陳政華

(濱州醫(yī)學(xué)院煙臺(tái)附屬醫(yī)院甲狀腺乳腺外科，山東　煙臺(tái)　264100)

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甲狀腺乳頭狀癌組織中血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子-C和PTEN蛋白的表達(dá)及其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

陳政華

(濱州醫(yī)學(xué)院煙臺(tái)附屬醫(yī)院甲狀腺乳腺外科，山東煙臺(tái)264100)

〔摘要〕目的探討淋巴管生成因子血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)-C和PTEN蛋白在甲狀腺乳頭狀癌(PTC)的表達(dá)及其與患者病理參數(shù)之間的相關(guān)性。方法采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)VEGF-C與PTEN蛋白在PTC組織75例及75例甲狀腺瘤患者組織中的表達(dá)情況；分析VEGF-C和PTEN蛋白之間的相關(guān)性及其與患者病理參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組VEGF-C蛋白陽(yáng)性表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，PTEN蛋白陽(yáng)性表達(dá)水平顯著低于對(duì)照組(P<0.05)；PTC中VEGF-C、PTEN蛋白表達(dá)在TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，VEGF-C、PTEN蛋白兩者在PTC中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.260，P<0.05)。結(jié)論P(yáng)TC患者VEGF-C及PTEN蛋白的表達(dá)與淋巴轉(zhuǎn)移存在密切相關(guān)，檢測(cè)PTC患者VEGF-C及PTEN蛋白的表達(dá)可作為判斷PTC轉(zhuǎn)移和預(yù)后的參考指標(biāo)。

〔關(guān)鍵詞〕甲狀腺乳頭狀癌；血管內(nèi)皮因子-C；PTEN蛋白

甲狀腺癌(TC)為機(jī)體常見(jiàn)惡性腫瘤之一，約占全身惡性腫瘤的1%〔1〕，其中，甲狀腺乳頭狀癌(PTC)在TC中所占比例高達(dá)80%〔2〕。研究報(bào)道〔2〕，PCT中有30%~80%患者可發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移，預(yù)后效果一般較差。對(duì)PTC患者發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移的機(jī)制尚不完全清楚，且缺乏評(píng)價(jià)PTC患者發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)及其預(yù)后的特異性指標(biāo)。研究顯示〔3〕，作為血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)家族最新發(fā)現(xiàn)的成員，VEGF-C可特異性作用于機(jī)體淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞，不僅能夠誘導(dǎo)腫瘤周邊組織發(fā)生淋巴管增生，且在促進(jìn)腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移中具有舉足輕重的作用〔4〕。PTEN是一種與腫瘤發(fā)生、發(fā)展存在密切關(guān)系的抑癌基因，研究發(fā)現(xiàn)〔5〕，PTEN參與多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移浸潤(rùn)。本研究旨在探討VEGF-C和PTEN的表達(dá)情況與PTC臨床病理特征的關(guān)系。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象選取2010年6月至2015年1月我院行手術(shù)治療確診為原發(fā)腫瘤的150例患者，所有切除標(biāo)本術(shù)后均經(jīng)病理確診，患者臨床資料完整，均未合并甲狀腺其他疾病，均為初次手術(shù)且未經(jīng)過(guò)任何治療，排除合并心、肝、腎功能不全及其他惡性腫瘤患者。PTC患者切除標(biāo)本75例作為觀察組，其中男25例，女50例；年齡28~74〔平均(42.83±7.38)〕歲，淋巴轉(zhuǎn)移患者42例，未發(fā)生轉(zhuǎn)移患者33例，TNM分期：T1/T2 期患者38例，T3 /T4期37例。選取甲狀腺瘤患者切除標(biāo)本75例作為對(duì)照組，男28例，女47例；年齡26~71〔平均(43.23±8.37)〕歲。兩組患者年齡、性別比較，均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法采用免疫組織化學(xué)SP法檢測(cè)患者癌旁組織與PTC組織中VEGF-C和PTEN表達(dá)情況，DAB顯色試劑盒和SP法試劑盒購(gòu)于北京國(guó)貿(mào)生物技術(shù)公司，兔抗人VEGF-C多克隆抗體購(gòu)于北京栗康生物公司，濃縮型兔抗人PTEN蛋白多克隆抗體(1∶800)購(gòu)自北京科達(dá)生物技術(shù)公司。使用中性10%甲醛對(duì)150例標(biāo)本進(jìn)行固定，石蠟包埋，制取4 μm厚度標(biāo)準(zhǔn)切片后，采用免疫組化法進(jìn)行染色。用陽(yáng)性乳腺癌切片為陽(yáng)性對(duì)照，用磷酸鹽緩沖液(PBS)取代一抗為陰性對(duì)照，所有實(shí)驗(yàn)操作均嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.3結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)染色組織細(xì)胞出現(xiàn)棕色顆粒表示陽(yáng)性表達(dá)。VEGF-C蛋白陽(yáng)性表達(dá)主要于細(xì)胞胞質(zhì)。由3名病理醫(yī)師采用雙盲方法對(duì)150例例切片進(jìn)行閱片。每張切片至少選取10個(gè)不同視野于高倍鏡下(×400)觀察，以此來(lái)判斷組織細(xì)胞著色率與染色強(qiáng)度〔6〕。采用半定量十三點(diǎn)評(píng)分法對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定；陽(yáng)性細(xì)胞百分比0分為無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞；陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤10%計(jì)為1分；10%<陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤50%計(jì)為2分；50%<陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤80%計(jì)為3分；染色強(qiáng)度按陰性、弱、中等、強(qiáng)染色分別計(jì)為0~3分。著色強(qiáng)度：未著色計(jì)為0分，淺棕色計(jì)為1分，棕色計(jì)為2分，深棕色計(jì)為3分。兩個(gè)指標(biāo)乘積為最終評(píng)價(jià)結(jié)果：0~1分為陰性表達(dá)，2~3分為陽(yáng)性表達(dá)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS19.0軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Spearman檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1兩組患者VEGF-C與PTEN蛋白的表達(dá)情況實(shí)驗(yàn)組VEGF-C及PTEN蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為58.14%(43/75)和33.33%(25/75)，兩組比較差異顯著(P<0.05)。

2.2PTC臨床病理特征與VEGF-C和PTEN蛋白表達(dá)水平之間的關(guān)系不同TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者間VEGF-C、PTEN蛋白表達(dá)水平比較差異顯著(P<0.05)，不同年齡、性別間的EGF-C、PTEN蛋白表達(dá)水平間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。相關(guān)性分析顯示PTC患者中VEGF-C與PTEN蛋白的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)(r=-0.301，P<0.05)。

3討論

PTC是臨床上常見(jiàn)的頭頸部惡性腫瘤，好發(fā)于年輕女性，且發(fā)病率有逐年上升的趨勢(shì)。淋巴道是PTC轉(zhuǎn)移的主要方式，臨床上常常有以頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶為首發(fā)癥狀的PTC患者，且淋巴道轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致術(shù)后復(fù)發(fā)的主要原因。VEGF-C在腫瘤組織中表達(dá)水平較高，與惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及淋巴道轉(zhuǎn)移均存在密切關(guān)系。研究報(bào)道，VEGF-C可激活淋巴內(nèi)皮細(xì)胞上的VEGFR-3并與之結(jié)合，引起局部病灶組織淋巴管生成與增生，腫瘤細(xì)胞可通過(guò)基底膜不完整的新生淋巴管進(jìn)入淋巴系統(tǒng)，發(fā)生淋巴轉(zhuǎn)移；同時(shí)，VEGF-C能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞分泌相應(yīng)的細(xì)胞因子，改變局部組織微環(huán)境，使腫瘤細(xì)胞在淋巴系統(tǒng)中更易生存，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞經(jīng)淋巴道轉(zhuǎn)移〔7〕。此外，VEGF-C 也可激活血管內(nèi)皮細(xì)胞的VEGF受體-2(VEGFR-2)并與其結(jié)合，促使血管新生TC組織中VEGF-C的表達(dá)，且在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移腫瘤組織中VEGF-C表達(dá)水平更高〔8〕。本研究說(shuō)明VEGF-C在CT的轉(zhuǎn)移中扮演者重要的角色，與既往研究結(jié)果一致〔8〕。

PTEN是繼P53后人類腫瘤中突變與缺失率最高的抑癌基因，研究表明〔9〕，PTEN突變和缺失源存在于大多數(shù)腫瘤中，其主要通過(guò)磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)信號(hào)通路發(fā)揮作用。PI3K/AKT信號(hào)通路能夠參與調(diào)節(jié)機(jī)體細(xì)胞增殖、分化與凋亡等過(guò)程，其可被非受體酪氨酸激酶或受體酪氨酸激酶活化，活化AKT進(jìn)一步激活下游因子，發(fā)揮調(diào)節(jié)血管生成、細(xì)胞增殖及凋亡的作用。PTEN可拮抗PI3K/AKT通路，可以調(diào)控細(xì)胞周期、滅活多種凋亡效應(yīng)分子、促進(jìn)血管生成、遷移相關(guān)程序、激活端粒酶活性等途徑促進(jìn)腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和侵襲〔9〕。此外，PTEN具有下調(diào)VEGF表達(dá)抑制血管生長(zhǎng)的作用。當(dāng)PTEN蛋白表達(dá)缺失或降低時(shí)會(huì)失去對(duì)PI3K/AKT的下調(diào)作用，促進(jìn)VEGF-C合成，誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞增生、腫瘤微淋巴管及血管形成，引起腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移〔10〕。本研究提示PTEN低表達(dá)與CT的發(fā)生發(fā)展具有良好的相關(guān)性，PTEN有可能成為甲狀腺癌惡性程度的潛在標(biāo)志物，可作為臨床觀察 PTC發(fā)展的重要檢測(cè)指標(biāo)。

4參考文獻(xiàn)

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〔2015-10-19修回〕

(編輯袁左鳴)

〔中圖分類號(hào)〕R73

〔文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A

〔文章編號(hào)〕1005-9202(2016)05-1124-02；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.05.047

第一作者：陳政華(1975-)，男，主治醫(yī)師，主要從事甲狀腺乳腺疾病方向的研究。