特異度和準確度均顯著高于TCT檢測和HPV檢測（P<005）。結論：TCT聯(lián)合HPV檢查方法的靈敏度、特異度和準確度均比其它三種檢測方法高，是目前宮頸癌疾病篩查和診斷最理想的方法，值得在臨床上得到大規(guī)模的推廣和應用。

【關鍵詞】宮頸液基薄層細胞學檢測；人乳頭瘤病毒；宮頸癌；療效評價

【中圖分類號】R7373【文獻標志碼】A

宮頸癌是女性常見三大惡性腫瘤之一，其病死率位居全球婦女癌癥病死率的第2位[1]，可通過密切接觸、間接接觸、醫(yī)源性感染、性傳播途徑和母嬰傳播等多種途徑傳染[2]。近年來，宮頸癌的發(fā)病越來越趨于年輕化，嚴重威脅著廣大女性的生命健康。宮頸癌的發(fā)展是從癌前病變到原位癌、早期浸潤癌、浸潤癌直至最后的宮頸癌這樣一個連續(xù)的過程，在臨床上，宮頸癌的早期診斷，尤其是在癌前病變階段診斷，有助于宮頸癌的早期治療和改善整體的預后效果。因此，尋找宮頸癌早期診斷的依據(jù)和方法在臨床上具有重要的意義。到目前為止，臨床上對宮頸癌的檢測方法常用的有薄層液基細胞學檢查（Thinprep Liquid-based Cytology test， TCT）、人乳頭瘤病毒（human papillomavirus， HPV）檢查等，流行病學和基礎研究已經(jīng)證實感染在宮頸癌的發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮著重要的作用[3]。而實時熒光定量PCR檢測HPV-DNA可快速的檢測出HPV的存在，是目前檢測HPV非常理想的方法。本次研究通過將HPV檢測、TCT檢查以及TCT聯(lián)合HPV檢測這三種宮頸癌檢測方法進行對比，研究TCT聯(lián)合HPV檢測對宮頸癌篩查和診斷的臨床效果，旨在探討宮頸癌篩查的有效方法。

1資料與方法

11一般資料

將2013年9月至2014年8月到我院進行宮頸病變檢查的患者共1560例作為此次的研究對象，所有患者均為已婚或者有兩年以上的性生活史，并未進行子宮切除術，無宮頸手術史，依照病情病征求病人以及家屬的意見，將病人進行單一的TCT檢測、HPV檢測或TCT+HPV檢查組。其中進行TCT檢查中有345例患者，年齡為27～58歲，平均年齡為（397±43）歲；進行HPV檢查的有769例患者，年齡為25～57歲，平均年齡為（408±51）歲；TCT+HPV檢查的有446例患者，年齡為26～59歲，平均年齡為（415±73）歲。三種檢查的患者的一般資料沒有明顯差異（P<005），具有可比性。

12主要儀器與試劑

美國ABI7300熒光定量PCR儀（美國應用生物系統(tǒng)公司，規(guī)格為Prism 7300，生產(chǎn)編號4344490D1），HPV專用采樣器（廣東凱普生物科技有限公司，2013年1月購買），TCT專用采樣器（南京健邦錦源醫(yī)療儀器有限公司，2013年2月購買），陰道內(nèi)窺鏡（深圳市金科威實業(yè)有限公司，生產(chǎn)編號120634890C2），HC2基因雜交捕獲儀（廣東凱普生物科技有限公司，生產(chǎn)編號12065896DL1）；

無菌生理鹽水，高危型人乳頭瘤病毒核酸定量檢測試劑盒（中山大學達安基因股份有限公司，生產(chǎn)日期：20人份/盒，生產(chǎn)日期，2012年2月）等。

13檢測方法

131HPV-DNA檢測使用窺陰器暴露宮頸，拭掉宮頸口的過多分泌物，再將專用的HPV專用采樣器置于宮頸口采集宮頸脫落的細胞，采集完成后將樣本放入專用的標本儲存瓶中，標記后進行隔離保存。使用HC-2基因雜交捕獲儀對所采集到的宮頸細胞標本進行自動檢測，操作方法嚴格按照試劑盒說明書進行。

132TCT檢測 患者在進行檢查的前24h內(nèi)禁性生活，檢查前3天內(nèi)沒有進行陰道用藥或者沖洗，而且檢查在非月經(jīng)期進行。采取HPV-DNA檢測方法相同的樣本采取方法。將采集到的樣本使用TCT制片機處理所采集到的宮頸細胞標本，并制作成薄層細胞圖片，使用95%的酒精將其固定之后，經(jīng)過巴氏染色交由我院檢驗科醫(yī)師進行鏡檢。

133病理組織學檢查對納入研究的所有檢查者進行宮頸組織病理檢查，于檢查后一周非月經(jīng)期進行組織采樣?；颊呷〗厥?，暴露宮頸，先用棉球輕拭去宮頸表面分泌物，觀察宮頸外觀情況，必要時用長鉗將宮頸外口稍擴張，以觀察宮頸管內(nèi)的鱗狀柱狀上皮交界處，注意勿引起出血；可常規(guī)從 3、6、9、12 點及頸管處或可疑病變處取活檢，取下的組織用10%的福爾馬林固定，石蠟包埋、切片、HE染色，在普通光學顯微鏡下觀察結果，并由有經(jīng)驗的病理科醫(yī)師做出初步診斷，最后上級醫(yī)師再次閱片確定病理診斷。

14診斷標準

1.4.1TCT診斷標準細胞學采用伯塞斯達診斷報告的模式。將檢測結果按嚴重程度從輕至重分為正常狀態(tài)無上皮內(nèi)病變（NILM）、意義不明確的不典型鱗狀細胞（ASC-US）、低度鱗狀上皮內(nèi)病變（LSIL）、高度鱗狀上皮病變（HSIL）、鱗狀細胞癌（SCC）、腺上皮細胞不正常為意義不明確的不典型腺細胞（AGUS）。本文中所指細胞學陽性診斷是指 ASCUS及其以上的病變，包括ASCUS/AGUS，ASC-H，LSIL，HISL，SCC及AC。

1.4.2HPV-DNA檢測標準使用標本相對熒光光度值和陽性定標閾值的比值，即PLU/CO來判斷。RLU/CO為l0或者超過10為陽性，即標本檢測到高危型的HPV-DNA序列；RLU/CO低于10則為陰性，即標本中沒有發(fā)現(xiàn)高危型HPV-DNA或者其水平過低可以忽略不計。

1.4.3病理檢查診斷標準病理檢查結果大體分為四級：正常、炎癥、CIN和宮頸鱗癌。其中CIN[4]又可分為三級：Ⅰ級為輕度不典型增生，細胞局限于上皮下1/3；Ⅱ級為中度不典型增生，細胞位于上皮下1/3～2/3層；Ⅲ級為重度不典型增生或原位癌，病變細胞幾乎或全部占據(jù)上皮全層，伴有核分裂相增多，極性消失。利用病理診斷的結果，對TCT、HPV-DNA檢測方法的靈敏度、特異度進行計算。

15統(tǒng)計學方法

本次研究采用SPSS170軟件對實驗數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，計數(shù)資料采用卡方檢驗，設P<005時差異有統(tǒng)計學意義。

2結果

21TCT結果與病理檢查結果對比分析

以陰道鏡檢病理組織學結果作為金標準，在345例進行TCT檢查的患者中共檢查出了212例陽性患者。將TCT診斷結果與病理組織學相對比，發(fā)現(xiàn)兩者的檢查結果不同，有顯著差異（P<005）。見表1。

在769例進行HPV檢查的患者中，有484例患者檢測出HPV陽性。對比宮頸炎癥和不同級別的宮頸病變發(fā)現(xiàn)，病變級別越高，患者的陽性率就越高，差異有統(tǒng)計學意義（P<005）。從RLU/CO中可以看出，浸潤癌最高，說明浸潤癌患者體內(nèi)的高危型HPV-DNA含量最高，差異有統(tǒng)計學意義（P<005）。見表2。

23TCT聯(lián)合HPV-DNA檢查結果與病理檢查結果對比分析

在446例進行TCT聯(lián)合HPV-DNA檢查的患者中，TCT和HPV-DNA檢測均為陽性的患者共有234例，TCT和HPV-DNA檢測均為陰性的患者共有83例，剩余76例患者為TCT陽性HPV-DNA陰性，53例患者為TCT陰性HPV陽性，且出現(xiàn)1例宮頸癌患者。見表3。

表3TCT聯(lián)合HPV-DNA檢查和病理組織結果對比病理檢查炎癥CINⅠCINⅡCINⅢ/原位癌浸潤癌總計TCT（+）HPV（+）946237338234HPV（-）76000076TCT（-）HPV（+）36853153HPV（-）83000083總計2897042369446

24三種檢查方法對宮頸病變檢查效度的對比分析

比較本次研究中所用到的三種檢測方法對宮頸病變檢查的靈敏度、特異度和準確度，發(fā)現(xiàn)：TCT聯(lián)合HPV-DNA檢測對其的靈敏度、特異度和準確度相對于單一的TCT或HPV-DNA檢查均顯著的偏高，差異具有統(tǒng)計學意義（P<005）。見表4。

表4三種檢查方法對宮頸病變檢查效度（%）檢測指標TCTHPV-DNA檢測TCT聯(lián)合HPV-DNA檢測靈敏度734758869特異度725761907準確度794759931

3討論

宮頸癌是在婦女群體中常見的惡性腫瘤[5]，也是目前唯一可以明確病因的癌癥，即HPV的感染是宮頸癌發(fā)生的主要原因。HPV是一種DNA雙鏈病毒，能感染人的外陰、生殖道、肛門、皮膚和口咽部黏膜等，感染情況很常見[6]。雖然大部分婦女的HPV感染周期在8～10個月，之后便會消失，但是仍有15%左右的婦女會發(fā)生持續(xù)感染的情況，這便是宮頸癌發(fā)生的重要原因。實時熒光定量聚合酶鏈式反應（Quantitative Real-time PCR）技術是分子診斷[7]的熱點技術，它將先進的定量PCR與實時PCR技術相結合，為疾病的定量核酸檢測及分子診斷、提供了先進手段，其極高的靈敏度、極寬的檢測范圍，以及精確定量、方便快速、無窗口期等優(yōu)點，實現(xiàn)了PCR核酸檢測[8]、分子診斷的技術飛躍，既適用于HPV的臨床檢測，也可用于對人群進行HPV亞型和HPV的流行病學調(diào)查。

在本次針對利用TCT技術和實時熒光定量PCR技術檢測婦女宮頸癌的研究中，通過研究結果就可以發(fā)現(xiàn)：TCT檢測方法檢測345例患者中共有212例陽性患者，將其與病理組織學結果相對比，發(fā)現(xiàn)病理組織工檢查出了218例陽性患者，TCT方法共漏檢了6例陽性患者，其中炎癥患者3例，CINⅠ患者1例，CINⅢ/原位癌患者1例，浸潤癌患者1例，與病理組織學檢查結果差異有統(tǒng)計學意義（P<005），由此可見TCT檢測方法的檢查結果并不理想。進行HPV-DNA檢查的769例患者中共檢查出了484例陽性患者，炎癥患者的陽性率為5226%，RLU/CO為9438，CINⅠ患者的陽性率為8835%，RLU/CO為63915，CINⅡ患者的陽性率為9020%，RLU/CO為72349，CINⅢ或者原位癌患者的陽性率為9423%，RLU/CO為79481，浸潤癌患者的陽性率為9000%，RLU/CO為98762。由以上結果可以發(fā)現(xiàn)，除了浸潤癌意外，炎癥以及CIN各級病變患者的陽性率隨著病變級別的升高而逐漸增大，對于RLU/CO來說，浸潤癌患者的RLU/CO最高，由于RLU/CO越高患者體內(nèi)的高危型HPV-DNA含量越高，因此浸潤癌患者體內(nèi)的高危型HPV-DNA含量最高。由此可見，患者的病變級別越高，陽性率就越高，且患者體內(nèi)的高危型HPV-DNA含量越高，臨床上可以通過檢測患者體內(nèi)的高危型HPV-DNA含量來確定患者的病變類型和病變級別，以便更好的對患者進行及時而有效的治療。由實驗結果中可以看出，接受TCT聯(lián)合HPV-DNA檢查的446例患者中，TCT和HPV-DNA檢測均為陽性的患者共有234例，TCT和HPV-DNA檢測均為陰性的患者共有83例，剩余76例患者為TCT陽性HPV-DNA陰性，53例患者為TCT陰性HPV-DNA陽性，其中包括了多種不同級別的病變，且出現(xiàn)1例宮頸癌患者，由此可見，使用這種檢測方法更夠?qū)崿F(xiàn)對患者更加準確的檢查，以便患者進行及早的治療。本次研究最后還將HPV-DNA檢測、TCT檢測以及TCT聯(lián)合HPV-DNA檢測這三種方法對于不同病變類型的靈敏度、特異度和準確度進行了比較：對于ASC患者來說，三種檢測方法的靈敏度、特異度和準確度均較高，TCT檢測方法的靈敏度和特異度最低，HPV-DNA檢測方法的準確度最低，而TCT聯(lián)合HPV-DNA檢測方法的靈敏度、特異度和準確度均遠遠高于其它兩種檢查方法（P<005）；對于ISIL患者來說，HPV-DNA檢測方法的靈敏度、特異度和準確度均是最低，其次為TCT檢測方法，而TCT聯(lián)合HPV-DNA檢測方法的靈敏度、特異度和準確度均顯著高于其它兩種檢查方法（P<005）；對于HSIL患者來說，HPV檢測方法的靈敏度、特異度和準確度均是最低，其次為TCT檢測方法，而TCT聯(lián)合HPV-DNA檢測方法的靈敏度、特異度和準確度均顯著高于其它兩種檢查方法（P<005）；對于宮頸癌患者來說，TCT檢查方法的靈敏度和特異度最低，HPV-DNA檢測方法的準確度最低，而TCT聯(lián)合HPV-DNA檢測方法的靈敏度、特異度和準確度依舊均遠遠高于其它兩種檢查方法（P<005）。由以上實驗結果可以知道，TCT聯(lián)合HPV-DNA檢測方法對于宮頸病變的靈敏度、特異度和準確度均顯著高于其單一的使用TCT或HPV-DNA的檢查效果。

綜上所述，使用TCT聯(lián)合HPV-DNA檢查是目前為止宮頸癌篩查和診斷最敏感的方法，其靈敏度、特異度和準確度均顯著高于單獨使用其中一種檢測方法[9]。目前臨床上對于子宮頸病變的篩查和診斷還沒有公認有效的標準方法，TCT檢查和HPV-DNA檢查是最常用的方法[10，11]，近年來不斷有研究發(fā)現(xiàn)這兩者聯(lián)合檢查對于宮頸病變的篩查和診斷均有非常好的效果，而本次研究也證實了這種說法，為臨床上篩查和診斷宮頸疾病提供了可靠的理論依據(jù)。目前TCT聯(lián)合HPV-DNA篩查和診斷宮頸癌患者還沒有在臨床上廣泛應用[12-14]，相信隨著醫(yī)學技術的進步，TCT聯(lián)合HPV-DNA檢測方法會在臨床上實現(xiàn)大規(guī)模的推廣和應用，實現(xiàn)宮頸癌患者的早期診斷[15]，以便及時提供治療，為廣大宮頸癌患者帶來福音。

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（收稿日期：2015-04-09）