趙麗芳崔東濤程琦顧國(guó)建徐松濤

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AEG-1在膀胱腺癌中的表達(dá)及臨床意義

趙麗芳1崔東濤2程琦2顧國(guó)建3徐松濤2

【摘要】目的 探討星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因-1（AEG-1）在膀胱腺癌組織中的表達(dá)及其臨床病理意義。方法 采用免疫組化方法檢測(cè)AEG-1 在19例膀胱腺癌，16例癌旁組織中的表達(dá)。結(jié)果 膀胱腺癌中AEG-1蛋白陽(yáng)性率為63.2%，高于癌旁組織。結(jié)論 AEG-1與膀胱腺癌的臨床分期密切相關(guān)，AEG-1有助于了解膀胱腺癌的生物學(xué)行為及早期診斷。

【關(guān)鍵詞】膀胱癌；星形膠質(zhì)細(xì)胞上調(diào)基因-1；免疫組織化學(xué)

膀胱癌是泌尿外科最常見(jiàn)的惡性腫瘤，其中腺癌因其病情隱匿，部分患者發(fā)現(xiàn)時(shí)已是腫瘤晚期，喪失了手術(shù)機(jī)會(huì)，因此尋找一些可以有效提示腫瘤發(fā)生發(fā)展的指標(biāo)，對(duì)于腫瘤的診斷及治療至關(guān)重要。AEG-1是由582個(gè)氨基酸組成的單次跨膜蛋白質(zhì)，它有12個(gè)外顯子及11個(gè)內(nèi)含子。近來(lái)研究表明，該基因在多種惡性腫瘤中高表達(dá)，具有原癌基因的特性，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)［1-5］。但其在膀胱癌中具體的表達(dá)情況尚不明確，我們采用免疫組化SP法檢測(cè)了19例膀胱腺癌和16例癌旁組織中AEG-1的表達(dá)，旨在探討其臨床、病理意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取太倉(cāng)市及常熟市第一人民醫(yī)院泌尿外科1996年1月～2016年1月經(jīng)手術(shù)切除，病理診斷明確的原發(fā)性膀胱腺癌19例石蠟標(biāo)本。所選患者手術(shù)前未接受放療、免疫或化療。病理分級(jí)：GⅠ期3例，GⅡ期6例，GⅢ期10例。臨床分期：淺表性癌（Ta、T1）7例，浸潤(rùn)性癌（T2、T3、T4）12例。另各取距腫瘤3 cm處的膀胱組織16例作為對(duì)照研究。

1.2 方法

采用S-P免疫組化染色法，一抗鼠抗人AEG-1購(gòu)自美國(guó)Zymed公司，工作濃度為1：200。DAB顯色試劑盒、SP免疫組化試劑盒，購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司。用已知乳腺癌標(biāo)本作為陽(yáng)性對(duì)照，PBS代替一抗制成陰性對(duì)照切片。將組織石蠟切片置于65℃烤箱中烤1 h，脫蠟，用蒸餾水沖洗，3% H2O2室溫孵育10 min，蒸餾水沖洗，PBS浸泡后，將切片浸泡在枸櫞酸鹽緩沖液的不銹鋼壓力鍋中，待壓力鍋噴氣時(shí)，計(jì)時(shí)3 min，然后待室溫下緩慢冷卻，PBS沖洗，滴加AEG-1單克隆抗體（1 : 200），4℃孵育過(guò)夜，PBS沖洗，滴加生物素標(biāo)記二抗工作液，孵育20 min，添加DAB顯色，顯微鏡下觀察顯色反應(yīng)。蘇木精復(fù)染，脫水、透明、封片。先按陽(yáng)性細(xì)胞著色程度計(jì)分，無(wú)著色記0分，淡黃色記1分，棕黃色記2分，褐黃色記3分；再按陽(yáng)性細(xì)胞所占的百分比：無(wú)著色記0分，＜10%記1分；10%～50%記2分；51%～75%為3分；＞75%為4分。將兩者乘積＜4分為陰性表達(dá)，≥4為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SAS 9.2軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行各組間的陽(yáng)性率比較，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

AEG-1定位于細(xì)胞漿，細(xì)胞漿中出現(xiàn)棕黃色、棕褐色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞。AEG-1表達(dá)在膀胱癌組織中占63.2%（12/19），高于癌旁組織18.8%（3/16）（P＜0.05）。浸潤(rùn)性癌陽(yáng)性率為83.3% （10/12），高于淺表性癌的28.6%（2/7）（P＜0.05）。GⅠ+GⅡ期陽(yáng)性率為55.6%（5/4），與GⅢ期陽(yáng)性率70.0%（7/10），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

3 討論

研究表明，AEG-1可通過(guò)多種途徑促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展。首先它和Ras基因可以協(xié)同作用，共同調(diào)節(jié)磷脂酰肌醇激酶-3/蛋白激酶B信號(hào)途徑的下游基因如P53、AP-1等的表達(dá)，從而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞增殖和抗凋亡能力明顯增強(qiáng)［6］。此外，AEG-1的高表達(dá)還能激活NF-JB信號(hào)通路。NF-JB作為細(xì)胞核內(nèi)重要的轉(zhuǎn)錄因子可以調(diào)節(jié)細(xì)胞黏附分子、基質(zhì)金屬蛋白-9、環(huán)加氧酶-2等蛋白或基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)控腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、轉(zhuǎn)移等［7］。另外，研究表明AEG-1還有介導(dǎo)的腫瘤血管生成作用。

本研究中AEG-1蛋白在膀胱癌及腎癌細(xì)胞中的陽(yáng)性率高于癌旁組織，提示AEG-1表達(dá)增高在膀胱腺癌發(fā)生過(guò)程中可能起一定促進(jìn)作用。另外，AEG-1蛋白表達(dá)水平與膀胱癌的臨床分期密切相關(guān)，提示AEG-1在膀胱癌的進(jìn)展過(guò)程中起一定的作用。AEG-1與膀胱癌病理分級(jí)無(wú)關(guān)，可能我們樣本較小，需擴(kuò)大樣本進(jìn)一步檢測(cè)。研究發(fā)現(xiàn)，AEG-1與患者預(yù)后密切相關(guān)。王秀梅等［1］研究了87例口腔鱗癌患者AEG-1蛋白的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)AEG-1蛋白增高的患者，預(yù)后較差。王偉等［2］在乳腺癌研究中也有類似發(fā)現(xiàn)，AEG-1蛋白增高的患者預(yù)后不良。隨著隨著AEG-1與腫瘤的增殖、凋亡及惡性進(jìn)展等機(jī)制研究的深入，以AEG-1為靶點(diǎn)的藥物和基因治療也越來(lái)越多地受到重視。有學(xué)者利用RNA干擾技術(shù)沉默AEG-1 基因后可以降低腫瘤細(xì)胞的增殖能力和侵襲能力［7-8］。

總之，筆者認(rèn)為AEG-1蛋白可考慮用于膀胱腺癌的輔助診斷，及判斷患者預(yù)后。本實(shí)驗(yàn)為后期研究提供了一定的實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。但AEG-1促進(jìn)腫瘤發(fā)生發(fā)展的確切機(jī)制需在分子水平進(jìn)一步研究，AEG-1有望成為膀胱癌基因治療的新靶點(diǎn)。

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【中圖分類號(hào)】R735

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

【文章編號(hào)】1674-9308（2016）15-0049-02

doi：10.3969/j.issn.1674-9308.2016.15.030

基金項(xiàng)目：河南省科技廳基礎(chǔ)與前沿資助項(xiàng)目（152300410177） 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校博士基金項(xiàng)目（2013-DL-002） 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校校級(jí)項(xiàng)目（2014-S-LMC14）

作者單位：1 漯河醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)?？蒲刑?，河南 漯河 462002；2 漯河醫(yī)學(xué)高等?？茖W(xué)校醫(yī)療系，河南 漯河 462002；3 太倉(cāng)市第一人民醫(yī)院病理科，江蘇 太倉(cāng) 215400

通訊作者：徐松濤，E-mail：582028819@qq.com

Expression and Clinical Significance of AEG-1 in Bladder Adenocarcinoma

ZHAO Lifang1CUI Dongtao2CHENG Qi2GU Guojian3XU Songtao2
1 Department of Scientific Research， Luohe Medical College， Luohe He’nan 462002， China， 2 Department of Clinical， Luohe Medical College， Luohe He’nan 462002， China， 3 Departments of Pathology， The First People’s Hospital of Taicang， Taicang Jiangsu 215400， China

［Abstract］Objective To investigate the expression of AEG-1 in human bladder adenocarcinoma. Methods The expression of AEG-1 protein was detected in 19 cases of bladder adenocarcinoma and 16 cases of paracancer tissues by immunohistochemical method. Results The positive expression of AEG-1 was 63.2% in bladder adenocarcinoma， which was higher than that in paracancer tissue. Conclusion Increased expression of AEG-1 is markedly correlated with tumor clinical classification. Detection of AEG-1 may be helpful to diagnosis and evaluate infiltrative capability of bladder adenocarcinoma.

［Key words］Bladder adenocarcinoma， AEG-1， Immunohistochemistry