曹劍鋒,蘆靜波,滕樹學(xué),任朝輝,陳慧琴(.貴州師范學(xué)院,貴州 貴陽(yáng) 55008； .皖南醫(yī)學(xué)院,安徽 蕪湖 00； .貴陽(yáng)市烏當(dāng)區(qū)人民醫(yī)院,貴州 貴陽(yáng) 55008； .貴州師范大學(xué),貴州 貴陽(yáng) 55000)

密蒙花總黃酮的抗氧化及免疫調(diào)節(jié)作用

曹劍鋒1,蘆靜波2,滕樹學(xué)3,任朝輝4,陳慧琴1
(1.貴州師范學(xué)院,貴州 貴陽(yáng) 550018； 2.皖南醫(yī)學(xué)院,安徽 蕪湖 241002； 3.貴陽(yáng)市烏當(dāng)區(qū)人民醫(yī)院,貴州 貴陽(yáng) 550018； 4.貴州師范大學(xué),貴州 貴陽(yáng) 550001)

為研究密蒙花總黃酮(TFB)對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠的抗氧化和免疫調(diào)節(jié)作用,以200 mg/(kg·d)的劑量對(duì)昆明雄性小鼠皮下注射D-半乳糖建立衰老模型小鼠，對(duì)模型小鼠分別灌胃TFB 25、50、100 mg/(kg·d)或維生素E 50 mg/(kg·d)，正常對(duì)照組及模型對(duì)照組灌服等劑量的蒸餾水，連續(xù)灌胃40 d，取血清測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶 (LDH)及總膽紅素(TBIL) 和總蛋白(TP)含量，取肝臟與脾臟計(jì)算臟器指數(shù)并測(cè)定肝及腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)活力及谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)含量，并做組織切片觀察肝臟組織病理學(xué)變化。結(jié)果表明，與模型對(duì)照組比較，50、100 mg/(kg·d)劑量的TFB 能顯著抑制衰老小鼠血清AST、AST、ALP、LDH活力和TBIL含量的升高；并且能使小鼠肝和腦組織中的SOD活力和GSH含量顯著升高,使MDA含量降低。其中,50 mg/(kg·d)劑量組使肝和腦組織中SOD活力分別顯著升高10.49%和26.16%，使GSH含量分別顯著升高42.10%和31.64%，使MDA含量分別顯著降低55.03%和20.86%。各劑量組TFB均能明顯提高衰老小鼠的脾臟指數(shù)和胸腺指數(shù)，50 mg/(kg·d) TFB劑量組使胸腺指數(shù)顯著升高23.08%。肝組織切片病理學(xué)檢查顯示，TFB各劑量均可以減輕肝臟組織病理性改變。綜上，TFB對(duì) D-半乳糖損傷模型小鼠的損傷具有改善作用。

密蒙花； 總黃酮； 抗氧化； 免疫調(diào)節(jié)

密蒙花(BuddlejaofficinalisMaxim)為常用中藥，為馬錢科醉魚草屬植物[1]。密蒙花的傳統(tǒng)功效為清熱養(yǎng)肝、明目退翳，治療目赤翳障等疾病?，F(xiàn)代藥理作用研究表明，其具有多種藥理活性，主要表現(xiàn)在抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、降血糖、治療干眼癥等眼部疾病和抗腫瘤等作用[2]。密蒙花總黃酮(TFB)是一種天然藥物，其臨床應(yīng)用有較高的安全性，具有良好的應(yīng)用前景[3]。研究表明，TFB具有良好的抗氧化、清除自由基的活性[4]。

基于TFB良好的抗自由基活性，為進(jìn)一步探索TFB作為天然藥物的免疫調(diào)節(jié)和抗氧化保護(hù)作用，本研究建立了D-半乳糖亞急性衰老模型，測(cè)定了小鼠免疫器官指數(shù)、血液生化指標(biāo)，肝、腦組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)、還原型谷胱甘肽(GSH) 含量以及肝組織的病理變化，研究TFB對(duì)D-半乳糖所致衰老小鼠的抗氧化和免疫調(diào)節(jié)作用，以期為將TFB開發(fā)成新的安全、有效的免疫增強(qiáng)劑或天然抗氧化劑提供理論依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

密蒙花干藥材購(gòu)自貴陽(yáng)市藥材市場(chǎng)，D-半乳糖、蘆丁購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、乳酸脫氫酶(LDH)、總膽紅素(TIBL) 檢測(cè)試劑盒購(gòu)自北京利德曼生化股份有限公司；總蛋白(TP)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽 (GSH )檢測(cè)試劑盒購(gòu)自南京建成生物科技有限公司；曙紅Y購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；中性樹膠購(gòu)自中國(guó)上海懿洋儀器有限公司。

1.2 儀器設(shè)備

冷凍離心機(jī)購(gòu)自德國(guó)艾本德股份公司；722型可見分光光度計(jì)購(gòu)自上海光譜儀器有限公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購(gòu)自上海亞榮生化儀器廠；真空冷凍干燥系統(tǒng)購(gòu)自河南兄弟儀器有限公司；干燥箱購(gòu)自天津市泰斯特儀器有限公司;自動(dòng)生化分析儀AU680購(gòu)自美國(guó)貝克曼公司。

1.3 TFB的提取及含量測(cè)定

參照熊勇等[6]提取黃酮的方法提取TFB，測(cè)定其含量，TFB提取物冷凍干燥后于中4 ℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

精確稱取經(jīng)干燥至恒定質(zhì)量的蘆丁對(duì)照品20.0 mg，加甲醇溶解并定容至100 mL，配成200 μg/mL蘆丁對(duì)照品溶液，準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液0、0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL移入10 mL試管中，用甲醇定容至5 mL，各加0.05 g/mL NaNO2溶液0.3 mL，振搖后放置5 min，加入0.10 g/mL Al(NO3)3溶液0.3 mL，搖勻后放置6 min，加1.0 mol/L NaOH溶液2 mL，用甲醇定容至10 mL，靜置10 min，以零管為空白，搖勻后在510 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度(A510)，以A510為縱坐標(biāo)，以蘆丁的質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。準(zhǔn)確稱取純化后的密蒙花浸膏1.0 g，加甲醇溶解并定容至500 mL，按照標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制方法測(cè)定吸光度，并根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算總黃酮含量。

1.4 小鼠D-半乳糖衰老模型的建立

供試健康昆明小白鼠由貴州醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供 [許可證號(hào)： SCXK(黔)2012-0001]，室溫條件下常規(guī)飼養(yǎng)。選取60只體質(zhì)量(20±2)g的昆明雄性小鼠，隨機(jī)分為6組，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、維生素E組及TFB低、中、高劑量組。除正常對(duì)照組外，其余各組以200 mg/(kg·d)的劑量皮下注射D-半乳糖建立衰老模型，正常對(duì)照組注射等劑量的生理鹽水，連續(xù)30 d造成衰老模型。TFB低、中、高劑量組分別灌胃給予TFB 25、50、100 mg/(kg·d)，維生素E組灌服維生素E50 mg/(kg·d)、正常對(duì)照組及模型對(duì)照組灌服等劑量的蒸餾水，連續(xù)灌胃40 d，每天灌胃1 次，第41天，摘小鼠眼球取血，分離血清，同時(shí)分離肝臟、腎臟、胸腺及脾臟，置于冷的生理鹽水中，剔除臟器表面脂肪組織，精確稱質(zhì)量并記錄。另外剪下肝右葉，置于體積分?jǐn)?shù)10%甲醛中固定，待做病理檢測(cè)。計(jì)算臟器指數(shù)，臟器指數(shù)=(臟器質(zhì)量量/小鼠體質(zhì)量)×100%。

1.5 檢測(cè)指標(biāo)及方法

1.5.1 血清ALT、AST、ALP、LDH 活力以及TIBL、TP含量 按照試劑盒說明書測(cè)定分離血清中ALT、AST、ALP、LDH 活力以及TIBL、TP含量。

1.5.2 肝臟、腦組織SOD活力及GSH、MDA含量 取小鼠肝臟及腦組織準(zhǔn)確稱質(zhì)量，在預(yù)冷的生理鹽水中冰浴勻漿，制成質(zhì)量分?jǐn)?shù)10%的組織勻漿液，于4 ℃、3 000 r/min離心10 min，取上清液于-20 ℃條件下保存?zhèn)溆谩０凑赵噭┖姓f明書測(cè)定肝臟、腦組織SOD活力及GSH、MDA含量。

1.5.3 肝臟組織形態(tài)學(xué) 取小鼠肝右葉組織置于體積分?jǐn)?shù)10%的中性甲醛溶液中固定，常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片，進(jìn)行蘇木精-伊紅染色，在光學(xué)顯微鏡下觀察肝組織的形態(tài)學(xué)變化。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

數(shù)據(jù)采用SPSS 11.5軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析與處理，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 TFB中黃酮含量測(cè)定結(jié)果

以蘆丁為標(biāo)準(zhǔn)品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并根據(jù)蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算密蒙花提取物黃酮含量為70.6%。

2.2 TFB對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠臟器指數(shù)的影響

從表1可以看出，與正常對(duì)照組相比，模型對(duì)照組小鼠胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)明顯分別顯著低于正常對(duì)照組35.00%、35.29%。與模型對(duì)照組比較，維生素E和TFB中劑量組胸腺指數(shù)分別顯著升高38.46%和23.08%，維生素E組及TFB高、中劑量組脾臟指數(shù)分別升高27.28%(P<0.05)、9.09%(P>0.05) 、4.55%(P>0.05)，各組間肝臟和腎臟指數(shù)均升高，但差異均不顯著。

表1 TFB對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠臟器指數(shù)的影響 (n=10)

組別劑量/[mg/(kg·d)]肝臟腎臟脾臟胸腺模型對(duì)照組3．98±0．211．36±0．070．22±0．050．13±0．01正常對(duì)照組5．03±0．69?1．52±0．08?0．34±0．05??0．20±0．04??TFB劑量組254．07±0．411．39±0．070．21±0．020．14±0．02504．27±0．321．44±0．020．23±0．020．16±0．02?1004．49±0．311．48±0．120．24±0．020．15±0．08維生素E組504．62±0．421．39±0．050．28±0．04?0．18±0．01?

注：與模型對(duì)照組比較，*表示差異顯著(P<0.05),**表示極顯著(P<0.01 )，下同。

2.3 TFB對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠血清中ALP、AST、ALT、LDH活力和TIBL、TP含量的影響

由表2和表3可知，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠血清中的ALP、ALT、AST、LDH 活力和TIBL含量分別顯著升高84.80%、59.68%、49.79%、153.70%和175.71%，TP含量降低23.59%。與模型對(duì)照組比較，TFB中、高劑量組和維生素E組小鼠血清中ALP活力分別顯著降低44.09%、31.80%和42.19%，ALT活力分別降低8.63%(P>0.05)、9.91%(P<0.05)和14.68%(P<0.05)，AST活力分別顯著降低21.89%、 23.49%和30.11%，LDH活力分別顯著降低33.27%、32.77%和55.69%，TIBL含量分別降低46.21%(P<0.05)、24.87%(P>0.05)和52.33%(P<0.05)，TP含量分別顯著升高19.93%、20.12%和16.46%。

表2 TFB對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠血清酶活力的影響 (n=10)

組別劑量/[mg/(kg·d)]ALT/(U/L)AST/(U/L)ALP/(U/L)LDH/(U/L)模型對(duì)照組38．34±5．68128．43±19．2085．53±11．262850．76±537．02正常對(duì)照組24．01±6．08?85．74±16．65?46．28±5．61??1123．67±268．14??TFB劑量組2535．52±1．73116．53±11．3770．67±8．732428．50±308．585035．03±4．00100．32±8．32?47．82±10．53??1895．33±153．26?10034．54±5．39?98．26±16．56?58．33±11．84?1916．59±195．64?維生素E組5032．71±3．21?89．76±11．17?49．52±8．58??1263．28±293．21??

表3 TFB對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠血清TIBL和TP含量的影響(n=10)

組別劑量/[mg/(kg·d)]TIBL/(μmol/L)TP/(g/L)模型對(duì)照組1．93±0．3746．72±5．01正常對(duì)照組0．70±0．17?61．14±3．61?TFB劑量組251．73±0．2152．86±2．65501．32±0．29?56．03±0．95?1001．45±0．3856．12±7．11?維生素E組500．95±0．53?55．41±2．45?

2.4 TFB對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠肝組織中SOD活力和GSH、MDA含量的影響

由表4可以看出，與正常對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組小鼠肝組織中的SOD活力和GSH含量分別顯著降低14.27%和33.61%，而MDA含量顯著升高209.73%。與模型對(duì)照組相比， TFB中、高劑量組和維生素E組小鼠肝組織中的SOD活力升高10.50%(P<0.05)、7.36%(P>0.05)和11.84%(P<0.05)， GSH含量分別顯著升高 42.10%、 36.90%和34.82%，MDA含量分別顯著降低55.03%、55.40%和65.58%。

表4 TFB對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠肝組織SOD活力和GSH、MDA含量的影響(n=10)

組別劑量/[mg/(kg·d)]SOD活力/(U/mg)GSH含量/(mg/g)MDA含量/(nmol/mg)模型對(duì)照組211．17±4．7218．67±0．777．96±0．43正常對(duì)照組246．33±7．59?28．12±3．02??2．57±0．22??TFB劑量組25215．43±9．8821．14±1．834．23±0．50?50233．34±25．19?26．53±2．56??3．58±0．44?100226．72±15．5025．56±3．99?3．55±0．33??維生素E組50236．17±25．19?25．17±2．32??2．74±0．10??

2.5 TFB對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠腦組織中SOD活力和GSH、MDA含量的影響

從表5可以看出，與正常對(duì)照組對(duì)比，模型對(duì)照組小鼠腦組織中的SOD活力和GSH含量分別顯著降低25.19%和32.16%，而MDA含量顯著升高59.44%。與模型對(duì)照組相比，TFB中、高劑量組和維生素E 組小鼠腦組織中的SOD活力分別顯著升高26.16%、24.65%和28.61%，小鼠腦組織中GSH含量分別顯著升高31.64%、22.62% 和42.24%，MDA含量分別顯著降低20.86%、17.36%和28.01%。

表5 TFB對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠腦組織中SOD活力和GSH、MDA含量的影響 (n=10)

組別劑量/[mg/(kg·d)]SOD活力/(U/mg)GSH含量/(mg/g)MDA含量/(nmol/mg)模型對(duì)照組182．44±7．7111．98±0．2214．86±0．77正常對(duì)照組243．86±20．07??17．66±0．60??9．32±0．32??TFB劑量組25204．87±12．0113．26±1．4013．34±1．2350230．16±20．78?15．77±0．70?11．76±1．40?100227．42±24．28?14．69±0．82?12．28±0．64?維生素E組50234．63±5．04?17．04±0．92??10．69±0．78??

2.6 TFB對(duì)D-半乳糖誘導(dǎo)衰老小鼠的肝組織病理形態(tài)學(xué)的影響

如圖1所示，正常對(duì)照組小鼠肝臟的肝小葉結(jié)構(gòu)正常，肝細(xì)胞索中央靜脈為中心，肝細(xì)胞無變性、壞死等損傷性改變(圖1A)；模型對(duì)照組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂，中央?yún)^(qū)肝細(xì)胞出現(xiàn)嚴(yán)重的水腫樣變性或脂肪變性，伴隨炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，肝細(xì)胞脂肪沉積和纖維化甚至壞死，形成空泡(圖1B)；維生素E組小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)基本正常，但肝小葉中央?yún)^(qū)肝細(xì)胞排列紊亂，可見肝細(xì)胞水腫樣變性或脂肪變性(圖1C)；與模型對(duì)照組比較，TFB各劑量組均可明顯改善小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)，不同程度地減少D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠肝損傷中肝細(xì)胞的水腫和壞死等(圖1D—F)，其中TFB中劑量組效果最佳。

A.對(duì)照組; B.模型組; C.維生素E組; D—F 分別為TFB高、中、低劑量組圖1 TFB處理D-半乳糖誘導(dǎo)的衰老小鼠肝組織病理切片的光鏡觀察結(jié)果(HE，×40)

3 結(jié)論與討論

本研究連續(xù)30 d 給小鼠皮下注射D-半乳糖建立亞急性小鼠衰老模型，由試驗(yàn)結(jié)果可知，模型對(duì)照組小鼠血清中各種標(biāo)記酶AST、ALT、ALP、LDH活力和TIBL含量明顯升高；小鼠肝臟及腦組織中SOD活力和GSH含量明顯降低，MDA含量明顯增加；行為上可見小鼠行動(dòng)遲緩，毛色松散無光澤，表明模型建立成功[7-8]。

在一定時(shí)間內(nèi)連續(xù)給小鼠注射大劑量D-半乳糖后，會(huì)使體內(nèi)的SOD活性降低和GSH含量降低等，從而使機(jī)體的抗氧化水平降低，生物膜脂質(zhì)過氧化，其中腦受損出現(xiàn)的最早[9]。研究表明，氧自由基造成神經(jīng)元壞死從而導(dǎo)致一系列的神經(jīng)性疾病，如阿爾茨海默病和帕金森病[10]。而抗氧化劑能通過緩解氧化損傷，提高腦部抗氧化防御體系[11]。經(jīng)過中、高劑量TFB的灌胃處理，小鼠腦組織中的SOD活力和GSH含量都明顯提高，而MDA含量明顯降低，表明中、高劑量TFB可以起到顯著抑制腦組織脂質(zhì)過氧化的作用。

肝臟是機(jī)體最主要的排毒器官，具有較高的代謝率，自由基的累積會(huì)造成肝損傷，肝臟抗氧化防御體系的完整性對(duì)健康非常重要[12]。經(jīng)過中、高劑量TFB的灌胃處理，可明顯降低D-半乳糖所致衰老小鼠肝損傷標(biāo)記酶AST、ALT、ALP、LDH活性和TIBL含量；小鼠肝組織中的SOD活力和GSH含量都明顯提高，而MDA含量明顯降低，表明中、高劑量TFB可以起到顯著抑制肝臟組織脂質(zhì)過氧化的作用。對(duì)D-半乳糖致衰老小鼠的肝組織病理形態(tài)學(xué)研究顯示，與模型對(duì)照組比較，TFB各劑量組可不同程度改善小鼠肝小葉結(jié)構(gòu)，減少肝細(xì)胞的纖維化、水腫和壞死等?？梢?，TFB 具有明顯減緩D-半乳糖所致衰老小鼠氧自由基應(yīng)激損傷，降低脂質(zhì)過氧化水平，提高機(jī)體的SOD活性的作用，提示TFB可有效抑制機(jī)體過氧化造成的損傷，是一種良好的抵抗機(jī)體氧化應(yīng)激損傷的抗氧化活性物質(zhì)。這可能與TFB中含有芹菜素、木樨草素、槲皮素以及藏紅花苷等具有顯著的抗氧化、抗炎作用活性成分有關(guān)[2]。

胸腺是免疫調(diào)節(jié)的中樞器官，主要用于為T淋巴細(xì)胞的分化、成熟提供場(chǎng)所，對(duì)于機(jī)體的細(xì)胞免疫功能以及免疫反應(yīng)的發(fā)生具有重要作用。脾臟是最大的外周免疫器官，其為各種成熟的淋巴細(xì)胞提供定居場(chǎng)所以及發(fā)生免疫應(yīng)答場(chǎng)所。隨著機(jī)體的增齡化進(jìn)程推進(jìn)，胸腺和脾臟均會(huì)質(zhì)量變輕，功能下降[13]。胸腺指數(shù)和脾臟指數(shù)可反映機(jī)體非特異性免疫水平[14]，它們的發(fā)育狀況直接影響到機(jī)體免疫力的高低。研究表明，黃酮類化合物具有抗自由基、抗腫瘤、保肝護(hù)肝、抗衰老、提高機(jī)體的非特異性免疫等作用[15-17]。黃酮類是通過刺激機(jī)體免疫器官提高機(jī)體的非特異性免疫，從而提高機(jī)體的抗病力。本試驗(yàn)結(jié)果表明，D-半乳糖所致衰老小鼠胸腺和脾臟指數(shù)顯著低于正常對(duì)照組，中劑量的TFB與維生素E相似，均具有提高衰老小鼠臟器指數(shù)的作用，提示TFB可能通過對(duì)免疫器官的調(diào)控作用來調(diào)節(jié)免疫功能。綜上，本研究中TFB能有效抑制衰老小鼠衰老過程中過氧化造成的損傷，為進(jìn)一步研究TFB的藥理作用及藥用價(jià)植，促進(jìn)其開發(fā)應(yīng)用提供了理論依據(jù)。

[1] 國(guó)家醫(yī)藥管理局中草藥情報(bào)中心站．植物藥有效成分冊(cè)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，1986：2-3．

[2] 崔穎，張永旺．密蒙花研究進(jìn)展[J]．甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，27(2)：66-67．

[3] 姚小磊，彭清華，吳權(quán)龍．密蒙花提取物治療兔去勢(shì)所致干眼癥[J]．眼視光學(xué)雜志，2008，10(1)：21-26．

[4] 羅堾子，孔永強(qiáng)，張弘，等．密蒙花總黃酮清除自由基活性研究[J]．林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2012，32(3)：97-101．

[5] Song X,Bao M,Li D,etal.Advanced glycation in D-galactose induced mouse aging model[J].Mechanisms of Ageing and Development,1999,108(3):239-251.

[6] 熊勇，李永春，趙春燕．正交設(shè)計(jì)優(yōu)選密蒙花總黃酮提取工藝研究[J]．云南民族大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，19(2)：146-149．

[7] 關(guān)萍，郭搏，王惠，等．D-半乳糖促小鼠衰老模型的衰老程度與自然生長(zhǎng)鼠齡的比較[J]．動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2013，34(1)：71-74．

[8] 宋朝春，魏冉磊，樊曉蘭，等．衰老及抗衰老藥物的研究進(jìn)展[J]．中國(guó)生化藥物雜志，2015(1)：163-170．

[9] 陳英，朱科學(xué)，彭偉，等．小麥胚活性肽對(duì)D-半乳糖衰老模型小鼠抗氧化作用研究[J]．食品科學(xué)，2010，31(19)：325-328．

[10] Opii W O,Joshi G,Head E,etal.Proteomic identification of brain proteins in the canine model of human aging following along-term treatment with antioxidants and a program ofbehavioral enrichment:Relevance to Alzheimer’s disease[J].Neurobiology of Aging,2008,29(1):51-70.

[11] Head E,Nukala V N,Fenoglio K A,etal.Effects of age,dietary,and behavioral enrichment on brain mitochondria in a canine model of human aging[J].Experimental Neurology,2009,220(1):171-176.

[12] Albano E.Free radical mechanisms in immune reactions associated with alcoholic liver disease[J].Free Radical Biology & Medicine,2002,32(2):110-114.

[13] 王利，付森．傷力草水煎劑對(duì)小白鼠免疫機(jī)能的影響[J]．河南農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，43(3)：147-149．

[14] 徐靜娟，姚茂君，鄔敏辰．二氫楊梅素生物功效的研究[J]．食品科學(xué)，2008，29(11)：622-625．

[15] 孫曉生，楊柳．抗衰老機(jī)制與藥物的研究進(jìn)展[J]．廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2009，26(6)：593-597．

[16] 劉霞，楊繼紅，王海瑞，等．冷榨葡萄籽餅粕超微粉對(duì)衰老小鼠內(nèi)臟抗氧化功能的影響[J]．食品科學(xué)，2013，34(17)：299-304．

[17] 桂琳，葛飛，董群，等．細(xì)腳擬青霉提取物對(duì)D-半乳糖致衰小鼠免疫功能的影響[J]．中國(guó)老年學(xué)雜志，2011，31(13)：2467-2469．

Immune Regulation Function and Antioxidant Capacities of Total Flavonoids fromBuddlejaofficinalisMaxim DC.

CAO Jianfeng1,LU Jingbo2,TENG Shuxue3,REN Chaohui4,CHEN Huiqin1
(1.Guizhou Education University,Guiyang 550018,China; 2.Wannan Medical College,Wuhu 241002,China; 3.Guiyang Wudang District People’s Hospital,Guiyang 550018,China; 4.Guizhou Normal University,Guiyang 550001,China)

To investigate the regulatory effects of total flavonoids fromBuddlejaofficinalisMaxim DC.(TFB) on the immune function and antioxidant mechanism in aged mice induced by D-galactose,mice were subcutaneously injected with D-galactose at a dosage of 200 mg/kg body weight once daily to make aged model.Experiment groups were fed with TFB at the dose of 25,50,100 mg/(kg·d) and vitamin E 50 mg/(kg·d) by gavage,respectively; the normal control group and the model control group were fed with the same amount of distilled water once daily,and the experiment lasted 40 days.The activities of alkaline phosphatase(ALP),glutamate pyruvate transaminase(ALT),aspartate aminotransferase(AST),lactate dehydrogenase(LDH),total bilirubin(TIBL) and total protein(TP) level in serum,and the levels of malondialdehyde(MDA),glutathione(GSH) and the activities of superoxide dismutase(SOD)in the liver and brain tissue were assayed using standard procedures.Immune function in aged mice were used to detect the thymus gland index and spleen index.Meanwhile hepatic histopathological examination was observed.The results showed that TFB at 50,100 mg/(kg·d) investigated doses significantly lowered the levels of serum ALT，AST，ALP，LDH，TIBL,enhanced the activities of SOD,increased the level of GSH,and lowered the levels of MDA of liver and brain.Especially,TFB at 50 mg/(kg·d) investigated doses significantly enhanced the activities of SOD by 10.49% and 26.16%,increased the level of GSH by 42.10% and 31.64%,lowered the level of MDA by 55.03% and 20.86% in liver and brain,respectively.The thymus gland index and spleen index were all higher in the TFB dose groups,TFB 50 mg/(kg·d) increased the thymus gland index by 23.08%.Meanwhile,ameliorating the liver damage were observed in the TFB groups in mice.Thus,TFB was able to enhance the immune function and improve the antioxidant capacities in aged mice induced by D-galactose.

BuddlejaofficinalisMaxim; total flavonoid; antioxidation; immune regulation

2016-04-22

貴州省科技廳自然科學(xué)基金項(xiàng)目(黔科合J字[2013]2233)；貴州省應(yīng)用化學(xué)特色重點(diǎn)學(xué)科建設(shè)項(xiàng)目(黔教科研發(fā)[2012]442)；貴州師范學(xué)院博士基金項(xiàng)目(12BS032)

曹劍鋒(1971-)，男，甘肅天水人，副教授，博士，主要從事天然藥物研究。E-mail：cjf266@126.com

時(shí)間：2016-8-31 15：43：50

S859.3

A

1004-3268(2016)09-0130-05

網(wǎng)絡(luò)出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/41.1092.S.20160831.1543.001.html