康世瑾 安淑敏 劉志遠(yuǎn) 李宇新 李冬玲

（雞西市人民醫(yī)院，黑龍江 雞西 158100）

免疫組化技術(shù)在病理診斷中的應(yīng)用

康世瑾 安淑敏 劉志遠(yuǎn) 李宇新 李冬玲

（雞西市人民醫(yī)院，黑龍江 雞西 158100）

免疫組化技術(shù)在臨床病理診斷中的應(yīng)用已逐漸成熟，目前很多腫瘤都是采用免疫組化技術(shù)進(jìn)行病理診斷，該技術(shù)對(duì)準(zhǔn)確診斷及鑒別惡性腫瘤具有重要作用，但在應(yīng)用過(guò)程中也存在一些問(wèn)題。本文較深入地探討了免疫組化技術(shù)的相關(guān)理論，對(duì)應(yīng)用免疫組化技術(shù)過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題進(jìn)行了分析，并有針對(duì)性地提出相應(yīng)處置措施。

免疫組化；腫瘤診斷；臨床應(yīng)用

在病理診斷中應(yīng)用免疫組化技術(shù)始于20世紀(jì)70年代，現(xiàn)在已廣泛應(yīng)用于病理診斷，并成為病理醫(yī)師工作中不可缺少的重要內(nèi)容，該技術(shù)在病理診斷尤其是診斷鑒別腫瘤方面具有十分重要的作用。應(yīng)用該技術(shù)為治療有關(guān)腫瘤組織抗原及預(yù)后提供重要參考依據(jù)，但是也存在一些問(wèn)題。

1　免疫組化技術(shù)原理

免疫組化技術(shù)在本質(zhì)上免疫組化染色技術(shù)，主要是對(duì)抗體結(jié)合組織中的一部分特殊抗原采用特別染色的技術(shù)［1］。相互結(jié)合的抗體抗原通常以結(jié)合抗體的酶元素顯示，主要是因不具有著色物質(zhì)特性，結(jié)合抗體而導(dǎo)致病原體、蛋白質(zhì)及多肽等有色物質(zhì)在結(jié)合抗體抗原的位置發(fā)生沉淀。一般情況下，只有采用光學(xué)顯微鏡才能觀察到有色物質(zhì)。在組織固定時(shí)，甲醛可促進(jìn)蛋白凝固和交聯(lián)，使蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)產(chǎn)生相應(yīng)變化，但不會(huì)影響抗原決定鏃的結(jié)構(gòu)。采用蛋白酶消化時(shí)，將清除掉抗原決定鏃中的部分雜蛋白，進(jìn)而使交聯(lián)打開(kāi)，利用微波等熱抗原修復(fù)工具，最大化暴露抗原決定鏃，使免疫組化染色提高敏感性。免疫組化技術(shù)中的甲醛常規(guī)固定法目前應(yīng)用的較多，尤其是在石蠟包埋組織切片病理診斷中應(yīng)用。

2　應(yīng)用免疫組化技術(shù)過(guò)程中的常見(jiàn)問(wèn)題

基于免疫組化染色切片才能實(shí)現(xiàn)免疫組化染色技術(shù)的正確診斷和鑒定，利用病理醫(yī)師與技術(shù)人員之間的協(xié)調(diào)配合，才能順利完成免疫組化染色切片。但通常在免疫組化切片過(guò)程中容易產(chǎn)生假陽(yáng)性、假陰性及背景著色與邊緣反應(yīng)等一些常見(jiàn)問(wèn)題［2］。

2.1假陽(yáng)性：假陽(yáng)性主要是指在實(shí)施免疫組化切片的過(guò)程中，全部切片都產(chǎn)生弱陽(yáng)性反應(yīng)，或在相同組織細(xì)胞中的胞核中某組抗體都產(chǎn)生陽(yáng)性反應(yīng)。而且，積壓區(qū)、壞死區(qū)、切片邊緣及刀痕區(qū)等部位也產(chǎn)生陽(yáng)性染色現(xiàn)象，這都顯示出具有假陽(yáng)性表現(xiàn)。產(chǎn)生假陽(yáng)性的原因主要有：一是抗體具有較高的濃度；二是可能是多抗原與抗體之間產(chǎn)生相互交叉反應(yīng)；三是進(jìn)行一抗孵育的整個(gè)過(guò)程時(shí)間較長(zhǎng)或處于較高的溫度中；四是DAB顯色與變質(zhì)需較長(zhǎng)的產(chǎn)生時(shí)間，其中顯色只在5～10 min產(chǎn)生，并利用顯微鏡觀察達(dá)到最優(yōu)效果；五是切片浸泡在修復(fù)液或緩沖液中的時(shí)間超過(guò)24 h，時(shí)間相對(duì)較長(zhǎng)；六是多克隆抗體具有抗變質(zhì)、質(zhì)量差的特點(diǎn)，應(yīng)特別重視抗體有效期，產(chǎn)生過(guò)期的抗體一般都是背景著色或根本不會(huì)顯色。七是酸堿性（pH值）在緩沖液中的具體數(shù)值不合理，或洗滌過(guò)程不徹底等。

2.2假陰性：通常在免疫組化切片過(guò)程中，一般都會(huì)產(chǎn)生假陰性結(jié)果。假陰性的表現(xiàn)主要是，全部被標(biāo)記過(guò)的抗體切片都產(chǎn)生陰性反應(yīng)。但在臨床實(shí)際中真實(shí)情況并不是這樣，因此被稱為假陰性。假陰性產(chǎn)生的主要原因是，一是要檢查的細(xì)胞或組織在免疫組合染色切片中根本就不存在，這通常是因有關(guān)人員將抗體、切片或蠟塊等物品選錯(cuò)；二是在實(shí)施染色過(guò)程中也許在某幾個(gè)環(huán)節(jié)中的步驟沒(méi)有嚴(yán)格遵循技術(shù)操作要求而產(chǎn)生一些問(wèn)題；三是在處理標(biāo)本的過(guò)程中，沒(méi)有采取比較科學(xué)合理的方法，或產(chǎn)生抗原丟失或弱化的現(xiàn)象，通常腫瘤細(xì)胞處于不同代謝和分化狀態(tài)，其抗原表達(dá)一般也容易在一致性方面產(chǎn)生不完全的情況［3］。腫瘤細(xì)胞在一般情況下，越低的分化就表現(xiàn)出越低的抗原表達(dá)，陽(yáng)性表明越弱，在細(xì)胞數(shù)量方面陽(yáng)性也相對(duì)較少。

2.3背景著色與邊緣反應(yīng)：背景著色主要是對(duì)進(jìn)行標(biāo)記后的細(xì)胞以外的其他成分進(jìn)行著色，間質(zhì)著色主要包括抗體具有過(guò)高的濃度，底物需要過(guò)長(zhǎng)的顯色時(shí)間，或內(nèi)源性酶阻斷未完全等較多的原因。此外，純度不夠的抗體或被污染的抗體也容易產(chǎn)生間質(zhì)著色。切片邊緣表現(xiàn)出較強(qiáng)的陽(yáng)性的主要原因是玻片沒(méi)有進(jìn)行徹底的清潔處理，滴加液體試劑受表面張力作用影響固縮到組織切片邊緣及PBS沒(méi)有進(jìn)行徹底沖洗等。

2.4免疫組化技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)化：在應(yīng)用免疫組化技術(shù)時(shí)，通常會(huì)產(chǎn)生上述的三方面問(wèn)題，對(duì)其歸納可知其最大原因就是免疫組染色切片不具有標(biāo)準(zhǔn)措施或步驟。所以，一定要對(duì)免疫組化技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)化，一是規(guī)范有關(guān)行為的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)，推薦采用中性福爾馬林，一般不要超過(guò)7 d固定時(shí)間。標(biāo)準(zhǔn)化的組織制備流程使其狀態(tài)保持最佳，過(guò)高的烤片及埋蠟溫度或過(guò)長(zhǎng)時(shí)間都會(huì)對(duì)抗原活性產(chǎn)生影響。二是陰性對(duì)應(yīng)用照片特別重要，能夠降低內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的干擾。三是抗原修復(fù)一致性，采用微波等作為熱抗原修復(fù)工具，可提高修復(fù)溫度與修復(fù)時(shí)間的精確性［4］。

3　結(jié) 語(yǔ)

總之，在臨床應(yīng)用免疫組化技術(shù)的過(guò)程中，應(yīng)特別注意存在的問(wèn)題，并采取有針對(duì)性地措施進(jìn)行妥善解決，主要是使有關(guān)環(huán)節(jié)達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)化，并提高對(duì)標(biāo)準(zhǔn)化的重視程度，采取標(biāo)準(zhǔn)化程序進(jìn)行操作，對(duì)免疫組化技術(shù)質(zhì)量進(jìn)行科學(xué)控制，進(jìn)而才能在病理診斷、預(yù)后判斷及臨床治療中發(fā)揮十分重要的作用。

［1］ 李向紅.醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化的方向［J］.中華病理學(xué)雜志，2004，33（6）：591-592.

［2］ 魏兵，步宏.英國(guó)國(guó)家免疫細(xì)胞化學(xué)外部質(zhì)量評(píng)估方案及其乳腺病理應(yīng)用模式［A］.全國(guó)乳腺疾病病理學(xué)診斷及研究進(jìn)展研討會(huì)，2003.

［3］ 鄭杰，鄒萬(wàn)忠，吳秉銓.成功開(kāi)展免疫組織化學(xué)的關(guān)鍵是標(biāo)準(zhǔn)化［J］.中華病理學(xué)雜志，1996，25（6）：323-325.

［4］ 趙利珍，甄美華，耿麗萍.應(yīng)用免疫組化技術(shù)的幾點(diǎn)體會(huì)［J］.內(nèi)蒙古醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，1998（4）：274-275.

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