田碧霞，徐雄真，鄧華成

(1.貴州省思南縣畜牧發(fā)展中心，貴州思南565100;2.貴州省思南縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州思南565100)

雞毒支原體感染的診斷及防制

田碧霞1，徐雄真2，鄧華成2

(1.貴州省思南縣畜牧發(fā)展中心，貴州思南565100;2.貴州省思南縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，貴州思南565100)

雞毒支原體(Mycoplasma gallisepticum，MG)又稱禽霉形體，主要引起雞呼吸道癥狀為主的慢性呼吸道疾病(Chronic respiratory dis－ease，CRD)，近年來已成為嚴(yán)重危害養(yǎng)雞業(yè)的重要傳染病，給養(yǎng)雞業(yè)帶來嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。現(xiàn)將雞毒支原體感染的診斷方法和防制措施介紹如下。

1 病原特性

支原體是介于細(xì)菌和病毒之間的一種病原微生物，其特點(diǎn)是多形性，無細(xì)胞壁，為自我復(fù)制的最小原核生物，呈細(xì)小球桿狀，長(zhǎng)2.5～0.5 μm，革蘭氏染色陰性，好氧或兼性厭氧。在液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)5～7 d，可以分解葡萄糖產(chǎn)酸，使培養(yǎng)液變黃;在固體培養(yǎng)基上生長(zhǎng)緩慢，培養(yǎng)3～5 d可形成微小的光滑而透明的露珠狀菌落;在馬鮮血瓊脂培養(yǎng)基上能引起完全溶血，能凝集雞和火雞紅細(xì)胞。在電子顯微鏡下形態(tài)不一，有些為圓形，有些呈絲狀。危害雞的支原體主要有雞毒支原體(MG)和滑液囊支原體(MS)，而雞毒支原體對(duì)雞的危害最嚴(yán)重［1］。MG的細(xì)胞漿膜含有200多種多肽，其中與血凝特性有關(guān)的黏附素在感染發(fā)病和免疫應(yīng)答中起關(guān)鍵作用，是重要的毒力因子和抗原［2］。

將MG接種于7日齡雞胚卵黃囊中能生長(zhǎng)繁殖，但只有部分雞胚在接種后5～7 d死亡，雞胚的病理變化為胚體發(fā)育不全，全身水腫，關(guān)節(jié)腫大，尿囊膜、卵黃囊出血。病原對(duì)環(huán)境抵抗力較差，對(duì)熱比較敏感，但在低溫條件下可長(zhǎng)期存活。

2 流行情況及發(fā)病特點(diǎn)

2.1 流行情況雞和火雞對(duì)本病有易感性，4～8周齡的雞和火雞最易感，純種雞比雜種雞更易感。病雞和隱性感染雞是本病的主要傳染源。傳播方式有水平傳播和垂直傳播，病原體可以通過病雞咳嗽、噴嚏的飛沫和塵埃經(jīng)呼吸道傳染，被污染的飲水、飼料、用具也能傳播本病，上呼吸道和眼結(jié)膜是氣溶膠或小霧滴中的MG入侵的主要門戶。垂直傳播可構(gòu)成代代相傳，但種蛋傳播率可變性較大，急性期最高可達(dá)50%，無臨診癥狀期僅為0.5%～5%;在感染的公雞精液中也發(fā)現(xiàn)有病原體存在，因此配種時(shí)也能發(fā)生傳染［3］。

2.2 發(fā)病特點(diǎn)本病在雞群中傳播較為緩慢，但在新發(fā)病的雞群中傳播較快，根據(jù)環(huán)境因素不同，病情嚴(yán)重程度差異很大，如飼養(yǎng)密度大、衛(wèi)生條件差、氣候變化、雞舍通風(fēng)不良、飼料中缺乏維生素以及不同日齡的雞混養(yǎng)等均可加劇該病的嚴(yán)重性和傳染性，并促進(jìn)高死亡率。有多重病原微生物繼發(fā)感染時(shí)，能使本病更加嚴(yán)重，其中主要有傳染性喉氣管炎、支氣管炎、新城疫、嗜血桿菌以及大腸桿菌等。

3 臨床癥狀

本病常呈慢性經(jīng)過，不少病例幾乎不表現(xiàn)為臨床癥狀而不被發(fā)現(xiàn)。但幼齡雞發(fā)病時(shí)臨床癥狀較為典型，表現(xiàn)為漿液或漿液黏液性鼻液，使鼻孔堵塞妨礙呼吸，頻頻搖頭、噴嚏、咳嗽，還見竇炎、結(jié)膜炎和氣囊炎等癥狀。當(dāng)炎癥蔓延至下呼吸道時(shí)，喘氣和咳嗽更為顯著，并伴有呼吸道啰音，病雞食欲不振、生長(zhǎng)緩慢。后期由于鼻腔和眶下竇中蓄積滲出物而引起眼瞼腫脹，有時(shí)可見蓄積物突出眼球外似“金魚眼”，導(dǎo)致失眠。臨床癥狀消失后，發(fā)育受到不同程度的抑制。產(chǎn)蛋雞感染后導(dǎo)致產(chǎn)蛋率下降。

4 病理變化

主要表現(xiàn)在呼吸道，即呼吸道黏膜水腫、充血、肥厚;鼻道、氣管、支氣管和氣囊內(nèi)含有渾濁的粘稠滲出物;隨著病程的發(fā)展，氣囊壁變厚和渾濁，嚴(yán)重者有干酪樣滲出物，眶下竇出現(xiàn)炎癥;出現(xiàn)關(guān)節(jié)癥狀時(shí)，關(guān)節(jié)周圍組織腫脹或水腫，關(guān)節(jié)液增多，開始時(shí)清亮而后混濁，最后呈奶油狀稠度。

5 診斷

5.1 病料采集對(duì)本縣轄區(qū)內(nèi)雞慢性呼吸道疾病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，并無菌操作采集疑為雞毒支原體感染發(fā)病或病死雞的氣囊、支氣管、肺組織等樣品，置于雞毒支原體培養(yǎng)液中保存，送動(dòng)物疫控中心實(shí)驗(yàn)室做雞毒支原體的分離培養(yǎng)及鑒定。

5.2 培養(yǎng)與純化將所采集病料用雞毒支原體培養(yǎng)液清洗后，剪碎組織，按1∶10的比例加入支原體液體培養(yǎng)基，37℃恒溫振蕩培養(yǎng)直到培養(yǎng)基變成黃色。再將變黃的培養(yǎng)物在相同的培養(yǎng)基中連續(xù)傳代3～5代后，取培養(yǎng)物0.2 mL接種于支原體固體培養(yǎng)基中，放進(jìn)鋪有濕紗布的密封燭缸中37℃恒溫培養(yǎng)7～15 d后，顯微鏡下觀察菌落形態(tài)。挑取典型單菌落于2 mL液體培養(yǎng)基中，進(jìn)行傳代培養(yǎng)和鑒定。

5.3 MG的鑒定

5.3.1 檢驗(yàn)L型細(xì)菌:將上述分離純化的菌株接種到不含青霉素和醋酸鉈的FM－4液體培養(yǎng)基中連續(xù)傳代5次，然后將培養(yǎng)物接種到固體培養(yǎng)上，觀察菌落形態(tài)。肉眼觀察可見針尖大小、無色透明、圓潤(rùn)、邊緣光滑的菌落

5.3.2 菌落形態(tài)觀察:將分離純化后的待檢培養(yǎng)液0.2 mL接種于固體培養(yǎng)基中，置于密封燭缸中37℃培養(yǎng)7～10 d后，低倍鏡下觀察菌落形態(tài)，可見菌落為無色透明，多數(shù)呈典型的“荷包蛋”狀。

5.3.3 姬姆薩染色鏡檢:取分離純化后的雞毒支原體培養(yǎng)液5 mL，以3 000 r/min離心8 min，取沉淀物涂片，甲醇固定，用PBS液(pH=6.98)做10倍稀釋的姬姆薩染色液染色40 min。鏡檢，可見菌體呈藍(lán)紫色球狀，也有少量呈細(xì)短桿狀或弧形等形態(tài)。根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查、臨床癥狀和病理變化觀察以及實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，可診斷為雞毒支原體感染。

6 防治措施

6.1 建立無支原體病的種雞群雞毒支原體感染雖然極為普遍，但是利用支原體對(duì)不利環(huán)境、藥物和溫度的脆弱性，可以培育無支原體感染的各代次健康種雞群，杜絕MG經(jīng)蛋傳播給下一代。

6.2 加強(qiáng)飼養(yǎng)管理和環(huán)境控制商品雞群的飼養(yǎng)密度要適宜，防止密度過大造成感染幾率增加，寒冷季節(jié)或小日齡階段要在確保溫度符合要求的前提下，加強(qiáng)通風(fēng)換氣，降低舍內(nèi)灰塵含量，避免呼吸道損傷。同時(shí)選擇適宜消毒劑，做好帶雞消毒及環(huán)境和用具消毒工作。

6.3 藥物治療一些抗生素藥物對(duì)本病有一定的治療效果，但停藥后往往會(huì)復(fù)發(fā)，因此考慮幾種藥物輪替使用效果較為明顯。目前很多實(shí)踐和實(shí)驗(yàn)證明，支原凈、泰樂菌素、壯觀霉素和紅霉素對(duì)本病有較好的治療和預(yù)防效果。

紅霉素按100 mg/kg飲水，連續(xù)飲用3～5 d，拌料可用20～50 mg/kg;泰樂菌素按500～800 mg/kg飲水，拌料按照20～50 mg/kg，連用5 d;同時(shí)用壯觀霉素30 mg/kg劑量進(jìn)行肌注;支原凈按每升水加入250 mg劑量進(jìn)行飲水，連用5～7 d;中藥治療:柴胡、荊芥、半夏、茯苓、貝母、桔梗、杏仁、玄參、赤勺、厚樸、陳皮各30 g，細(xì)辛60 g，按每雞每天每次1～1.5 g，拌料或煎汁飲水，連用5 d［4］

7 小結(jié)

加強(qiáng)飼養(yǎng)管理是防治雞毒支原體病發(fā)生的關(guān)鍵性措施，尤其要解決好保溫和通風(fēng)的矛盾，在保持雞舍適宜溫度的同時(shí)，良好的通風(fēng)是極為重要的。通過良好的通風(fēng)措施來排出舍內(nèi)水氣、氨氣、塵埃等，為雞群提供充足的新鮮空氣，促進(jìn)雞的新陳代謝，保持雞體健康，提高飼料轉(zhuǎn)化率。如果在管理上不能做到合理的通風(fēng)和保暖的協(xié)調(diào)，支原體病的發(fā)生機(jī)率就會(huì)大大提高。一般情況支原體病單獨(dú)發(fā)生不會(huì)引起死亡，但治療不及時(shí)就會(huì)繼發(fā)大腸桿菌等混合感染，當(dāng)發(fā)生2種或2種以上疾病混合感染時(shí)，對(duì)雞群就構(gòu)成了很大的威脅，給生產(chǎn)帶來嚴(yán)重?fù)p失。

［1］王建霞，李紅.PCR技術(shù)在支原體檢測(cè)中的應(yīng)用［J］.中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2005，15(3):186－189.

［2］陳溥炎.家畜傳染病學(xué):第5版［M］.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2007.

［3］Calnek B K(著).高福，蘇敬良(譯).禽病學(xué):第10版［M］.北京:中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，1999.

［4］朱紅英，郭衛(wèi)紅，潘國(guó)慶.中藥治療雞支原體肺炎繼發(fā)大腸桿菌病［J］.中獸醫(yī)醫(yī)藥雜志，2010(2):58.

S858.31

B

1007－1474(2016)05－0044－03

2016－07－15