吳　昊，董秋梅

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2013級碩士研究生,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110; 2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)內(nèi)科學(xué)教研室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

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·實驗研究·

通督活血湯抗炎鎮(zhèn)痛作用的實驗研究*

吳昊1，董秋梅2

(1.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)2013級碩士研究生,內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110; 2.內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)內(nèi)科學(xué)教研室，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010110)

摘要目的：探討通督活血湯的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。方法：采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹實驗,觀察通督活血湯的抗炎作用；采用醋酸致痛及熱致痛模型，觀察通督活血湯的鎮(zhèn)痛作用。結(jié)果：通督活血湯可減輕二甲苯致小鼠耳炎癥反應(yīng)的腫脹度，顯著減少醋酸致痛時小鼠扭體反應(yīng)數(shù)，通督活血湯高、中劑量組可明顯提高熱致痛小鼠的痛閾值，延長抬腳反應(yīng)時間。結(jié)論：通督活血湯具有良好的抗炎、鎮(zhèn)痛作用。

關(guān)鍵詞通督活血湯；抗炎；鎮(zhèn)痛；動物；小鼠

通督活血湯是在全國第四批名老中醫(yī)臨床經(jīng)驗與學(xué)術(shù)思想傳承指導(dǎo)教師、內(nèi)蒙古地區(qū)名老中醫(yī)朱宗元教授治療頸椎病的經(jīng)驗方[1]基礎(chǔ)上，結(jié)合臨床治療脊柱關(guān)節(jié)疾病經(jīng)驗，加減擬名而成。為進(jìn)一步明確通督活血湯的藥理藥效，拓展其應(yīng)用范圍，筆者對該方的抗炎、鎮(zhèn)痛作用進(jìn)行了實驗研究。

1材料與方法

1.1動物

健康昆明種小鼠200只，雌雄各半，體質(zhì)量(25±5)g，由內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物研究中心提供,合格證號：SCXK(蒙)2002-0001。

1.2藥品、試劑與儀器

通督活血湯由葛根、桂枝、赤芍、白芍、鹿角膠、片姜黃、桃仁、紅花、川芎、地龍、白芷、雞血藤、威靈仙、水蛭、土鱉蟲、甘草、補骨脂、青風(fēng)藤、徐長卿組成，由內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)中醫(yī)學(xué)院實驗室制備；塞來昔布膠囊，輝瑞制藥有限公司產(chǎn)品，批號 J20120063；頸復(fù)康顆粒，河北頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司產(chǎn)品，批號 Z13022204。冰醋酸(批號20140617)、二 甲 苯 (批 號20140908)，均為分析純，天津市致遠(yuǎn)化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品。 TE214S型電子天平，北京賽多利斯科學(xué)儀器有限公司產(chǎn)品；YLS-6B智能熱板儀，安徽正華生物儀器設(shè)備有限公司產(chǎn)品；YLS-Q4型耳腫打孔器，南京便診生物科技有限公司產(chǎn)品。

2方法與結(jié)果

2.1統(tǒng)計學(xué)方法

2.2抗炎實驗

觀察通督活血湯對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹的影響[2]。將60只小鼠(雌雄各半)隨機分為6組，正常對照組、塞來昔布組(0.03 g/kg)、頸復(fù)康組(2.60 g/kg)，通督活血湯高(54.6 g/kg)、中(27.3 g/kg)、低(13.7 g/kg)劑量組，每組10只。各實驗組小鼠每日灌胃給藥1次，正常對照組給等容積蒸餾水，0.04 mL/g，連續(xù)7 d。末次給藥后30 min，每只小鼠右側(cè)耳廓正、反面均勻涂抹0.02 mL 二甲苯。造模1 h后，將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓對稱剪下小鼠兩耳，用直徑 8 mm 打孔器在左右耳廓相同部位打孔取材，迅速用電子天平精密稱量，計算小鼠耳廓腫脹度及抑制率。腫脹度(mg)=右耳片質(zhì)量-左耳片質(zhì)量。抑制率(%)=(正常對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/對照組平均腫脹度×100%。結(jié)果見表1。

注:與正常對照組對比,*P<0.05,**P<0.01。

由表1可知：與正常對照組對比，塞來昔布組、頸復(fù)康組和通督活血湯高、中、低劑量組小鼠耳腫脹度降低，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。頸復(fù)康組耳腫脹度>通督活血湯高劑量組>塞來昔布組,但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P> 0.05 )。通督活血湯高、中、低劑量組之間耳腫脹度兩兩對比，差別均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果顯示:通督活血湯高、中、低劑量組均對二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有抑制作用(P<0.01或P<0.05)。 表明：通督活血湯具有明確抗炎作用，但存在量效關(guān)系，其中高劑量療效最優(yōu)，與塞來昔布、頸復(fù)康的抗炎作用相當(dāng)。

2.3鎮(zhèn)痛實驗

2.3.1扭體法[2]

60只小鼠的分組及給藥方法同2.2。末次給藥后30 min,每只小鼠給予 6 g/L醋酸溶液0.2 mL腹腔注射，觀察并記錄各小鼠首次扭體時間(潛伏期)及20 min內(nèi)扭體次數(shù),計算扭體反應(yīng)抑制率。結(jié)果見表2。

注:與正常對照組對比,*P<0.05,**P<0.01。

由表2可知：與正常對照組對比，塞來昔布組、頸復(fù)康組和通督活血湯高、中、低劑量組小鼠扭體潛伏期延長，扭體次數(shù)減少，差別有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.01或P<0.05)。通督活血湯中劑量組扭體次數(shù)>通督活血湯高劑量組>頸復(fù)康組>塞來昔布組,但差別無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。通督活血湯高、中、低劑量組之間潛伏期和扭體次數(shù)兩兩對比，高低組間有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，高中、低中組之間對比均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)果顯示:通督活血湯高、中、低劑量均能減少醋酸所致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)(P<0.01或P<0.05)。表明：通督活血湯對醋酸所致小鼠有鎮(zhèn)痛作用，但存在量效關(guān)系，其中高劑量療效最優(yōu)，高、中劑量與塞來昔布、頸復(fù)康對醋酸致痛的鎮(zhèn)痛作用相當(dāng)。

2.3.2熱板法

參照文獻(xiàn)[2]方法進(jìn)行。將智能熱板儀加熱至(55.0±0.5) ℃ ,取小鼠1只放在熱板儀上，按“開始”鍵記錄時間，自放入熱板儀至出現(xiàn)舔后足所需的時間(s)作為該鼠的痛閾，凡舔足時間<5 s,或者>30 s,或者跳躍者棄之不用。取合格的60只小鼠進(jìn)入下一步實驗，分組及給藥方法同2.2。重復(fù)測定正常痛閾值,取兩次正常痛閾平均值作為給藥前痛閾值,末次給藥后分別測量并記錄第15 min、30 min、60 min、90 min、120 min各小鼠舔后足所需時間。結(jié)果見表3。

注:與正常對照組對比，*P<0.05,**P<0.01。

由表3可知：給藥前各組小鼠熱板痛閾值差別無統(tǒng)計學(xué)意義。給藥后各組小鼠熱板痛閾值較給藥前、各給藥組給藥后各時間點小鼠熱板痛閾值較正常對照組痛閾值,均有不同程度地延長。與正常對照組對比，塞來昔布組、頸復(fù)康組和通督活血湯高、中劑量絕大多數(shù)時間點鎮(zhèn)痛閾值均有明顯提高，表現(xiàn)出明顯鎮(zhèn)痛作用(P<0.01或P<0.05)；通督活血湯低劑量組在60min、90min時對熱刺激所致小鼠疼痛有明顯抑制作用(P<0.05)，其余時間鎮(zhèn)痛作用不明顯。結(jié)果顯示:通督活血湯各劑量均能不同程度地延長小鼠熱板痛閾時間,延長抬腳反應(yīng)時間。表明：通督活血湯對熱致痛小鼠有鎮(zhèn)痛作用，但存在量效關(guān)系，其中高劑量療效最優(yōu)。隨著給藥時間的延長，通督活血湯作用效果持久性也比較好。

3討論

頸椎病屬中醫(yī)學(xué)“痹癥”范疇[3]，過去多發(fā)于中老年人，而現(xiàn)在由于工作、生活方式的改變，發(fā)病率逐年升高，且發(fā)病年齡呈現(xiàn)年輕化趨勢，已成為人類嚴(yán)重的公共衛(wèi)生健康問題之一[4]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為年老體衰，陽氣虧虛，督脈氣血虧虛，失于溫煦，脈絡(luò)瘀阻；或者長期的不良坐姿等導(dǎo)致頸項部氣血瘀阻不通,日久正衰,腠理空虛,風(fēng)寒濕邪乘虛而入,血脈凝滯不通,內(nèi)外相搏,痹阻督脈,督陽受損而發(fā)為頸椎病諸癥。通督活血湯方中葛根甘寒生津、辛涼解肌，可疏通太陽經(jīng)脈之氣，鼓舞津液循經(jīng)布達(dá)，引藥直達(dá)頸項，緩解經(jīng)脈拘攣；桂枝辛溫祛風(fēng),又擅溫經(jīng)通脈；二藥合用, 調(diào)和營衛(wèi)、舒筋緩急治療頸項脊背強痛效果顯著。白芍苦酸微寒，入肝經(jīng)，可柔肝止痛、養(yǎng)血斂陰，以補為功。赤芍功能涼血散瘀，以瀉為用，與白芍為對，一散一補,既散瘀止痛,又補血養(yǎng)筋。鹿角膠溫通督脈，補命門，大補精髓，最能補精生血而益元陽，補骨脂溫腎助陽，二藥合用以補腎固督。片姜黃苦、辛溫，功能破血行氣，通經(jīng)止痛，與葛根相配，善行疏通脊背之肌肉筋脈。桃仁、紅花活血化瘀,兼能止痛。川芎活血行氣，同時與白芷引藥上行。蟲類藥地龍、水蛭、土鱉蟲長于破血逐瘀、通絡(luò)止痛。雞血藤行血補血，與威靈仙、青風(fēng)藤、徐長卿共用能溫經(jīng)通絡(luò)、驅(qū)風(fēng)散邪、活血止痛。甘草酸甘化陰，緩急止痛。諸藥合用，共奏補腎固督、活血通絡(luò)止痛之功。

本實驗所用對照藥物塞來昔布是目前治療骨關(guān)節(jié)病最常用的止痛藥，與傳統(tǒng)非甾體抗炎鎮(zhèn)痛藥相比，大大降低了患者的胃腸道不良反應(yīng)[5]，但也有研究顯示服用塞來昔布的患者發(fā)生心血管疾病的危險性增加，臨床上有較多副作用和禁忌癥。本實驗顯示：塞來昔布對不同小鼠抗炎、鎮(zhèn)痛作用個體差異性較通督活血湯大；此外，在小鼠熱致痛實驗中，其療效持久性未及通督活血湯。本實驗所用另一對照藥物頸復(fù)康是臨床最常用于治療頸椎病的中成藥。本實驗顯示：其與通督活血湯高劑量抗炎、鎮(zhèn)痛作用相當(dāng)，而通督活血湯用藥更加安全，重在通督活血，改善恢復(fù)督脈 “陽脈之?！钡淖饔?，臨床無論頸椎病還是其他脊柱關(guān)節(jié)病，只要辨證為腎督虛瘀者即可應(yīng)用。

本研究結(jié)果顯示：通督活血湯能明顯抑制二甲苯致小鼠耳腫脹炎性反應(yīng)，減少醋酸所致疼痛小鼠扭體次數(shù)，延遲小鼠首次扭體時間，提高小鼠熱刺激下的痛閾值，對不同刺激引起的疼痛均有良好的鎮(zhèn)痛效果。通督活血湯高、中劑量與塞來昔布、頸復(fù)康的抗炎、鎮(zhèn)痛作用相當(dāng)。結(jié)果表明：通督活血湯有明顯的抗炎、鎮(zhèn)痛效果作用，且抗炎、鎮(zhèn)痛作用呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。此為該方藥的臨床應(yīng)用與推廣提供了客觀依據(jù)。

4參考文獻(xiàn)

[1]楊巧芳，楊荔勇，董秋梅,等.朱宗元教授治療頸椎病經(jīng)驗[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊，2010,28(10)：2057-2058.

[2]徐叔云,卞如濂,陳修,等.藥理實驗方法學(xué)[M].3 版.北京:人民衛(wèi)生出版社,2002: 882-915.

[3]董秋梅，楊巧芳，郝華.朱宗元循經(jīng)論治頸椎病臨床經(jīng)驗探析[J].上海中醫(yī)藥雜志，2012，46(7)：64-65.

[4]Hori M, Tsutsumi S, Yasumoto Y, et al.Cervical Spondylosis:Evaluation of microstructural changes in spinal cord white matter and gray matter by diffusional kurtosis imaging[J]. Magn Reson Imaging,2014，32(5):428-432.

[5]周翔，區(qū)品中. 塞來昔布對膝骨性關(guān)節(jié)炎的療效及副作用觀察[J].藥物流行病學(xué)雜志, 2002, 11(5):228-229.

(編輯陶珠)

文章編號:1001-6910(2016)01-0063-03

中圖分類號:R285.5

文獻(xiàn)標(biāo)志碼:B

doi:10.3969/j.issn.1001-6910.2016.01.27

通信作者：董秋梅，醫(yī)學(xué)博士，教授，博士研究生導(dǎo)師，d.qium@163.com

* 基金項目：內(nèi)蒙古自治區(qū)研究生科研創(chuàng)新資助項目(S20141013205)

收稿日期：2015-04-24；修回日期：2015-09-18