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滇重樓須根中的化學(xué)成分*

文彥詩(shī)，耿圓圓，王軍民，華燕

(西南林業(yè)大學(xué)，云南昆明650224)

摘要：為研究滇重樓須根中的化學(xué)成分，通過(guò)D101大孔樹(shù)脂、硅膠柱層析、反相硅膠(Rp-18)、Sephadex LH-20和半制備HPLC等多種分離方法，對(duì)滇重樓干燥須根的乙醇提取物進(jìn)行了化學(xué)成分研究。根據(jù)現(xiàn)代波譜學(xué)(NMR和質(zhì)譜MS)技術(shù)，從中分離并鑒定了1個(gè)三萜，1個(gè)黃酮和2個(gè)甾體皂苷化合物，它們的結(jié)構(gòu)分別鑒定為烏索酸(1)，三裂鼠尾草素(2)，重樓皂苷Ⅴ(3)，重樓皂苷Ⅵ(4)。其中，化合物1和2為首次從該屬植物中分離得到。

關(guān)鍵詞：重樓屬；滇重樓；須根；化學(xué)成分

滇重樓(Parispolyphyllavar.yunnanensis)隸屬于百合科(Liliaceae)重樓屬(Paris)植物，為多年生草本。其根莖(藥用部位)在中國(guó)有著悠久的藥用歷史，是一種具有很高藥用價(jià)值的傳統(tǒng)中藥。其具有清熱解毒、消腫止痛和熄風(fēng)定驚的功效，常用于療瘡癰腫、咽喉腫痛、蛇蟲(chóng)咬傷、跌撲傷痛和驚風(fēng)抽搐[1]。重樓屬植物全世界共有24種和10變種，主要分布于歐亞大陸的熱帶及溫帶地區(qū)，在中國(guó)有19種和10變種，主要分布于云南、貴州、四川等省[2]。目前，從本屬植物中報(bào)道的主要成分為甾體皂苷[3]、蛻皮激素[4]和三萜類[5]等化合物。同時(shí)藥理活性研究表明，這些化合物具有多方面的生物活性，如抗癌[6～8]、抗生育[9]、抗炎[10]和止血[11]等。由于近年來(lái)對(duì)滇重樓根莖藥用需求量越來(lái)越大，加上長(zhǎng)期的濫采濫挖，已使該植物資源嚴(yán)重枯竭。由于滇重樓地上部分(非藥用部位)也含有大量的甾體皂苷類化合物[12]，而滇重樓的須根部位化學(xué)成分方面的研究未見(jiàn)報(bào)道。為了充分利用該植物資源，對(duì)采自云南景東地區(qū)滇重樓的須根部分進(jìn)行了化學(xué)成分的研究，從中分離得到1個(gè)三萜，烏索酸(1)，1個(gè)黃酮，三裂鼠尾草素(2)，以及2個(gè)螺甾烷型甾體皂苷類型的化合物，重樓皂苷Ⅴ(3)和重樓皂苷Ⅵ(4)。其中，化合物1和2為首次從該屬植物中分離得到。

1材料與方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)材料

滇重樓干燥須根部分5.0 kg。藥材樣品由本課題組于2013年10月采自云南省景東地區(qū)，由中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所陳昌祥研究員鑒定，標(biāo)本保存在中國(guó)科學(xué)院昆明植物研究所植物化學(xué)與西部植物資源持續(xù)利用國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室。

1.1.2主要儀器和試劑

1D NMR譜用Avance III 600兆超導(dǎo)核磁共振儀測(cè)定，以TMS為內(nèi)標(biāo)，化學(xué)位移δ用Hz表示，耦合常數(shù)J用Hz表示；MS由Bruker HTC/Esquire spectrometer質(zhì)譜儀測(cè)定；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(瑞士步琪)；反相色譜用Bruker AM-681制備型中壓液相色譜；分析和半制備用Agilent 1100高效液相色譜儀，半制備色譜柱為Agilent公司的ZORBAX SB-C18反相柱。薄層層析硅膠板GF254板和柱層析硅膠(80～100目，200～300目，300～400目及硅膠H)均為青島海洋化工廠產(chǎn)品；凝膠Sephadex LH-20(Amershm生科公司)；反相填充材料Rp-18(40～60 μm,Merck公司產(chǎn)品)。

氯仿(工業(yè)純重蒸)；甲醇(工業(yè)純重蒸)；純凈水(娃哈哈公司)；乙腈(色譜純)。10 %硫酸-乙醇溶液(v/v)。

1.2化學(xué)成分的提取分離

滇重樓干燥須根藥材5.0 kg，粉碎后用75 %的乙醇回流提取3次(3 h，2 h和2 h)。合并提取液并減壓濃縮回收乙醇，得到浸膏697.2 g。

浸膏用溫水溶解后，經(jīng)D101大孔吸附樹(shù)脂，依次用乙醇-水(20 %，45 %，70 %和95 %)依次洗脫。70 %的乙醇洗脫部分減壓濃縮得到220 g粗品。后用300 g(80～100目)硅膠拌樣，用2.5 kg硅膠(200～300目)干法裝柱，用氯仿-甲醇(5︰1→1︰1)梯度洗脫，TLC檢測(cè)后合并得到2個(gè)組分(Fr.1和2)。

Fr.1(102 g)部分取5 g經(jīng)硅膠柱層析(氯仿-甲醇，4︰1→2︰1)洗脫，TLC檢測(cè)后合并得到2個(gè)組分Fr.1-1(4 g)和Fr.1-2(1 g)。

Fr.1-1(4 g)經(jīng)Rp-18(甲醇-水，20︰80→80︰20)梯度洗脫并經(jīng)Sephadex LH-20(氯仿-甲醇，1︰1)純化得到化合物1(26 mg)。Fr.1-2(1 g)部分經(jīng)硅膠柱層析(氯仿-甲醇，4︰1→2︰1)洗脫后經(jīng)Sephadex LH-20(氯仿-甲醇，1︰1)純化得到化合物2(12 mg)。

Fr.2(100 g)部分取5 g經(jīng)硅膠柱層析(氯仿-甲醇，5︰1→1︰1)洗脫，TLC檢測(cè)后合并得到2個(gè)組分Fr.2-1(2 g)和Fr.2-2(2 g)。

Fr.2-1(2 g)經(jīng)Rp-18(甲醇-水，35︰65→90︰10)梯度洗脫和半制備HPLC純化后得到化合物3(16 mg)。Fr.2-2(2 g)部分經(jīng)硅膠柱層析(氯仿-甲醇，5︰1→0︰1)洗脫和半制備HPLC純化后得到化合物4(10 mg)。

2結(jié)果與分析

從滇重樓須根中分離得到4個(gè)化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖1。

化合物1白色無(wú)定形粉末；分子式：C30H48O3；ESI-MSm/z:457 [M+H]+；1H-NMR(Pyridine-d5,150 MHz)data:δ5.44(1H,dd,J= 3.4,3.5 Hz,H-12)，1.20(3H,s,Me-23),1.26(3H,s,Me-27),0.99(3H,s,Me-25),1.05(3H,s,Me-30),0.96(3H,d,J= 6.8Hz,Me-29),0.92(3H,s,Me-26),0.91(3H,d,J=6.1Hz,Me-24)。13C-NMR(Pridine-d5,150 MHz)data:δ179.8(s,C-28),139.1(d,C-13),125.9(d,C-12),78.0(d,C-3),56.1(d,C-5)，53.8(d,C-18),48.3(d,C-9),48.3(q,C-17),42.7(q,C-14),40.2(q,C-8),39.7(s,C-1),114.0(d,C-19),39.7(d,C-20),39.6(q,C-4),39.2(t,C-21),37.3(t,C-22),37.1(q,C-10),33.4(t,C-7),30.9(t,C-21),75.4(q,C-23),28.7(t,C-15),28.5(t,C-2),24.8(t,C-16),24.8(t,C-16),23.8(q,Me-27),23.8(t,C-11),21.3(q,Me-30),18.6(t,C-6),17.4(q,Me-29),17.3(q,Me-26),16.4(q,Me-24),15.5(q,Me-25)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[3]報(bào)道一致,因此化合物1的結(jié)構(gòu)鑒定為ursolic acid [3-羥基-(3β)-烏索-12-烯-28-酸烏索酸]。

化合物2淡黃色無(wú)定形粉末；分子式：C18H16O6；ESI-MSm/z:329 [M+H]+；1H-NMR(Pyridine-d5,150 MHz)data:δ12.7(1H,br s,HO-5),8.07(2H,d,J= 8.8Hz,H-2′,H-6′),7.12(2H,d,J= 9.0 Hz,H-3′,H-5′),6.91(1H,s,H-8),6.91(1H,s,H-3),3.91(3H,s,7-OMe),3.82(3H,s,4′-OMe),3.73(3H,s,6-OMe)；13C-NMR(Pyridine-d5,150 MHz)data:δ183.0(s,C-4),164.7(s,C-2),162.7(s,C-4′),159.2(s,C-7),153.3(s,C-5),152.6(s，C-9),133.0(s,C-6),128.8(s,C-2′,C-6′),123.2(d，C-1′),115.4(d,C-3′,C-5′),103.6(s，C-10),103.6(s，C-3),91.4(s，C-8),60.4(q，6-OMe),56.2(q，7-OMe),55.6(q，4′-OMe)。該化合物數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[13]報(bào)道一致,因此化合物2結(jié)構(gòu)確定為salvigenin(5-羥基-4′,6,7-三甲氧基-1-笨并吡喃-4-酮)。

圖1　化合物1-4的化學(xué)結(jié)構(gòu)

化合物3白色無(wú)定形粉末；分子式：C39H62O12；ESI-MS:m/z= 723 [M+H]+，1H-NMR(Pyridine-d5，150 MHz)data:δ6.22(1H,s,H-Rha-1″),5.32(1H,m,H-6),4.51(1H,s,H-Glc-1′),1.20(3H,d,J=5.9Hz,H-Rha-6″),1.22(3H,d,J=6.9Hz,H-21),1.02(3H,s,H-19),0.79(3H,s,H-18),0.70(3H,d,J=3.6Hz),13C-NMRDEPT(Pyridine-d5,150 MHz)δ:140.6(s,C-5),121.5(d,C-6),109.6(s,C-22),102.1(d，Rha-C-1″),100.0(d，Glc-C-1′),62.3(d，C-17),81.6(s，C-16),73.0(d，Rha-C-2″),73.9(d，Glc-C-2′),78.0(d，Glc-C-4′),74.8(d，Rha-C-4″),72.4(d,Rha-C-3″),69.8(d,Rha-C-5″),66.5(t，C-26),61.4(d,Glc-C-6′),53.4(s，C-14),50.8(s，C-9),45.6(s，C-13),45.2(d，C-20),39.2(t，C-4),37.9(t，C-1),37.5(s，C-10),32.6(d，C-7),32.5(t，C-8),32.3(t，C-12,C-15),32.0(t，C-23),31.0(d，C-25),30.6(d，C-2),29.1(t，C-24),21.3(C-11),19.8(q，C-19),19.2(d,Rha-C-6″),17.1(q，C-27),17.5(q，C-18),9.8(q，C-21)?；衔?與文獻(xiàn)[4]所報(bào)道化合物重樓皂苷Ⅴ譜數(shù)據(jù)基本一致，故化合物3的結(jié)構(gòu)鑒定為:薯蕷皂苷元3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖苷。

化合物4白色無(wú)定形粉末；分子式：C39H62O13；ESI-MS:m/z=739[M+H]+，1H-NMR(Pyridine-d5，150MHz)δ:1H-NMR(Pyridine-d5，150 MHz)data:δ6.22(1H,s,H-Rha-1′′),5.32(1H,m,H-6),4.51(1H,s,H-Glc-1′),1.20(3H,d,J=5.9Hz,H-Rha-6″),1.22(3H,d,J=6.9Hz,H-21),1.02(3H,s,H-19),0.79(3H,s,H-18),0.70(3H,d,J=3.6Hz),13C-NMR DEPT(Pyridine-d5,150 MHz)δ:140.6(s,C-5),121.5(d,C-6),109.6(s,C-22),101.8(d，Rha-C-1″),100.0(d，Glc-C-1′),89.7(d，C-17),89.9(s，C-16),73.0(d，Rha-C-2″),73.9(d，Glc-C-2′),78.0(d，Glc-C-4′),74.8(d，Rha-C-4″),72.4(d,Rha-C-3″),69.8(d,Rha-C-5″),66.5(t，C-26),61.4(d,Glc-C-6′),53.4(s，C-14),50.8(s，C-9),45.6(s，C-13),45.2(d，C-20),39.2(t，C-4),37.9(t，C-1),37.5(s，C-10),32.6(d，C-7),32.5(t，C-8),32.3(t，C-12,C-15),32.0(t，C-23),31.0(d，C-25),30.6(d，C-2),29.1(t，C-24),21.3(C-11),19.7(q，C-19),19.1(d,Rha-C-6″),17.2(q，C-27),17.3(q，C-18),9.7(q，C-21)?；衔?與文獻(xiàn)[4]所報(bào)道化合物重樓皂苷Ⅵ譜數(shù)據(jù)基本一致，故化合物4的結(jié)構(gòu)鑒定為:pennogenin3-O-α-L-rhamnopyranosyl(1→2)-β-D-glucopyranoside {偏諾皂苷3-O-α-L-鼠李吡喃糖基(1→2)-β-D-葡萄吡喃糖苷}。

3結(jié)論與討論

對(duì)采自云南景東地區(qū)的滇重樓須根部分的乙醇提取物，綜合應(yīng)用多種分離材料和分離技術(shù)，從滇重樓須根部分70 %乙醇洗脫部分中共分離并通過(guò)核磁(NMR)和質(zhì)譜(MS)波譜數(shù)據(jù)鑒定了4個(gè)化合物，包括2個(gè)甾體皂苷(3和4)，并首次從重樓屬植物中得到1個(gè)烏蘇烷型五環(huán)三萜(1)和1個(gè)黃酮(2)類化合物。

滇重樓須根的化學(xué)成分研究報(bào)道較少，且在該屬植物中對(duì)黃酮和三萜類化合物的研究較少，本次實(shí)驗(yàn)為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用滇重樓須根的化學(xué)成分提供一定的理論依據(jù)。

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[上接第46頁(yè)]

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Chemical Constituents of the Fibrous Roots of Paris polyphylla var.yunnanensis

WEN Yan-shi,GENG Yuan-yuan,WANG Jun-min,HUA Yan

(Southwest Forestry University,Kunming Yunnan 650224,P.R.China)

Abstract:In order to clarify the chemical constituents of the fibrous roots of Paris Polyphylla var.yunnanensis,an phytochemical investigation on its fibrous roots was carried out.Four compounds were isolated on the basis of various chromatographies over D101 macroporous resin,normal and reverse phase silica gel(Rp-18),SephadexLH-20,and semi-prepative HPLC.Their structures were identified as ursolic acid(1),salvigenin(2),polyphyllin Ⅴ(3)and polyphyllin Ⅵ(4)on the by comparison of their NMR and MS data with those reported values.Among them,compounds 1 and 2 were isolated from Paris species for the first time.

Key words:Paris；Paris polyphylla var.yunnanensis；fibrous roots；chemical constituents

中圖分類號(hào)：R 284

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1672-8246(2015)06-0051-04

通訊作者簡(jiǎn)介：華燕 (1968-)，女，教授，博士，博士生導(dǎo)師，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)的教學(xué)與研究工作。E-mail：1026535163@qq.com

作者簡(jiǎn)介：第一文彥詩(shī) (1988-)，男，碩士，主要從事天然產(chǎn)物化學(xué)方面的學(xué)習(xí)與研究。E-mail：45664506@qq.com

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目 (31260083)。

收稿日期：*2015-05-26

doi10.16473/j.cnki.xblykx1972.2015.06.011