徐存寬　薛云才　孫寶勝

泰州市糧油質(zhì)量監(jiān)測所江蘇泰州　225300

高效液相色譜在糧食檢測中的應(yīng)用

徐存寬薛云才孫寶勝

泰州市糧油質(zhì)量監(jiān)測所江蘇泰州225300

隨著生活水平的提高，糧食的食用安全也越來越受到關(guān)注。高效液相色譜法在檢測過程中操作相對簡單，靈敏度較好，在糧油檢測中得到越來越多的應(yīng)用。目前高效液相色譜法在糧食檢測中主要用于黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等真菌毒素的檢測，以及糧食中氨基甲酸酯類、合成擬除蟲菊酯類、有機(jī)磷類農(nóng)藥的檢測。

高效液相色譜糧食真菌毒素農(nóng)藥殘留檢測

隨著生活水平的提高，食品安全問題越來越受到人們的關(guān)注和重視，而糧食安全作為食品安全的重中之重，更受到了高度的重視。高效液相色譜法在檢測的過程中操作相對比較簡單，靈敏度也比較好，不需要大量的樣品支持，在糧油檢測中也得到越來越多的應(yīng)用。目前高效液相色譜法在糧食檢測中主要用于黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等真菌毒素的檢測，以及糧食中農(nóng)藥殘留的檢測。

1　糧食真菌毒素檢測中的應(yīng)用

根據(jù)相關(guān)資料糧食谷物以及飼料中出現(xiàn)真菌毒素的比例高達(dá)25%，真菌毒素除了對畜牧產(chǎn)業(yè)造成顯著的經(jīng)濟(jì)損失外，部分真菌毒素還具有致癌性和致畸胎性，可經(jīng)食物傳至人類危害人類健康。食物中的真菌毒素影響人們的身體健康，并縮短人的平均壽命?，F(xiàn)已查明自然界存在的真菌毒素在200種以上，在糧食中按真菌毒素的重要性及危害主要有：黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等。世界各國對上述真菌毒素的限量標(biāo)準(zhǔn)都有嚴(yán)格的規(guī)定。我國《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中真菌毒素限量》中規(guī)定小麥和小麥粉中黃曲霉毒素B1限量為5 μg/kg、谷物和谷物碾磨加工品赭曲霉毒素A限量標(biāo)準(zhǔn)為5.0 μg/kg、小麥與小麥粉粉中脫氧雪腐鐮刀菌烯醇限量為1000 μg/kg，小麥與小麥粉粉中玉米赤霉烯酮限量標(biāo)準(zhǔn)為60 μg/kg。

糧食中黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等真菌毒素的檢測方法主要有薄層色譜法、酶聯(lián)免疫吸附法、免疫親和柱凈化熒光光度法以及免疫親和柱凈化高效液相色譜法等。薄層色譜法由于操作復(fù)雜，目前應(yīng)用較少。酶聯(lián)免疫吸附法操作較簡單，但測定數(shù)據(jù)準(zhǔn)確度較差，只能進(jìn)行定性以及樣品的初步篩選。免疫親和柱凈化熒光光度法只能測定黃曲霉毒素的總量。免疫親和柱凈化高效液相色譜法，該方法簡便、快速、凈化效果好，準(zhǔn)確性高，各項(xiàng)技術(shù)指標(biāo)均符合真菌毒素檢測的要求，可以滿足對糧谷中黃曲霉毒素、赭曲霉毒素A、玉米赤霉烯酮、脫氧雪腐鐮刀菌烯醇等真菌毒素的限量檢測要求，是現(xiàn)在的主流真菌毒素檢測方法。

高效液相色譜法測定糧食真菌毒素的基本過程是，先用溶液對樣品進(jìn)行提取，并用濾紙進(jìn)行過濾。取部分濾液以一定速率通過免疫親和柱，并用一定量的溶液進(jìn)行清洗。然后用相應(yīng)的溶液將待測成分從免疫親和柱中洗脫出來，從而完成樣品的凈化。將提取后的溶液在高效液相色譜上，以相應(yīng)的條件通過色譜柱進(jìn)行分離，并用相應(yīng)的檢測器進(jìn)行檢測，根據(jù)峰保留時間定性，根據(jù)峰面積外標(biāo)法進(jìn)行定量。

2　糧食農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用

為了防治糧食作物的病蟲害,往往在它們的生長期內(nèi)施用一些農(nóng)藥。這些農(nóng)藥在收獲的糧食上的殘留量就成為人們關(guān)注的問題。尤其是農(nóng)藥殘留對人體健康的危害也是非常明顯的，這一問題也得到了越來越多人的關(guān)注和重視，很多國家對農(nóng)藥殘留的監(jiān)督和研究力度也在不斷的加強(qiáng)，高效液相色譜法在操作上比較便捷，此外檢測的精度較高，所以在農(nóng)藥殘留的研究和檢測中得到了十分廣泛的應(yīng)用。

高效液相色譜的特點(diǎn)是可在室溫下進(jìn)行分析，在對于非揮發(fā)性及熱不穩(wěn)定性農(nóng)藥進(jìn)行檢測時，與氣象色譜法相比能避免樣品在高溫下分解，具有明顯優(yōu)勢。缺點(diǎn)是用于殘留物分析的檢測器還不十分靈敏，這是因?yàn)橹挥猩贁?shù)農(nóng)藥具有天然熒光。目前高效液相色譜技術(shù)分析的農(nóng)藥主要有：氨基甲酸酯類、合成擬除蟲菊酯、有機(jī)磷類、殺菌劑類等。在糧食檢測中主要應(yīng)用于氨基甲酸酯類、合成擬除蟲菊酯類、有機(jī)磷類等農(nóng)藥的檢測。

1）氨基甲酸酯類

氨基甲酸酯類農(nóng)藥主要有呋喃丹、西維因、涕滅威等，具有應(yīng)用范圍廣、藥效高等特點(diǎn)，現(xiàn)在應(yīng)用范圍越來越廣。但這類農(nóng)藥多數(shù)是熱不穩(wěn)定的，因此不適合用氣相色譜檢測。而高效液相色譜柱后衍生化法檢測氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留，靈敏度高，選擇性強(qiáng),重現(xiàn)性好。世界衛(wèi)生組織（WHO）、聯(lián)合國糧農(nóng)組織（FAO）和許多發(fā)達(dá)國家都把此方法作為檢測氨基甲酸酯類殺蟲劑殘留的標(biāo)準(zhǔn)方法。

該方法的原理是氨基甲酸酯類農(nóng)藥在堿性條件下水解產(chǎn)生甲胺，甲胺與衍生化試劑鄰苯二甲醛（OPA）、巰基乙醇反應(yīng)，生成強(qiáng)熒光物質(zhì)，再以熒光檢測器檢測。以高效液相色譜柱后衍生系統(tǒng)、熒光檢測器檢測時，被測成分穩(wěn)定，同時由于液譜的定量環(huán)進(jìn)樣，重現(xiàn)性好。其次，由于熒光檢測器具有對熒光物質(zhì)的選擇性，使得樣本中出峰雜質(zhì)干擾較少，分離度較好，提高方法的靈敏度，保證分析樣品的準(zhǔn)確性。

2）合成擬除蟲菊酯類

合成擬除蟲菊酯類農(nóng)藥主要有：溴氰菊酯（敵殺死）、氯氰菊酯等，是一類模擬天然除蟲菊酯化學(xué)結(jié)構(gòu)合成的農(nóng)藥，具有殺蟲譜廣、高效、低毒、低殘留的優(yōu)點(diǎn)，是目前較理想的農(nóng)藥。高效液相色譜法可對高沸點(diǎn)或熱穩(wěn)定性差相對分子質(zhì)量大及極性的農(nóng)藥進(jìn)行有效測定，較適合擬除蟲菊酌類農(nóng)藥的測定。

合成擬除蟲菊酯都有一個環(huán)丙烷。環(huán)狀結(jié)構(gòu)使其具有幾何和光學(xué)異構(gòu)體同時有順、反異構(gòu)體。其檢測的基本過程是樣品經(jīng)過制備提取，凈化和濃縮等預(yù)處理制備成為樣品測試液以后，采用光化學(xué)衍生器衍生，衍生后具有較強(qiáng)的熒光相應(yīng)，用熒光檢測器進(jìn)行檢測,用液相色譜外標(biāo)法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）測定擬除蟲菊酯類農(nóng)藥的殘留量。

3）有機(jī)磷類農(nóng)藥

有機(jī)磷類農(nóng)藥是我國使用廣泛的農(nóng)藥，大多數(shù)有機(jī)磷農(nóng)藥具有高毒性或中等毒性，如對硫磷、甲拌磷、敵敵畏、樂果、敵百蟲等。目前我國檢測和分析食品中的有機(jī)磷農(nóng)藥殘留的方法一般均采用氣相色譜法。當(dāng)用氣相色譜法檢測物質(zhì)的含量時，在靈敏度方面要優(yōu)于液相色譜法，但當(dāng)檢測部分對熱不穩(wěn)定的農(nóng)藥時，氣相色譜法就遠(yuǎn)遠(yuǎn)不如液相色譜法準(zhǔn)確度高。因?yàn)橐合嗌V法具有對那些熱不穩(wěn)定性物質(zhì)有較好的檢測效果，同時還具有不會浪費(fèi)過多實(shí)驗(yàn)用品和所用時間短的優(yōu)點(diǎn)。

高效液相色譜法檢測有機(jī)磷具有直接、快速、高效、簡便和適用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)，適用于強(qiáng)極性、低揮發(fā)性和熱不穩(wěn)定的有機(jī)磷農(nóng)藥的分析，成為有機(jī)磷農(nóng)藥殘留檢層領(lǐng)域中的重要方法。據(jù)“AOAC”（美國分析化學(xué)家協(xié)會）報道，近半數(shù)的有機(jī)磷農(nóng)藥已建立高效液相色譜法?，F(xiàn)有高效液相色譜法分別測定了食品和水中、谷物及其制品中的有機(jī)磷農(nóng)藥。其檢測的基本過程是樣品經(jīng)過制備提取，凈化等預(yù)處理制備成為樣品測試液以后，用液相色譜外標(biāo)法（標(biāo)準(zhǔn)曲線法）測定相應(yīng)有機(jī)磷農(nóng)藥殘的殘留量。

隨著人們對食品安全問題的日益關(guān)注，國家對糧食中農(nóng)藥殘留、真菌毒素、重金屬殘留的標(biāo)準(zhǔn)也日趨嚴(yán)格，因此建立簡便、快速、高靈敏度的檢測方法就顯得十分必要。隨著高效液相色譜及相關(guān)技術(shù)的發(fā)展，高效液相色譜法必將在糧食檢測分析中得到越來越廣泛的應(yīng)用。

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[2]宣秋江，等.高效液相色譜分離10種有機(jī)磷農(nóng)藥[J].分析實(shí)驗(yàn)室，2008，27（Z1）:273-275

[3]陶傳江，朱光艷.高效液相色譜柱后衍生化法檢測蔬菜中氨基甲酸酯類殺蟲劑農(nóng)藥殘留[J].農(nóng)藥科學(xué)與管理，2001，22（4）:18-19

TS 210.7

C

1674-5280（2016）05-0024-02

2016-05-31

徐存寬（1981—），男，本科，工程師，主要從事糧油檢測工作。