王素琴　安紅軍　徐勝東　常　青

(濟源市人民醫(yī)院婦科,河南　濟源　459000)

P38 MAPK通路在老年卵巢癌化療藥物耐藥性產(chǎn)生中的作用

王素琴安紅軍1徐勝東1常青2

(濟源市人民醫(yī)院婦科,河南濟源459000)

〔摘要〕目的研究P38 MAPK通路在老年卵巢癌化療藥物耐藥性產(chǎn)生中的作用，對可能的機制進行探討。方法采用免疫組化法測定P38 MAPK、凋亡抑制蛋白 Survivin、耐藥相關(guān)蛋白切除修復(fù)交叉互補基因 1(ERCC1)，肺耐藥相關(guān)蛋白(LRP)，谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST-π)在25例老年原發(fā)性卵巢上皮癌和32例老年復(fù)發(fā)性卵巢上皮癌治療前后標(biāo)本中的表達情況。結(jié)果P38 MAPK在原發(fā)性卵巢癌中的表達顯著高于復(fù)發(fā)性卵巢上皮癌(P<0.01)，而Survivin、ERCC1、GST-π的表達則明顯低于復(fù)發(fā)性卵巢癌組(P<0.01)，P38 MAPK 與 Survivin、ERCC1、LRP 之間存在負相關(guān)性(P<0.01)，但與 GST-π 之間無相關(guān)性(P>0.05)。結(jié)論化療抑制了P38 MAPK信號通路，增加了Survivin、ERCC1、GST-π的表達，進一步導(dǎo)致了耐藥性的發(fā)生，P38 MAPK信號通路開通可能是改善卵巢癌化療效果的理論途徑。

〔關(guān)鍵詞〕P38 MAPK通路；卵巢癌；耐藥性

卵巢癌是威脅女性生命的惡性腫瘤之一，由于缺乏有效的早期診斷，死亡率居女性腫瘤首位〔1〕。P38 MAPK 是絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)的重要亞家族成員，在應(yīng)激條件下，胞質(zhì)內(nèi)P38 可轉(zhuǎn)入核內(nèi)，進行磷酸化并調(diào)控相關(guān)基因表達。有研究提示，P38 MAPK受抑制可能是以順鉑為主的化療藥物耐藥的原因〔2〕。本文對P38 MAPK 通路受抑制對老年卵巢癌化療藥物耐藥性產(chǎn)生的作用進行實驗設(shè)計，探討可能的機制。

1材料與方法

1.1一般資料病例均來自于濟源市人民醫(yī)院婦科收治并經(jīng)寧夏醫(yī)科大學(xué)同一病理專家確認(rèn)的卵巢上皮癌病例57例，患者均為老年女性，年齡55～65歲，平均(55.3±4.6)歲。其中原發(fā)性卵巢上皮癌25例，術(shù)前未行放化療治療，患者均經(jīng)過病理確診為晚期卵巢上皮癌，需行手術(shù)治療，術(shù)后病理證實與術(shù)前診斷一致；復(fù)發(fā)性卵巢上皮癌32例，均行TP或CP方案化療6～8個療程達到臨床緩解，停藥半年后腫瘤再次復(fù)發(fā)。

1.2研究方法及材料檢測材料包括鼠抗人磷酸化P38多克隆抗體(Santa Cruz 公司)，兔抗人Survivin多克隆抗體(Santa Cruz 公司)，兔抗人耐藥相關(guān)蛋白切除修復(fù)交叉互補基因1(ERCC1)多克隆抗體(Santa Cruz 公司)，鼠抗人肺耐藥相關(guān)蛋白(LRP)多克隆抗體(北京中杉生物技術(shù)有限公司)，鼠抗人谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶(GST-π)多克隆抗體(北京中杉生物技術(shù)有限公司)，免疫組織化學(xué) SP 試劑盒(北京中杉生物技術(shù)有限公司)，DAB 顯色試劑盒(北京中杉生物技術(shù)有限公司)。 P-P38，Survivin，GST-π，ERCC1 及 LRP 采用免疫組織化學(xué)分析 SP 法，DAB 顯色，PBS 代替一抗作陰性對照，相同染色條件下的已知陽性片作為陽性對照。400倍光鏡下觀察切片。檢測標(biāo)準(zhǔn)和程序嚴(yán)格按照試劑說明書進行。

1.3數(shù)據(jù)分析采用SPSS18.0軟件行χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1P38 MAPK的表達情況25例原發(fā)性卵巢上皮癌中P38 MAPK陽性表達24例(96.0%)，32例復(fù)發(fā)性卵巢癌患者中陽性表達13例(40.6%)，與原發(fā)性卵巢上皮癌患者比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。

2.2Survivin、GST-π、ERCC1 及 LRP的表達情況25例原發(fā)性卵巢上皮癌中 Survivin陽性表達18例(72.0%)，ERCC1陽性表達17例(68.0%)，LRP陽性表達19例(76.0%)，GST-π陽性表達16例(64.0%)明顯低于復(fù)發(fā)性卵巢癌患者中各蛋白的陽性表達(均為100%，均P<0.01)。

2.3P38 MAPK與Survivin、GST-π、ERCC1及LRP表達的相關(guān)性通過對P38 MAPK與 Survivin、ERCC1、LRP、GST-π表達相關(guān)性的分析，結(jié)果顯示P38 MAPK與Survivin、ERCC1、LRP之間存在負相關(guān)性(r=-0.388、-0.399、-0.395，均P<0.01)，但與 GST-π 之間無相關(guān)性(r=-0.069，P>0.05)。

3討論

研究顯示，腫瘤對化療藥物產(chǎn)生耐藥性是導(dǎo)致腫瘤化療失敗或療效差的主要原因，可能存在交叉耐藥性〔3〕。有學(xué)者明確指出，先期化療耐藥性的產(chǎn)生可導(dǎo)致后期治療無效〔4〕。研究認(rèn)為化療藥物產(chǎn)生耐藥性主要有三個途徑：(1)藥物外排增加(如MRP)，不能使細胞內(nèi)藥物濃度達到有效濃度；(2)藥物失活增加(如GST)，藥物代謝失活；(3)DNA損傷修復(fù)發(fā)揮作用〔5〕。國內(nèi)外多項研究顯示，p38 MAPK通路被抑制可能為順鉑等化療藥物發(fā)生機體耐藥的原因〔6〕。Losa 和Mansouri 等〔7，8〕的研究也對此有所提示。項濤等〔9〕報道上調(diào)P38可以提高A2780多腫瘤細胞對順鉑等化療藥物的敏感性，這也佐證了上述國外研究。

MAPKs是胞內(nèi)信號傳導(dǎo)的重要通路，是多個信號傳遞的交點和共同通路，在細胞質(zhì)內(nèi)分布廣泛，將細胞外刺激信號傳遞至細胞核內(nèi)，影響著細胞增殖、分化和應(yīng)激的調(diào)控〔10〕。三級激酶級聯(lián)傳遞信號是該家族信號傳導(dǎo)的共同特點。P38是MAPK家族中重要的一員，具有α，β，δ和γ四個亞型，其中P38α具有調(diào)節(jié)細胞增殖、生存、分化的作用。近些年，對P38介入炎性反應(yīng)而發(fā)病的研究較為廣泛，研究顯示其具有細胞免疫調(diào)節(jié)、炎癥反應(yīng)調(diào)控的重要作用，在生物學(xué)刺激下經(jīng)過磷酸化等激活，可在細胞核等重要部位發(fā)揮作用〔11〕。本研究結(jié)果顯示，P38 MAPK通路被抑制可增加Survivin、ERCC1、LRP、GST-π的陽性表達，促進了耐藥性的增加。根據(jù)后期的隨訪，也發(fā)現(xiàn)P38 MAPK與卵巢上皮癌的預(yù)后密切相關(guān)，需要進一步研究。綜上所述，化療抑制了P38 MAPK信號通路，但增加了Survivin、ERCC1、GST-π的表達，導(dǎo)致了耐藥性的發(fā)生，P38 MAPK信號通路的重新開通可能是改善卵巢癌化療效果的理論途徑。

4參考文獻

1Bristow RE，Tomacruz RS，Amstrong DK，etal.Survival effect of maximal cytoreductive surgery for advanced ovarian carcinoma during the platinumera：a meta-analysis〔J〕.Clin Oncol，2002；20(5)：1248.

2Coukos G，Rubin SC.Chemotherapy resistane in ovarian cancer：new molecular perspectives〔J〕.Obst Gynecol，1998；91(5)：783-92.

3焦今文，王蕾，溫放，等.p38 MAPK在不同療程化療后卵巢癌中的表達及臨床意義〔J〕.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志，2011；15：1828-34,1838.

4Gershenson D.Treatment of advanced ovarian cancer〔M〕.Alexandria，VA：ASCO Educational Book，2000：130.

5Sun P，Yoshizuka N，New L，etal.PRAK is essential forras-induced senescence and tumor suppression〔J〕.Cell，2007；128：295-308.

6Wong SH，Shih RS，Schoene NW，etal.Zinc-induced G2/M blockage is p53 and p21 dependent in normal human bronchial epithelial cells〔J〕.Am J Physiol Cell Physiol，2008;294：C1342-9.

7Losa JH，Paradacobo C，Viniegra JG，etal.Role of the P38MAPK pathway in cisplatin-based therapy〔J〕.Oncogene，2003;22(26)：3998-4006.

8Mansouri A，Ridgway LD，Korapati AL，etal.Sustained activation of JNK/p38MAPK pathways in response to cisplatin leads to Fas ligand induction and cell death in ovarian carcinoma cells〔J〕.J Biol Chem，2003;278(21)：19245-56.

9項濤，夏曦，王世宣，等.上調(diào) p38 表達提高卵巢癌多細胞球體順鉑敏感性〔J〕.腫瘤防治研究，2008;35：157-60.

10Rahman L.Oxidativ stress in pathogenesis of chronic obstructive pulmonary disease：cellular and molecular mechanisms〔J〕.Cell Biochem Biophys，2005；43(1)：167-88.

11黃翠萍，楊和平，張珍祥，等.p38蛋白激酶對支氣管哮喘大鼠Th2類細胞因子表達的調(diào)控〔J〕.中國病理生理雜志，2006；22(2)：311-3.

〔2015-09-24修回〕

(編輯郭菁)

基金項目：國家自然科學(xué)基金項目(No.81460230)

通訊作者：常青(1974-)，男，博士，副教授，主要從事基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)教學(xué)及研究工作。

〔中圖分類號〕R737.9

〔文獻標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)11-2601-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.11.014

1濟源市婦幼保健院2寧夏醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院

第一作者：王素琴(1975-)，女，副主任醫(yī)師，主要從事婦產(chǎn)科臨床及科研工作。