缺氧誘導(dǎo)因子2α在宮頸鱗癌組織中的表達(dá)及其意義

盧艷紅 王 巖 聶明豪 李秀榮 倪林穎

目的研究分析宮頸鱗癌組織的缺氧誘導(dǎo)因子2α（HIF-2α）表達(dá)和意義。方法根據(jù)我院2006年3月～2012年3月接收的208例患者進(jìn)行分析研究，有102例宮頸鱗癌組織、66例CIN組織、40例正常宮頸組織，對這些組織的HIF-2α mRNA的表達(dá)情況進(jìn)行比較研究。結(jié)果正常組織、宮頸鱗癌組織、CIN組織的HIF-2α mRNA的表達(dá)為0、68.6%、22.7%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。HIF-2αmRNA在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論宮頸鱗癌的發(fā)生和病變過程與HIF-2α mRNA在宮頸鱗癌組織中表達(dá)上調(diào)有關(guān)聯(lián)性。

缺氧誘導(dǎo)因子2α；宮頸鱗癌；原位雜交

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤疾病，對女性的健康和生命產(chǎn)生了威脅［1］。宮頸鱗癌是比較常見的類型，本文主要是通過原位雜交技術(shù)對宮頸鱗癌組織、正常組織和宮頸上皮內(nèi)瘤病變（CIN）組織的缺氧誘導(dǎo)因子2α（Hypoxia-Inducible Factor 2α，HIF-2α）mRNA的表達(dá)情況進(jìn)行分析研究，希望能夠了解其在患者宮頸鱗癌病變過程中作用，現(xiàn)進(jìn)行以下報道。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選取2006年3月～2012年3月我院對208例患者的宮頸組織蠟塊進(jìn)行了研究，患者年齡34～65歲，平均年齡（45.8±3.5）歲。共有102例宮頸鱗癌組織、66例CIN組織，40例正常組織。

1.2 主要試劑及試劑盒

DAB顯色劑購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司，人原位雜交檢測試劑盒（MK2210h）購自武漢博士德生物工程有限公司，5’端地高辛標(biāo)記的HIF-2α寡核苷酸探針序列：5’-GAAGC TGACC AGCAG ATGGA CAACT TGTAC CTGAA-3’，由武漢博士德生物工程有限公司合成［2］。

1.3 ISH染色

石蠟切片經(jīng)新鮮配置的二甲苯脫蠟，梯度酒精脫水后，用新鮮配制的3% H2O2室溫處理5～10 min，以滅活內(nèi)源性過氧化物酶，切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋的胃蛋白酶，37℃消化20 min，消化標(biāo)本DNA結(jié)合蛋白，1%多聚甲醛/0.1 MPBS（pH 7.2～7.6），室溫固定10 min，每張切片加20 μl不含探針的預(yù)雜交液，恒溫箱40℃保存4 h，每張切片加20 μl含探針的雜交液，恒溫箱40℃雜交過夜，雜交后洗滌，滴加封閉液，滴加生物素化鼠抗地高辛，滴加SABC，滴加生物素化過氧化物酶，PBS清洗，DAB顯色，蘇木素復(fù)染，梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片。

1.4 ISH結(jié)果判定

HIF-2α陽性信號為棕黃色顆粒，定位于細(xì)胞質(zhì)［3］，使用原位雜交的陽性計算方法。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，計數(shù)資料采用（%）表示，采用χ2檢驗(yàn)，計量資料采用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，采用t檢驗(yàn)。以P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

正常組織、宮頸鱗癌組織、CIN組織的HIF-2αmRNA的表達(dá)分別為0、68.6%、22.7%，數(shù)據(jù)對比，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。HIF-2αmRNA在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為94.4%，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率為63.1%。HIF-2αmRNA在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）；患者在Ⅰ、Ⅱ期陽性表達(dá)率為49.4%，患者在Ⅲ、Ⅳ期陽性表達(dá)率為88.0%，患者的分期越晚，該陽性表達(dá)率越高。患者浸潤深度在淺肌層的陽性表達(dá)率59.5%，患者浸潤深度在深肌層及以上的陽性表達(dá)率71.7%，HIF-2αmRNA陽性表達(dá)率和患者的年齡、浸潤深度并沒有聯(lián)系（P＞0.05）。

3 討論

HIF在人、哺乳動物體內(nèi)廣泛存在，它是轉(zhuǎn)錄因子［4］，研究顯示［5］，缺氧誘導(dǎo)因子有3種：HIF-1、HIF-2、HIF-3，其中HIF-2是異源二聚體蛋白質(zhì)復(fù)合物。多數(shù)惡性腫瘤患者的HIF-2α表達(dá)較高，可認(rèn)為HIF-2α屬于癌基因的一種［6-8］。本次研究結(jié)果顯示，正常組織、宮頸鱗癌組織、CIN組織的HIF-2α mRNA的表達(dá)為0、68.6%、22.7%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。HIF-2αmRNA在伴淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移宮頸癌組織中的陽性表達(dá)率比較高；患者的分期越晚，該陽性表達(dá)率越高。HIF-2α mRNA陽性表達(dá)率和患者的年齡、浸潤深度并沒有聯(lián)系（P＞0.05），表明HIF-2α的表達(dá)和患者的宮頸鱗癌發(fā)病有直接聯(lián)系。MMP可以促腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移，和患者的年齡、分期、浸潤等無關(guān)。該結(jié)果和李曉晶［8］的研究結(jié)論相符合，說明宮頸鱗癌在發(fā)病和發(fā)展的過程中受到了HIF-2α的影響。在侵襲和轉(zhuǎn)移的時候有所參與，臨床中可以將其作為新的分子治療靶點(diǎn)。

總之，臨床中的宮頸鱗癌發(fā)病和發(fā)展和HIF-2α高表達(dá)有很大的關(guān)聯(lián)性，對HIF-2α的表達(dá)水平進(jìn)行檢測，能夠?yàn)榕R床中的早期診斷以及治療提供參考，在該疾病的治療作用仍然需要更多的研究分析，通過對HIF-2α的研究，能夠讓我們以后治療宮頸鱗癌過程中提供更多的指導(dǎo)價值。

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The Expression and Significance of Hypoxia Inducible Factor 2αin Cervical Squamous Cell Carcinoma

LU Yanhong WANG Yan NIE Minghao LI Xiurong NI Linying Department of Pathology，Heilongjiang Provincial Hospital，Harbin Heilongjiang 150036，China

ObjectiveTo study the expression and significance of hypoxia inducible factor 2α（HIF-2α）in cervical squamous cell carcinoma.MethodsTo analyze and Research on 208 cases in our hospital from March 2006 to March 2012 to receive patients，102 cases of cervical squamous cell carcinoma，for 66 cases of CIN tissues，40 cases of normal cervical tissue，the expression of HIF-2α mRNA for the organization of the comparative study.ResultsThe expression of HIF-2α in normal tissues，cervical squamous cell carcinoma tissues and mRNA tissues was 0，68.6%，22.7%，and the results were statistically significant（P＜ 0.05）. The positive expression rate of HIF-2αmRNA in cervical cancer with lymph node metastasis was higher than that without lymph node metastasis，and the difference was statistically significant（P＜ 0.05）.ConclusionThe incidence of cervical squamous cell carcinoma and the process of mRNA αHIF-2 expression in cervical squamous cell carcinoma tissue is associated with up regulation.

Hypoxia inducible factor 2α，Cervical squamous cell carcinoma，Hybridization in situ

R737.33

A

1674-9316（2016）24-0171-02

10.3969/j.issn.1674-9316.2016.24.100

黑龍江省醫(yī)院病理科，黑龍江 哈爾濱 150036