聶竹蘭，廖秋萍，魏 杰，石長(zhǎng)青，王艷萍

（塔里木大學(xué)高等教育研究室/動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300）

魚(yú)血涂片制作與血細(xì)胞的觀察在《水產(chǎn)動(dòng)物組織胚胎學(xué)》實(shí)踐教學(xué)中的應(yīng)用

聶竹蘭，廖秋萍，魏 杰，石長(zhǎng)青，王艷萍

（塔里木大學(xué)高等教育研究室/動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，新疆 阿拉爾 843300）

在《水產(chǎn)動(dòng)物組織胚胎學(xué)》實(shí)踐教學(xué)中增設(shè)了綜合性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目——魚(yú)血涂片的制作及血細(xì)胞的觀察。學(xué)生參與血涂片的制作，激發(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)興趣，提高了學(xué)生的動(dòng)手能力，在熟悉血涂片制作基本步驟和操作技術(shù)的同時(shí)，充分發(fā)揮了學(xué)生的主觀能動(dòng)性。綜合性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的開(kāi)展，不僅突出了普通實(shí)驗(yàn)課所無(wú)法比擬的優(yōu)越性，為學(xué)生后期專業(yè)課教育、研究生教育奠定了基礎(chǔ)；同時(shí)也為相關(guān)的水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)，尤其是魚(yú)類疾病防治方面，提供了高素質(zhì)人才。

魚(yú)；血涂片；血細(xì)胞；實(shí)踐教學(xué)；水產(chǎn)動(dòng)物組織胚胎學(xué)

魚(yú)血細(xì)胞中白細(xì)胞直接參與了免疫應(yīng)答及其相關(guān)的應(yīng)答過(guò)程，是魚(yú)類機(jī)體重要的免疫細(xì)胞，魚(yú)血細(xì)胞也肩負(fù)著非特異性免疫和特異性免疫的主要機(jī)能，在魚(yú)類疾病防治中發(fā)揮著重要作用［1-2］。另一方面，魚(yú)類血細(xì)胞很敏感，能感知自身生理狀態(tài)變化和外界環(huán)境因子的刺激，通過(guò)檢查其血液學(xué)指標(biāo)，不僅能初步了解魚(yú)類的健康狀況還能掌握其生活水域環(huán)境的質(zhì)量［3-4］。因而有關(guān)血細(xì)胞的研究一直受到學(xué)者的重視。在水產(chǎn)養(yǎng)殖專業(yè)基礎(chǔ)課《水產(chǎn)動(dòng)物組織胚胎學(xué)》中，魚(yú)血涂片的觀察是其基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容之一。實(shí)驗(yàn)教學(xué)過(guò)程中，教師借助魚(yú)血涂片標(biāo)本引導(dǎo)學(xué)生在顯微鏡下辨別紅細(xì)胞、血小板及各類白細(xì)胞的形態(tài)。但因內(nèi)容繁瑣，抽象難懂，學(xué)生學(xué)習(xí)興趣不高，也難以正確理解各類血細(xì)胞的功能。在我國(guó)有水產(chǎn)養(yǎng)殖學(xué)專業(yè)的農(nóng)林院校中開(kāi)設(shè)《水產(chǎn)動(dòng)物組織胚胎學(xué)》實(shí)踐教學(xué)的多見(jiàn)于石蠟切片的制作，而有關(guān)魚(yú)血涂片的制作與血細(xì)胞觀察的并不多見(jiàn)。塔里木大學(xué)水產(chǎn)教研室經(jīng)討論決定在《水產(chǎn)動(dòng)物組織胚胎學(xué)》實(shí)踐教學(xué)中增設(shè)綜合性實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目——魚(yú)血涂片的制作及血細(xì)胞的觀察，旨在提高學(xué)生的研究技能與水平，激發(fā)學(xué)生對(duì)抽象形態(tài)學(xué)知識(shí)點(diǎn)的學(xué)習(xí)興趣，培養(yǎng)學(xué)生的獨(dú)立思考與創(chuàng)新思維能力，以期為社會(huì)提供全面發(fā)展的綜合型新世紀(jì)人才。

1 材料與方法

實(shí)驗(yàn)材料：購(gòu)自阿拉爾市9團(tuán)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)5尾健康無(wú)病的草魚(yú)。

實(shí)驗(yàn)分組：塔里木大學(xué)水產(chǎn)養(yǎng)殖專業(yè)17班，共25人，分為5組，每組5人，每組處理1尾草魚(yú)。

載玻片的清洗：將新的載玻片放入洗衣粉或肥皂水中煮沸20 min；玻片上的污物用熱水洗去；用自來(lái)水反復(fù)沖洗若干次，再用蒸餾水沖洗3遍［5］。最后浸泡在無(wú)水乙醇中保存；實(shí)驗(yàn)前每組領(lǐng)取100片，用眼鏡布擦干無(wú)水乙醇備用。

血液采集：用5 mL無(wú)菌注射器經(jīng)0.1%肝素鈉潤(rùn)洗后，從草魚(yú)的尾靜脈緩慢抽血［6］3～5 mL，舍棄針頭剔除第一滴血。

血涂片制作：用左手手指平握載玻片兩條短邊，用10 μL移液器取5 μL血樣滴于處理好的載玻片右側(cè)約5 cm處；另取一塊邊緣光滑的載玻片作推片，右手持推片，將推片一端置于血滴前方，向后移動(dòng)到接觸血滴，毛細(xì)作用使血液均勻分散在推片與載玻片的接觸處，使載玻片與推片之間的角度約呈18°［7］，向左平穩(wěn)推動(dòng)制成厚薄適宜、分布均勻的粉紅色血膜［8］。 血膜自然晾干后，用常規(guī) Wright′s和 Giemsa 染液 3～5 滴雙重染色［9-10］3～5 min 后，用等量蒸餾水借助洗耳球混勻進(jìn)一步淡染3～5 min。淡染過(guò)程中，染色液干涸前用蒸餾水補(bǔ)充。染色完成后，用蒸餾水沖洗，再在Nikon顯微鏡下觀察，選取血細(xì)胞分布均勻，染色適中的涂片留用，要求每位學(xué)生制作符合要求的血涂片10片，不符合要求的血涂片舍棄。

2 結(jié)果與分析

2.1 血涂片制作結(jié)果與分析 張紹林指出，一張好的血涂片應(yīng)滿足以下幾點(diǎn)要求：厚薄適中；頭體尾明顯；血細(xì)胞均勻分布；載玻片的兩邊及兩端空隙分別為0.3、1.5 cm；血膜邊緣整齊，長(zhǎng)度約為4 cm［11］。制片及染色結(jié)束后，指導(dǎo)教師在多媒體互動(dòng)教室根據(jù)每個(gè)學(xué)生實(shí)際制片情況，先讓學(xué)生在低倍鏡下觀察了解細(xì)胞分布情況及染色效果。再選取血細(xì)胞厚薄適宜，分布均勻的區(qū)域在高倍鏡下觀察各類血細(xì)胞具體的形態(tài)特征［12］。在5組學(xué)生制作的部分涂片中，平均每組有3張涂片非常好，絕大部分的涂片的問(wèn)題為血膜頭體尾不明顯、血膜不連續(xù)、邊緣不齊、涂片中有很多染色沉淀物、血細(xì)胞破裂。出現(xiàn)以上問(wèn)題的原因主要在于制作涂片過(guò)程中學(xué)生手持推片時(shí)手發(fā)抖；推片時(shí)，用力不均；推片邊緣不整齊推片過(guò)程中產(chǎn)生刮痕；染色沉淀物沖洗不徹底。雖然絕大部分涂片或多或少存在不足，但在顯微鏡視野中亦可找到厚薄適宜，分布均勻的區(qū)域，可以用于觀察各類血細(xì)胞的形態(tài)結(jié)構(gòu)。在本次實(shí)踐教學(xué)中，因采用移液器固定了血樣的大小和降低了推片的角度，整體效果較好。

2.2 血細(xì)胞形態(tài)觀察與分析 經(jīng)染色后，顯微鏡下可見(jiàn)魚(yú)血紅細(xì)胞胞質(zhì)為淺紫紅色，胞核為藍(lán)紫色；血栓細(xì)胞比紅細(xì)胞的細(xì)胞核稍大，呈藍(lán)紫色。淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及中性粒細(xì)胞核質(zhì)顏色分明，核為藍(lán)紫色，質(zhì)為淡紫紅色；中性粒細(xì)胞胞質(zhì)中有淡紅色細(xì)小顆粒分布；但在整個(gè)血涂片中，未發(fā)現(xiàn)嗜酸性粒細(xì)胞和嗜堿性粒細(xì)胞。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，只有少數(shù)魚(yú)類外周血涂片中可觀察到嗜堿性粒細(xì)胞與嗜酸性粒細(xì)胞［13］，而大部分魚(yú)類外周血涂片中，較難觀察到嗜酸性粒細(xì)胞，而嗜堿性粒細(xì)胞常觀察不到［14］，這是由于嗜堿性粒細(xì)胞中的顆粒易溶于水所致［15］。

2.3 魚(yú)血涂片實(shí)踐教學(xué)效果與分析 先在多媒體互動(dòng)教室讓學(xué)生觀看實(shí)踐教學(xué)“魚(yú)血涂片的制作及血細(xì)胞的觀察”的PPT，結(jié)合教師的講解；制片前，由教師示范制片操作過(guò)程，并強(qiáng)調(diào)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中的注意事項(xiàng)，再由學(xué)生自己實(shí)踐。在整個(gè)制片過(guò)程中，學(xué)生熱情高漲，尤其是制片完成后，學(xué)生們都希望得到老師的肯定，都很關(guān)注自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。在顯微觀察后，有些學(xué)生不滿意自己制作的血涂片而要求重新制片。第二次制片過(guò)程中，學(xué)生充分結(jié)合理論知識(shí)，開(kāi)動(dòng)腦筋思考問(wèn)題，很容易將各類血細(xì)胞的形態(tài)和功能深深刻在了腦海中［16］。

3 結(jié)論

在《水產(chǎn)動(dòng)物組織胚胎學(xué)》課程實(shí)踐教學(xué)增設(shè)實(shí)踐項(xiàng)目“魚(yú)血涂片的制作與血細(xì)胞觀察”，激發(fā)了學(xué)生的學(xué)習(xí)熱情；學(xué)生在動(dòng)手操作過(guò)程中相互協(xié)作的同時(shí)，學(xué)會(huì)了獨(dú)立思考問(wèn)題；并能結(jié)合理論內(nèi)容充分掌握了各相關(guān)的知識(shí)點(diǎn)；使實(shí)踐教學(xué)的優(yōu)越性遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出普通的實(shí)驗(yàn)教學(xué)，達(dá)到了實(shí)踐教學(xué)的目的。另一方面，該實(shí)踐項(xiàng)目的開(kāi)展，為學(xué)生后期專業(yè)課教育、研究生教育奠定了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)；為水產(chǎn)養(yǎng)殖相關(guān)行業(yè)，尤其是魚(yú)類疾病防治方面，提供了高素質(zhì)人才，值得廣為推廣。

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Application of Fish Blood Smears Preparation and Blood Cells Observation in Practical Teaching of Histology and Embryology of Aquatic Animal

NIE Zhu-lan，LIAO Qiu-ping，WEI Jie，SHI Chang-qing，WANG Yan-ping
（Research Department of Higher Education/College of Animal Science，Tarim University，Alaer 843300，China）

In the practical teaching of Histology and Embryology of Aquatic Animal,a comprehensive experimental project"Fish Blood Smears Preparation and Blood Cells Observation"is newly set.In this project,the undergraduates participate in the process of blood smears preparation,which stimulates the undergraduates′interests in learning and improves their practical ability;the undergraduates understand the basic procedure of blood smear preparation,master the experimental technique,and exert their subjective initiative.The application of the comprehensive experimental project not only exhibits incomparable superiority to that of the common experiment but also lays a solid foundation for later professional class education and postgraduate education.Meanwhile,it also provides plenty of talents with high quality for the relevant aquaculture industry,especially in the field of fish diseases prevention and control.

fish；blood smear；blood cells；practical teaching；Histology and Embryology of Aquatic Animals

G642.0

A文章順序編號(hào)1672-5190（2016）03-0069-02

2016－03－07

項(xiàng)目來(lái)源：塔里木大學(xué)高等教育研究項(xiàng)目（TDGJ1506，TDGJ1106，TDGJ0906）。

聶竹蘭（1979—），女，副教授，博士，主要從事水產(chǎn)動(dòng)物組織胚胎學(xué)、家畜組織學(xué)與胚胎學(xué)的教學(xué)與研究工作。

石長(zhǎng)青（1971—），男，副教授，碩士，主要從事家畜組織學(xué)與胚胎學(xué)的教學(xué)與研究工作。

（責(zé)任編輯：賈淑萍）