于立偉

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免疫組織化優(yōu)點與質(zhì)量控制

于立偉

【摘要】免疫組織化學(xué)技術(shù)是借助組織化學(xué)方法將抗原抗體反應(yīng)的部位和程度顯示出來，以期達(dá)到對組織或細(xì)胞中的抗原進(jìn)行定性、定位和定量的效果。免疫組化的操作流程較復(fù)雜，其中任何一個環(huán)節(jié)處理不當(dāng)，均可能導(dǎo)致結(jié)果不理想，尤以組織的固定、脫水、包埋等過程對抗原的保存最為關(guān)鍵。

【關(guān)鍵詞】免疫組織化學(xué)技術(shù)；質(zhì)量控制

免疫組織化學(xué)技術(shù)利用待測抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度特異性的這一特性，制備相關(guān)的特異性抗體，再以此抗體去檢測組織或細(xì)胞中有無相應(yīng)的抗原物質(zhì)存在?？贵w的數(shù)量和品種的增加，是免疫組織化學(xué)技術(shù)發(fā)展的標(biāo)志之一。隨著基因工程技術(shù)的發(fā)展，能夠應(yīng)用于免疫組織化學(xué)的抗體迅速增多[1]。正確合理地選擇某種或某組抗體，進(jìn)行免疫組織化學(xué)的診斷和鑒別診斷，是一門需要不斷發(fā)展充實的知識領(lǐng)域。了解和跟蹤新抗體的應(yīng)用價值，在實踐中探索新抗體的新用途非常必要。

1　免疫組織化學(xué)對外科病理診斷的應(yīng)用價值

鑒別腫瘤的良惡性或細(xì)胞、組織學(xué)類型；激素受體及生長因子受體與患者預(yù)后判斷；評價腫瘤細(xì)胞增生的程度；發(fā)現(xiàn)微小轉(zhuǎn)移灶；指導(dǎo)腫瘤患者治療方案的制定；病原微生物的檢測；研究腫瘤發(fā)生、發(fā)展的機制。

2　免疫組化的優(yōu)點

2.1 高度的特異性

抗原抗體反應(yīng)是特異性很強的反應(yīng)，免疫組化所用的抗體必須是特異性強的多價或單價單體，并具有高度的識別能力，在抗原識別上可達(dá)到單個氨基酸的水平，而其它組織化學(xué)方法難以相比。

2.2 高度的敏感性

免疫組化采用各種有效方法最大限度保存組織、細(xì)胞內(nèi)待檢物質(zhì)的抗原性，或采用各種增敏方法，使用高度敏感的和高親和力的抗體，以保證檢出的細(xì)胞內(nèi)超微量的抗原成分[2]。用顯微鏡或電子顯微鏡觀察結(jié)果，因此，免疫組化是在細(xì)胞、分子水平或基因水平的檢測技術(shù)。

2.3 方法步驟統(tǒng)一

若熟練掌握一種免疫組化技術(shù)操作方法步驟，則也基本上掌握了其它的方法和步驟，也可稱之一通百通。

2.4 形態(tài)、機能和代謝密切結(jié)合

免疫組化是一種綜合定性、定位和定量密切結(jié)合，形態(tài)、機能和代謝密切結(jié)合為一體的檢測技術(shù)[3]。在細(xì)胞、染色體或亞細(xì)胞水平原位檢測抗原分子，其它任何生物技術(shù)難以達(dá)到和代替，它能在細(xì)胞、基因和分子水平同時原位顯示基因及其表達(dá)產(chǎn)物，這一檢測系統(tǒng)為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和各個領(lǐng)域分子水平的研究與診斷開拓了廣闊的前景。

3　病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)質(zhì)控規(guī)范

3.1 組織固定和處理

根據(jù)免疫組織化學(xué)的基本原理，組織越是新鮮，其抗原成分保存得越完整，免疫組織化學(xué)反應(yīng)的效果就越能反映其真實的情況。因此，組織的固定和固定劑的選用非常重要[1]。要求開展免疫組織化學(xué)技術(shù)的病理科使用10%中性（緩沖）福爾馬林，固定手術(shù)和活檢組織標(biāo)本。一般主張，組織離體后0.5 h內(nèi)立即進(jìn)行充分的固定，固定劑選用10%中性（緩沖）福爾馬林，固定時間在12～24 h為優(yōu)。淋巴造血組織亦可選擇更佳的B 5液固定劑。組織常規(guī)包埋選擇無大片出血和壞死的組織塊切片。切片要平整，厚薄均勻，無明顯皺折和刀痕[4]。石蠟切片3～5 μm，冷凍切片4～6 μm。冷凍切片完成后置冷丙酮（4℃）中固定5～10 min。使用的玻片應(yīng)涂被多聚賴氨酸和樹脂粘附劑。

3.2 抗體的保存和稀釋

短期不能用完的抗體應(yīng)根據(jù)用量分裝在高溫消毒過的0.5 ml 或1.5 ml的塑料離心管中.每支含量20～100 μl不等，可根據(jù)每次實驗用量斟定。分裝的抗體應(yīng)保存在-20 ～ -40℃的低溫冰箱中，可保存數(shù)年有效。小量分裝的抗體盡量一次用光，若不能用光可暫保存在4℃環(huán)境中，避免反復(fù)凍融而使抗體效價降低?？乖涂贵w的結(jié)合除了它們之間的特異性之外，還與兩者之間的分子比例有密切的關(guān)系。因此，選擇適當(dāng)?shù)目贵w稀釋度，不僅能節(jié)省抗體，而且還可以獲得滿意的染色效果。絕大多數(shù)抗體都有一個推薦的抗體稀釋度，按照推薦的稀釋度進(jìn)行操作是可行的。對于即用型抗體，4℃保存可達(dá)1年。在使用過程中要注意抗體染色結(jié)果的變化，避免使用失效的抗體。無論是使用已稀釋（即用型）還是未稀釋的抗體，都要考慮到隨后使用的二抗和顯色技術(shù)，對抗體稀釋度的影響。

3.3 抗體的選擇和合理使用

選擇抗體時應(yīng)結(jié)合文獻(xiàn)報告和抗體所針對的抗原，決定簇是蛋白質(zhì)的羧基端還是氨基端，力求做到選用的抗體穩(wěn)定、有效和權(quán)威[5]。同時，每年都有新的抗體不斷地補充或替代原有的抗體，因此要求病理科結(jié)合本單位外檢標(biāo)本種類的特點，選擇一批常用的病理診斷需要的抗體，作為必備抗體。除了少數(shù)腫瘤表達(dá)較特異的抗原以外，如甲狀腺癌表達(dá)甲狀腺球蛋白，多數(shù)腫瘤都有不同的抗原表達(dá)譜。在腫瘤的診斷治療和預(yù)后分析判斷中，合理選擇多種抗體進(jìn)行聯(lián)合標(biāo)記，有助于提高免疫組織化學(xué)技術(shù)在腫瘤病理學(xué)中的應(yīng)用價值。

3.4 實驗室條件的穩(wěn)定

開展免疫組化技術(shù)應(yīng)盡量做到人員、試劑配制及采用的技術(shù)方法固定。如果操作人員不固定，經(jīng)常變更，配制試劑的方法和采用的技術(shù)會有所變動，會不同程度地影響免疫組織化學(xué)染色的質(zhì)量和判斷[6]。因此，穩(wěn)定實驗室條件是提高病理科免疫組織化學(xué)技術(shù)水平的重要環(huán)節(jié)。

3.5 染色結(jié)果的判斷

免疫組化結(jié)果的判斷并不是簡單的陽性和陰性，例如組織處理不佳、試劑質(zhì)量不佳等均可致背景過高，造成假陽性；組織固定不佳或壞死，也可出現(xiàn)假陽性或假陰性。定位不當(dāng)?shù)年栃砸嗖荒芤暈殛栃员磉_(dá)，淋巴結(jié)的表達(dá)更應(yīng)結(jié)合其定位細(xì)胞及分布等各種因素進(jìn)行綜合分析。

綜上所述，能否正確判斷免疫組化的結(jié)果，反映了病理科醫(yī)技人員對免疫組織化學(xué)技術(shù)的熟練程度和應(yīng)用能力，并需在實踐過程中不斷地總結(jié)、修正、提高。

參考文獻(xiàn)

[1]郭秀芳.免疫組化染色質(zhì)量控制在乳腺組織切片中的應(yīng)用[J].河北醫(yī)藥，2010，32（5）：596-597.

[2]王文勇，黃曉峰，王映梅，等.免疫組化技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化的探討[J].細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志，2011，27（8）：927-929.

[3]張宏桃.免疫組化切片質(zhì)量控制的幾點體會[J].中國社區(qū)醫(yī)師：醫(yī)學(xué)專業(yè)，2012，14（7）：271.

[4]沈琴.免疫組化染色質(zhì)量控制在組織切片中的應(yīng)用[J].中國基層醫(yī)藥，2012，19（5）：695-696.

[5]趙麗平，楊莉珠.免疫組織化學(xué)技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化質(zhì)量控制[J].山西醫(yī)藥雜志，2010，39（11）：1143-1144.

[6]齊彬，周平安，徐瓊，等.全自動免疫組化染色質(zhì)量控制的經(jīng)驗和體會[J].臨床醫(yī)藥文獻(xiàn)電子雜志，2014，1（11）：1109.

The Immunity Organization and Quality Control

YU Liwei, Department of Pathology, The People's Hospital of Hegang City, Hegang 154101, China

[Abstract]Immunohistochemistry by histochemical method to the location and extent of the antigen antibody reaction is displayed.In order to achieve the qualitative and quantitative of tissue or cell antigen in effect.Immunohistochemical procedure is complex, a part of any improper treatment may lead to unsatisfactory results, especially in tissue fixation, dehydration, embedding process to save antigen is the key.

[Key words]Immunohistochemical technique, Quality control

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.06.022

【文章編號】1674-9308（2016）06-033-02

【中圖分類號】R364.7

【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

作者單位：154101黑龍江省鶴崗市人民醫(yī)院病理科