劉　淳

(北京市東城區(qū)疾病預(yù)防控制中心 ，北京 100009)

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超高效液相色譜測定豬肉中喹乙醇的殘留量

劉淳

(北京市東城區(qū)疾病預(yù)防控制中心 ，北京 100009)

摘要：建立了超高效液相色譜測定豬肉中喹乙醇的方法。樣品溫水提取，用亞鐵氯化鉀和乙酸鋅沉淀蛋白，超高效液相色譜-紫外檢測器測定。色譜柱BEH C181.7μm× 50mm×2.1mm，用不同體積的甲醇和水混合作為流動相梯度洗脫，檢測波長380nm；流速0.3mL/min；柱溫40℃；進樣量3μL。喹乙醇的質(zhì)量濃度分別一定范圍內(nèi)與其峰面積呈線性關(guān)系，檢出限(3S/N)為0.015μg/g。以空白豬肉為基體進行加標回收試驗，回收率在92.3%～97.8%之間，相對標準偏差(n=6)在1.2%～2.6%之間。結(jié)論：本方法適用于豬肉中喹乙醇的測定。

關(guān)鍵詞：超高效液相色譜法；喹乙醇；殘留量；豬肉

喹乙醇(Olaquindox)是1965年由德國Bayer公司以鄰硝基苯胺為原料合成的一種抗菌促生長劑，最初用于防治仔豬腹瀉，1976年歐共體批準用于畜禽飼料添加劑，國內(nèi)于1981年研制成功，廣泛應(yīng)用于養(yǎng)殖業(yè)。喹乙醇的毒性隨動物種屬不同存在較大差異，特別對禽和魚類，有中度至明顯蓄積毒性和一定遺傳毒性，對部分魚類有明顯致畸作用。鑒于此，中華人民共和國獸藥典明確規(guī)定，喹乙醇作為抗菌促生長劑，僅限用于35kg以下豬的促生長，以及防治仔豬黃痢、白痢，豬沙門氏菌感染，休藥期35d；禁用于體重超過35kg以上的豬和禽、魚等其他種類動物[1-14]。

1儀器及試劑

1.1　儀器

H-Class超高效液相色譜儀：美國Waters公司；3-30K冷凍高速離心機：Sigma公司；S XS204電子天平：梅特勒-托利多公司；純水機：法國Milli-Q公司；K-1快速混勻器：國華儀器廠；新佳水浴恒溫振蕩鍋：江蘇省金楊市洪華儀器廠； H127633飛利浦食品加工機：飛利浦公司。

1.2　試劑

甲醇：色譜純；亞鐵氯化鉀：分析純；乙酸鋅：分析純；喹乙醇標準品：Dr.Ehrenstrfer公司

1.2.1　喹乙醇標準儲備液

精確稱取喹乙醇標準品0.0100g，用少量高純水溶解，并轉(zhuǎn)移到100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此喹乙醇標準儲備液濃度100.00μg/mL。

1.2.2　喹乙醇標準使用液

取喹乙醇標準儲備液10.00mL，轉(zhuǎn)移到100mL棕色容量瓶中，用甲醇定容至刻度，此喹乙醇標準使用液濃度10.00μg/mL。此標準使用液需置于棕色容量瓶內(nèi)避光冷藏保存，保存期1個月，使用時再用甲醇稀釋至所需濃度。

2試驗方法

2.1　樣品提取

取適量粉碎混勻的樣品于50mL離心管中，加10.0mL高純水，漩渦混勻30s，放入恒溫水浴中60℃避光振蕩提取15min[1]。取出加入5.0mL亞鐵氯化鉀和5.0mL乙酸鋅沉淀蛋白，用高純水定容至25.00mL，10000r/min離心10min，避光靜置20min。取上清液過0.22μm微孔濾膜，待測。

2.2　色譜條件

色譜柱：ACQUITY UPLC BEH C18柱(50mm×2.1mm，1.7μm)；流動相甲醇(A)+水(B)，梯度洗脫條件見表1[2]；流速：0.3mL/min；柱溫：40℃；進樣量：3μL。

2.3　標準工作曲線的制作

取適量喹乙醇標準使用液，用流動相稀釋成喹乙醇濃度分別為0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、10.00μg/mL、15.00μg/mL、20.00μg/mL系列標準工作液。根據(jù)喹乙醇標準品的保留時間定性，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。

表1　流動相梯度洗脫程序

2.4　回收率和精密度

稱取10g空白樣品，加入不同量的喹乙醇標準溶液，漩渦混勻放置30min后按上述方法進行前處理和上機分析。

3結(jié)果分析與討論

3.1　樣品色譜圖

按色譜條件進行分析，圖1為喹乙醇標準品的色譜圖，其保留時間為1.190min，峰型良好。圖2為未添加喹乙醇的豬肉樣品的色譜圖，雜質(zhì)峰和溶劑峰分別在1.00min之前和2.00min之后。圖3為添加0.04μg/mL喹乙醇豬肉樣品色譜圖，喹乙醇保留時間為1.204min，喹乙醇能良好地和豬肉中的雜質(zhì)分開，說明上述檢測豬肉中喹乙醇殘留量的色譜條件和樣品前處理方法是可行的。

圖1　喹乙醇(OLA)標準品色譜圖

圖2　未添加喹乙醇(OLA)豬肉樣品色譜圖

圖3　添加0.04μg/mL喹乙醇(OLA)豬肉樣品色譜圖

3.2　標準曲線結(jié)果及檢出限

分別配制喹乙醇標準品工作曲線濃度為0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL；1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、15.00μg/mL、20.00μg/mL。

實驗結(jié)果表明喹乙醇濃度在0.10μg/mL、0.20μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL；1.00μg/mL、2.00μg/mL、5.00μg/mL、15.00μg/mL、20.00μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，回歸方程分別為y=22991x+87.00和y=23240x+39.16，相關(guān)系數(shù)為R2=0.9999，工作曲線如圖4和圖5所示。以10倍信噪比為基準，經(jīng)實際加標測得喹乙醇在豬肉中檢出限為0.05μg/g。

圖4　喹乙醇工作曲線圖線性范圍：0.10～2.00μg/mL

圖5　喹乙醇工作曲線圖線性范圍：1.00～20.00μg/mL

3.3　準確度和精密度

對0.10μg/mL，1.00μg/mL標準溶液分別進行6次重復(fù)測定，結(jié)果見表2，標準偏差為1.7%和0.3%。

表2　精密度試驗(n=6)

以空白豬肉為測試對象，通過由低到高的3個濃度下加標回收率和精密度實驗，以考察方法的準確度和精密度。另選定加標濃度的空白豬肉樣品，連續(xù)測定3d，計算批件間精密度，實驗結(jié)果見表3和表4。

表3　空白樣品不同加標濃度下的回收率和精密度實驗(n=6)

表4　批間精密度實驗(n=6)

從實驗結(jié)果可知在加標量為0.10、1.00、2.00三個梯度下，回收率在92%～103%之間，相對標準偏差小于10%，批間相對標準偏差也小于10%，結(jié)果表明該方法回收率和精密度可以滿足獸藥殘留檢測要求。

4討論

喹乙醇極易溶于熱水，所以采用溫水提取喹乙醇。為消除雜質(zhì)對喹乙醇的干擾及降低檢出限，采用沉淀蛋白的方法，純化提取喹乙醇，經(jīng)過試驗研究，該法獲得成功。

喹乙醇見光分解速度很快，要獲得理想的回收率和較低的檢出限，必須對樣品前處理進行全程避光操作，標準使用液要貯存在棕色容量瓶中。

方法具有操作簡單、準確度高、重現(xiàn)性好，檢出限低等優(yōu)點，可進行豬肉批量檢測。

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Determination of olaqunindox residue in pork by ultra high performance liquid chromatography.

LiuChun(CenterforDiseaseControlandPreventionofDongchengDistrictofBeijing,Beijing100009,China)

Abstract:The target analyst was extract form samples with water, involved protein precipitation with zinc acetate and ferrous potassium chloride. Chromatographic column: BEH C181.7μm×50 mm×2.1mm, detection wavelength: 380nm, flow rate: 0.3mL/min, column temperature: 40℃, injection volume: 3μL, and separated with mixtures of methanol and water mixed in different rations as mobile phases. Result: Linear relationships between values of peak area and concentration of olaqunindox was obtained in the definite rages, with detection limits of(3S/N)0.05μg/g. Using samples of blank pork as matrixes, tests for recovery were made by standard addition method, and values of recovery were in rage of 92%-103%, and values of RSD’s (n=6)were in the rage of 1.2%-2.6%. The method is suitable for determination of olaqunindox residue in pork.

Key words：UPLC; olaqunindox; residue; pork

收稿日期：2014-08-08

DOI:10.3936/j.issn.1001-232x.2015.02.010

作者簡介：劉淳，女，1986出生，檢驗士，碩士研究生，主要從事食品理化檢驗工作。