梁從蓮，蒲高斌，劉謙，李佳，張永清

(山東中醫(yī)藥大學，山東 濟南 250355)

·綜述·

DNA分子標記在丹參藥材質量控制中的應用△

梁從蓮，蒲高斌，劉謙，李佳，張永清*

(山東中醫(yī)藥大學，山東 濟南250355)

本文主要介紹了隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD)、擴增片段長度多態(tài)性 (AFLP)、相關序列擴增多態(tài)性(SRAP)、基于表達序列標簽(EST)所建立的簡單重復序列標記(SSR)、DNA序列測定技術等分子標記技術在丹參種內遺傳多樣性、物種演化及其與地理分布關系。分析表明，不同分子標記各有優(yōu)缺點，建議將多種分子標記相結合或與傳統(tǒng)的形態(tài)學標記、生物化學標記和細胞學標記相結合，從而為丹參種質資源的收集保存、分類鑒定、藥材質量控制、合理開發(fā)利用與品種選育等提供理論依據。

DNA分子標記；丹參；質量控制

丹參為唇形科植物丹參SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根莖，具有活血通絡、祛瘀止痛、涼血消癰、清心除煩等功能，對心血管等疾病作用顯著。近年來，市場上時常出現(xiàn)丹參藥材以次充好、以假充真的現(xiàn)象，嚴重威脅著人們的健康與用藥安全。建立科學、快速、可靠的丹參藥材真?zhèn)舞b定技術體系，對于保證其藥材質量具有十分重要的現(xiàn)實意義。DNA分子標記是以個體間核苷酸序列變異為基礎的遺傳標記，可直接在DNA水平上檢測生物個體之間的差異[1]。目前，已有學者利用RAPD(隨機擴增多態(tài)性DNA)、AFLP(擴增片段長度多態(tài)性DNA)、SRAP(相關序列擴增多態(tài)性)、EST-SSR(基于表達序列標簽所建立的簡單重復序列標記)等分子標記對丹參藥材質量控制進行相關研究，本文對此進行了系統(tǒng)歸納、總結，以期為丹參藥材質量控制提供參考。

1 隨機擴增多態(tài)性DNA

RAPD技術是1990年由Wiliam和Welsh等人在聚合酶鏈式反應(PCR)技術基礎上發(fā)展起來的檢測DNA多態(tài)性的方法[2]。利用隨機引物(一般為8～10bp)通過PCR反應非定點擴增DNA片段，然后用凝膠電泳分析擴增DNA片段多態(tài)性，這些片段的多態(tài)為反映了基因組相應區(qū)域的DNA多態(tài)性。RAPD技術簡單，檢測速度快，對DNA樣品需求量少，而且可在基因組序列未知的情況下進行。郭寶林等[3](2002)用RAPD分子標記技術對丹參主要居群的遺傳關系及藥材道地性進行初步研究，結果表明，丹參居群內遺傳多樣性十分豐富，地區(qū)間居群的遺傳分化不均衡，并得出了山東及河南產丹參是道地藥材的結論。石嬙等[4](2010)用RAPD分子標記技術對內蒙古丹參進行了多態(tài)性分析，結果表明，所建立的RAPD體系可用于評價內蒙古產丹參藥材質量。葉文靜等[5]通過對比十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)法和十二烷基磺硫鈉(SDS)法對白花丹參DNA的提取結果，認為改良CTAB法更適合用于白花丹參基因組DNA的RAPD檢測分析，并初步篩選了RAPD擴增引物。

2 擴增片段長度多態(tài)性DNA

AFLP是1995年荷蘭科學家Zabeau和Vos等發(fā)展起來的一種檢測DNA多態(tài)性的新方法[6]。其原理是先利用限制性內切酶水解基因組DNA，產生不同大小的DNA片段，然后將這些DNA片段連上特定的人工接頭，形成特異片段，作為擴增反應的模板DNA。進而以人工接頭的互補鏈為引物進行預擴增，最后在接頭互補鏈的基礎上添加1～3個選擇性核苷酸作引物，對模板DNA基因再進行選擇性擴增，通過聚丙烯酰胺凝膠電泳分離檢測，獲得DNA擴增片段，根據擴增片段長度的不同檢測出多態(tài)性。該標記結合了RFLP(RestrictionFragmentLengthPolymorphism，限制性片斷長度多態(tài)性)標記與RAPD標記的優(yōu)點，具有高度重復性，高通量，不需清楚待測序列信息背景的優(yōu)點，而且它還具備了PCR的高效、安全、方便的特點，只需少量DNA即可對整個基因組進行選擇性擴增，且電泳譜帶清晰可辨，結果可靠穩(wěn)定[7]。唐曉清等[8]用AFLP分子標記技術對4種不同種質丹參進行分析，結果表明，丹參種內不同類型間的遺傳差異較大，其遺傳多樣性豐富。根據聚類分析結果初步將小葉型丹參確定為一個變種，丹參原型與皺葉型丹參也可初步定為丹參的栽培變種，認為AFLP技術可作為鑒別丹參種內不同類型的手段。王冰等[9]用AFLP分子標記技術對我國27個不同地理居群的丹參樣本進行遺傳多樣性分析，發(fā)現(xiàn)我國野生丹參居群間存在較高多態(tài)性，遺傳多樣性較為豐富。實驗中采用10對引物便可正確識別27個居群丹參，表明AFLP指紋圖譜數(shù)據在丹參種質資源識別和區(qū)分上表現(xiàn)出高分辨率，足以用于丹參種內分類、演化及其與地理分布間關系的研究。數(shù)據處理繪制出的進化樹顯示出8個顯著不同的與來源地密切相關的演化群。聚類分析結果顯示，不同丹參居群間遺傳距離與空間距離之間的關系較為復雜。溫春秀等[10]采用AFLP標記在DNA水平上對丹參種質資源進行遺傳多樣性研究，在選擇的6對引物組合中，不同的引物組合所得到的擴增片段數(shù)平均為79條帶，多態(tài)性擴增片段平均為68條帶，多態(tài)位點百分比平均達到86.7%。郝崗平等[11]利用AFLP分子標記技術對山東產丹參進行了基因組DNA多態(tài)性分析，結果表明，山東產丹參具有一定的遺傳多樣性，結合聚類分析進一步探討了供試類群的親緣關系，為研究山東丹參的道地性及其合理利用與保護奠定了基礎。楊建玉等[12]采用AFLP分子標記技術對北京地區(qū)鼠尾草屬的7個種23份樣本進行了親緣關系分析，結果表明，所研究的鼠尾草屬植物具有較高的多態(tài)性。聚類分析將23份樣本分為7大組，符合植物材料歸屬于鼠尾草屬7個種的事實，表明AFLP分子標記技術適用于鼠尾草屬植物親緣關系分析。

3 相關序列擴增多態(tài)性

SRAP是由美國加州大學Li和Quiros于2001年建立的一種新型分子標記，它結合了RAPD和AFLP二者的優(yōu)點，利用獨特的引物設計對ORFs(openreadingframes，開放讀碼框)進行擴增，因個體不同以及物種的內含子、啟動子與間隔長度不等而產生多態(tài)性，具有簡便、穩(wěn)定、中等產率和容易得到選擇條帶序列的特點，在基因組中分布均勻，適合基因定位、基因克隆、遺傳圖譜構建等生物學研究[13]。自建立以來已在多種植物研究中得到成功應用。有研究[14-15]通過摸索建立了丹參SRAP擴增反應體系的最優(yōu)條件，并將SRAP分子標記技術應用到丹參遺傳多樣性研究中。用36對多態(tài)性引物組合對6個丹參種群進行分析，產生了782條多態(tài)性條帶，初步證明了SRAP分析方法具有較高的準確性和可靠性。聚類分析顯示，不同丹參種群間遺傳距離與空間距離之間的關系較為復雜。王維婷等[16]在李延春等人研究基礎上增加了丹參數(shù)量，利用SRAP分子標記技術對48個不同來源的丹參種質進行遺傳多態(tài)性分析，在120條DNA擴增條帶中有109條帶呈多態(tài)性，占所觀察到的總條帶的90.83%，說明所研究的48份丹參種質具有豐富的遺傳多態(tài)性。聚類分析結果顯示，不同產地丹參種質遺傳多樣性不同，遺傳距離與空間距離存在著一定相關性。

4 基于表達序列標簽所建立的簡單重復序列標記

EST-SSR是基于表達序列標簽所建立的簡單重復序列標記，傳統(tǒng)SSR標記的開發(fā)通常需經過文庫構建，包括SSR克隆篩選、測序、引物設計和PCR擴增與分析等步驟，要投入大量的人力物力，開發(fā)成本高。從EST中開發(fā)的SSR標記(EST-SSR)與基因組SSR相比，反映了基因組的編碼區(qū)域，可直接獲得基因表達信息，為功能基因提供“絕對”標記，這有可能對決定重要表型性狀的等位基因進行直接鑒定，省去了SSR引物開發(fā)過程中的克隆和測序步驟，充分利用了現(xiàn)有測序數(shù)據，降低了開發(fā)成本[17]。該技術在不同物種間通用性好，具有較高的轉移性。多項研究表明，丹參EST的數(shù)量較多[18]，故對其進行SSR挖掘，分析其分布規(guī)律以建立EST-SSR標記體系，具有較大的意義和可行性。宋杰等[19]對丹參EST中的SSR信息進行了全面分析，并在此基礎上建立了丹參EST-SSR分子標記。在10228條丹參EST序列中搜索到含有SSR位點的序列1790條。對其加以分析發(fā)現(xiàn)，丹參的EST-SSR信息比較豐富，覆蓋了從單核苷酸重復到六核苷酸重復，認為單核苷酸是主要重復類型，其中二、三核苷酸中基元(AG)n、(ACG)n是SSR的主要重復類型。利用已篩選出的7對引物對11個丹參不同產地樣品進行PCR擴增，結果均有良好的多態(tài)性。由此可見，利用EST序列信息建立丹參EST-SSR分子標記是切實可行的。鄧科軍等[20]對丹參EST進行SSR標記挖掘，并對這些EST-SSR在丹參轉錄組中的分布特征進行全面分析，同樣得出了丹參EST-SSR信息種類比較豐富的結論，只是各核苷酸出現(xiàn)的頻率不同。認為二、三核苷酸是SSR的主要類型，其中(AG)n、(AGT)n是SSR的主要重復類型。在此基礎上開發(fā)了丹參EST-SSR標記，所有引物均顯示多態(tài)性擴增，經丹參居群間多樣性分析及鼠尾草屬種間可轉移性驗證，可有效擴增引物在鼠尾10個異源物種中的可轉移率為60%～100%，平均為85%。聚類分析結果顯示，EST-SSR分析可明確區(qū)分丹參及其他同屬植物。有研究[20-21]對NCBI(美國國家生物技術信息中心)數(shù)據庫中丹參EST中的SSR信息進行發(fā)掘比對，統(tǒng)計分析丹參SSR在不同長度EST中的發(fā)生頻率和特點，發(fā)現(xiàn)丹參EST中SSR基元類型有4種，二核苷酸與三核苷酸是丹參SSR的主要基元類型，其中(AG)n、(AAG)n是SSR的主要重復類型，顯示丹參EST-SSR具有較高的多態(tài)性和實用性。王學勇等[22]采用不同于鄧科軍等人的設計參數(shù)和引物設計軟件，對最新共計10408條丹參EST序列中的SSR進行搜索，并對其分布規(guī)律進行更廣泛和深入分析，建立了覆蓋度更高的EST-SSR新型分子標記體系，為探索該標記在丹參道地品質遺傳研究和分子育種中的應用奠定了基礎。多位學者關于丹參EST中SSR位點的分布特征的研究結果存在一定差異，這可能與研究過程中對NCBI數(shù)據庫中EST的搜索范圍設置存在差異，所采用的EST序列預處理軟件及預處理方法不一致，以及對SSR基元的歸類統(tǒng)計方法不同有關系。宋振巧等[23]對4個產地共80個丹參株系種質資源進行EST-SSR分析，發(fā)現(xiàn)栽培丹參具有豐富的遺傳多樣性，各產地丹參遺傳分化程度低，遺傳變異主要存在于產地內部。

5 DNA序列測定技術

ITS區(qū)即rRNA基因轉錄間區(qū)，具有高度重復性、長度變異少、區(qū)內變異度高等特性，故常作為植物核基因組DNA測序的基因，其中ITS2序列作為藥用植物通用條形碼已在多種藥材基原物種及其混偽品的鑒定工作中得到良好應用[24]。DNA序列測定技術是以DNA序列為核心的分子標記技術，通過比較DNA分子中4種堿基序列排列順序的變化，可反映生物體遺傳上的差異，不但直觀性強，而且重現(xiàn)性好，結果準確可靠[25]，已被廣泛應用于被子植物系統(tǒng)發(fā)育和分類學研究。汪紅等[26]對丹參ITS片段進行遺傳多樣性分析，最終獲得了核糖體DNA中ITS和5.8S完整序列，通過對比鼠尾草屬植物種間、丹參種內和外類群ITS1和ITS2序列差異百分率，可看出兩段序列在丹參種內保守，在屬間有較大差異，與外類群差異最大，可作為丹參分子鑒定標記。王迎等[27]也對鼠尾草屬藥用植物及其近緣種的ITS序列進行分析，結果顯示，5.8S序列十分保守，而ITS區(qū)段則在亞屬間差異明顯。ITS系統(tǒng)樹對于亞屬和組的處理較為合理，但對組下的劃分則表現(xiàn)出信息量不足，需要其他相關證據的支持。ITS分析支持了丹參組內其他近緣種作為丹參類藥材替代資源的合理性，同時也揭示了甘西鼠尾類高山丹參在遺傳上與丹參類藥材的顯著不同。劉靈娣等[28]比較了28份不同來源丹參種質的ITS序列，序列分析表明，ITS區(qū)的變異主要發(fā)生在內轉錄間隔區(qū)ITS1和ITS2區(qū)，ITS序列在丹參種內比較保守。聚類分析發(fā)現(xiàn)，采用rDNA-ITS方法可將28個丹參材料明確劃分，表明此方法在丹參資源材料識別與區(qū)分上表現(xiàn)出高分辨率，足以用于丹參種內分化、演化及其與地理分布間關系的研究，可以作為鑒別丹參不同類型間遺傳變異的手段。

6 其他分子標記技術

除以上分子標記技術外，一些學者也嘗試利用其他分子標記方法，或結合兩種分子標記技術對丹參進行研究。2007年徐紅等[29]采用ISSR(InterSimpleSequenceRepeat，簡單重復間隔序列)分子標記對不同產地丹參親緣關系進行研究。ISSR標記是以PCR技術為基礎的，它在技術上比SSR簡單，不需知道基因組序列即可設計引物并進行擴增，同時又可比RFLP、RAPD、SSR等分子標記技術揭示的遺傳多態(tài)性更多，具有模板需要量少、結果記錄方便、穩(wěn)定性高等特點。結果顯示，丹參具有豐富的遺傳多樣性，其遺傳變異與地理分布沒有明顯相關性，提示丹參產區(qū)之間的遺傳分化不明顯。2008年徐紅等[30]把RAPD和ISSR相結合，對多個不同產地的野生與栽培丹參進行遺傳多樣性分析，得出不同產地間的丹參存在豐富的遺傳多樣性的結論。分析不同產地丹參遺傳背景與遺傳關系發(fā)現(xiàn)，地理距離相近的丹參沒有聚類在一起，表明遺傳分化與地理分布的相關性不顯著，進一步驗證了其單獨使用ISSR的研究結果。2009年王慶浩等[31]采用新型分子標記TRAP(TargetRegionAmplifiedPolymorphism，目標區(qū)域擴增多態(tài)性)對不同產地丹參進行研究，建立了丹參鑒別新方法。TRAP技術由SRAP技術發(fā)展而來，它使用了SRAP的任意引物，但TRAP的固定引物根據基因庫中的EST序列設計而來，具有靈敏度高、特異性強、譜帶清晰、結果穩(wěn)定的優(yōu)點。但得出了不同地區(qū)間丹參遺傳分化并不十分顯著的結論，其原因有待進一步探討。2011年褚會娟等[32]以陜西野生丹參為材料，利用正交設計對MSAP(MethylationSensitiveAmplificationPolymorphism，甲基化敏感擴增多態(tài)性)預擴增和選擇性擴增體系中關鍵因素優(yōu)化篩選，建立了適合丹參的MSAP反應體系，分析了5個野生丹參居群表觀遺傳多樣性，發(fā)現(xiàn)野生丹參存在著十分豐富的遺傳多樣性。聚類分析中4個原生居群內每10個單株都能按照地理分布聚成相對獨立的分支，且沒有交叉現(xiàn)象，而另一個位于耕作活動頻繁的采樣地的10個單株未能聚在一起，說明人為因素的影響也會打破地理隔離的障礙，引起基因的異常流動。2012年張逸等[33]分別采用AFLP和MSAP兩種分子標記技術對秦巴山區(qū)5個野生丹參居群的遺傳多樣性和表觀遺傳多樣性進行比較研究，發(fā)現(xiàn)野生丹參居群間的親緣關系與其地理分布之間有明顯相關性。分子方差分析結果表明，丹參居群內變異百分率大于居群間變異百分率，說明丹參變異主要存在于居群內，居群間有一定程度的變異。2012年王海等[34]利用葉綠體微衛(wèi)星分子標記法[35]分析了丹參遺傳特征，發(fā)現(xiàn)丹參在細胞質遺傳上總體均體現(xiàn)為中等水平，而在不同地區(qū)間則存在差異。各省區(qū)間丹參的遺傳變異以種群間的遺傳變異為主，說明由于人類活動的干擾，各省區(qū)間的基因交流較明顯，在遺傳分化方面未顯示地理相關性。2013年徐海濱等[36]采用生物信息學方法，從丹參基因組框架圖序列中發(fā)掘出4832個長度超過40bp的基因組SSR位點，發(fā)現(xiàn)相同位點的SSR重復基元的重復次數(shù)在不同個體間變異較大，可作為篩選品種間遺傳多樣性的重要分子標記來源。相對于其他類型的分子標記，SSR標記為共顯性標記，其實驗操作簡單且在基因組中分布廣泛，目前已成為一類廣泛應用的分子標記。發(fā)掘出的基因組SSR位點在位點數(shù)量和序列長度上，均明顯優(yōu)于前人利用EST序列篩選EST-SSR位點的分析結果。而長片段SSR位點在進化中會有更高的概率產生長度變異，故而這些基因組SSR位點的篩選更加有利于丹參群體基因組多態(tài)性的發(fā)掘，為丹參分子育種工作提供重要資源。

7 小結

以上多種分子標記各有特點，但也存在不足之處，如RAPD為顯性標記，故而不能區(qū)分雜合子和純合子，其凝膠電泳存在共遷移問題，即只能分開不同長度DNA片段，而不能分開那些分子量相同但堿基序列組成不同的DNA片段，且RAPD易受多種因素影響，穩(wěn)定性和重復性較差；而SSR雖然為共顯性標記，可以區(qū)分雜合子和純合子，但SSR標記的引物開發(fā)成本較高，且SSR具有較強的種特異性；AFLP標記結果有一定的穩(wěn)定性，但該技術操作步驟繁瑣、技術要求較高。相對來說，ISSR和SRAP缺點較少，其中ISSR多為顯性標記，SRAP只是隨機地分布在基因組上。而理想的分子標記必須達以下幾個要求：1)具有高的多態(tài)性；2)共顯性遺傳；3)能明確辨別等位基因；4)遍布整個基因組；5) 除特殊位點的標記外，要求分子標記均勻分布于整個基因組；6)選擇中性(即無基因多效性)；7)檢測手段簡單、快速(如實驗程序易自動化)；8)開發(fā)成本和使用成本盡量低廉；9)在實驗室內和實驗室間重復性好(便于數(shù)據交換)。隨著分子標記技術的發(fā)展，新研發(fā)的分子標記越來越理想。廣大學者應借助先進的分子標記技術對丹參展開研究，可以將多種分子標記相結合或與傳統(tǒng)的形態(tài)學標記、生物化學標記和細胞學標記相結合，以克服其存在的缺點，進而建立準確、簡便、快速的丹參鑒別方法，規(guī)范丹參藥材市場，提高丹參藥材質量。

通過梳理前人對于丹參分子標記的相關研究可以看出，當前分子標記主要用于丹參遺傳多樣性的研究，而且無論采用何種分子標記手段，都能得出丹參具有較高遺傳多樣性的結果，但遺傳多樣性多表現(xiàn)在居群內。豐富的遺傳變異為良種選育奠定了良好的基礎，然而目前丹參的育種工作處于起步階段，不同來源丹參之間的親緣關系尚不明確，急需對其進行深入研究。從聚類分析對丹參居群間的親緣關系與其地理分布之間關系的研究上來看，不同學者得出的結論不同，這可能與研究者所用分子標記方法不同，研究材料數(shù)目不同有一定關系。此外，栽培丹參由于存在人為因素，如引種、選育等的影響，與地理分布的關系更為復雜，若與野生品分開研究，結果可能更清晰。

綜上所述，DNA分子標記可用于丹參種內分類、演化及其與地理分布間關系的研究，為丹參種質資源的收集保存、分類鑒定、合理開發(fā)利用與品種選育等提供科學的理論依據，同時為建立丹參藥材及其優(yōu)良品種的DNA指紋圖譜奠定基礎。

[1] 楊景華，王士偉，劉訓言，等.高等植物功能性分子標記的開發(fā)與利用[J].中國農業(yè)科學，2008，41(11)：3429-3436.

[2]JohnGK，Williams，AnneRKubelik，KennethJLivak，etal.DNApolymorphismsamplifiedbyarbitraryprimersareusefulasgeneticmarkers[J].NucleicAcidsResearch，1990，18(22)：6531-6535.

[3] 郭寶林，林生，馮毓秀，等.丹參主要居群的遺傳關系及藥材道地性的初步研究[J].中草藥，2002，33(12)：1113-1116.

[4] 石嬙，劉海濤，郝文耀，等.內蒙古產丹參的隨機擴增多態(tài)性DNA研究[J].醫(yī)藥導報，2010，29(4)：441-442.

[5] 葉文靜，韓紀舉，蔡洪信，等.RAPD分析用白花丹參葉片DNA的提取方法[J].基因組學與應用生物學，2010，29(4)：799-803.

[6]PieterVos，ReneHogers，MarjoBleeker，etal.AFLP：anewtechniqueforDNAfingerprinting[J].NucleicAcidsResearch，1995，23(21)：4407-4414.

[7] 王華新，王永勤，曹家樹，等.白菜雄性不育相關新基因BcMF1的分離及特征分析[J].中國農業(yè)科學，2008，41(4)：1119-1127.

[8] 唐曉清，王康才，陳暄，等.丹參不同栽培農家類型的AFLP鑒定[J].藥物生物技術，2006，13(3)：182-186.

[9] 王冰，張勇，陳成彬，等.中國不同地理居群丹參遺傳多樣性分析[J].中國中藥雜志，2007，32(19)：1988-1991.

[10] 溫春秀，吳志明，田偉，等.丹參種質資源遺傳多樣性的AFLP分析[J].華北農學報，2007，22(增刊)：122-125.

[11] 郝崗平，孫立彥，史仁玖，等.山東產丹參遺傳多樣性的擴增片段長度多態(tài)性指紋分析[J].時珍國醫(yī)國藥，2007，18(1)：51-53.

[12]YANGJianyu，CHENHongwei，LIUKefeng，etal.AFLPAnalysisofPhylogeneticRelationshipofSalviaspp.inBeijing[J].AgriculturalScience&Technology，2010，11(2)：72-75.

[13] 楊迎花，李先信，曾柏全，等.新型分子標記的原理及其研究進展[J].湖南農業(yè)科學，2009(5)：15-17.

[14] 李廷春，高正良，湯志順.丹參SRAP反應體系的建立與優(yōu)化[J].生物學雜志，2008，25(1)：40-44.

[15] 李廷春，樊紅泓，高正良，等.丹參遺傳多樣性的SRAP標記分析[J].核報，2008，22(5)：576-580.

[16] 王維婷，單成鋼，倪大鵬，等.不同來源丹參種質遺傳多樣性的SRAP標記分析[J].中草藥，2010，41(4)：632-635.

[17]RameshVKantety，MauricioLaRota，DavidEMatthews，etal.Dataminingforsimplesequencerepeatsinexpressedsequencetagsfrombarley，maize，rice，sorghumandwheat[J].PlantMolecularBiology，2002，48(5/6)：501-510.

[18] 宋經元，羅紅梅，李春芳，等.丹參藥用模式植物研究探討[J].藥學學報，2013，48(7)：1099-1106

[19] 宋杰，嚴鑄云，張琦，等.丹參EST序列中SSR信息的分析及分子標記的建立[J].世界科學技術—中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2009，11(1)：58-63.

[20] 鄧科君，張勇，熊丙全，等.藥用植物丹參EST-SSR標記的鑒定[J].藥學學報，2009，44(10)：1165-1172.

[21] 樊洪泓，李廷春，林毅.丹參EST序列中微衛(wèi)星分布特征分析[J].安徽農業(yè)大學學報，2010，37(3)：493-497.

[22] 王學勇，周曉麗，高偉，等.丹參新的EST-SSR分布規(guī)律及分子標記的建立[J].中國中藥雜志，2011，36(3)：289-293.

[23] 宋振巧，王建華，陳為序，等.EST-SSR分析不同產地丹參的遺傳多樣性[J].核農學報，2014，28(2)：193-199.

[24] 辛天怡，雷美艷，宋經元.中藥材DNA條形碼鑒定研究進展[J].中國現(xiàn)代中藥，2015，17(2)：170-176.

[25]XuH，LiXB，WangZT，etal.rDNAITSsequencingofHerbaDendrobii(Huangcao)[J].ActaPharmSin(藥學學報)，2001，36(10)：777-783.

[26] 汪紅，王強.丹參及鼠尾草屬植物的rDNAITS序列分析[J].中草藥，2005，36(9)：1381-1385.

[27] 王迎，李大輝，張英濤.鼠尾草屬藥用植物及其近緣種的ITS序列分析[J].藥學學報，2007，42(12)：1309-1313.

[28] 劉靈娣，謝曉亮，溫春秀，等.不同丹參種質的rDNAITS序列分析[J].北方園藝，2012(20)：146-148.

[29] 徐紅，王燕燕，魏丹紅，等.不同產地丹參藥材的ISSR分析與鑒別[J].中藥新藥與臨床藥理，2007，18(6)：454-457.

[30] 徐紅，王燕燕，王崢濤，等.不同產地丹參遺傳關系的DNA標記分析[J].時珍國醫(yī)國藥，2008，19(12)：2970-2972.

[31] 王慶浩，張伯禮.不同產地丹參的TRAP分子標記研究[J].藥學學報，2009，44(8)：927-930.

[32] 褚會娟，張今今，王喆，等.丹參MSAP分子標記技術體系的優(yōu)化及其應用[J].西北植物學報，2011，31(5)：861-867.

[33] 張逸，褚會娟，張今今.秦巴山區(qū)丹參居群遺傳與表觀遺傳多樣性比較[J].西北農業(yè)學報，2012，21(10)：142-148.

[34]HaiWANG，DongMeiHE，RuiTingWANG，etal.InvestigationonGeneticCharacteristicsofSalviamiltiorrhizaBge.by Using cpSSR Technology[J].Agricultural Science & Technology，2012，13(6)：1157-1163.

[35] Shiy Shankhar Kaundun，Satoru Matsumoto.Heterologous nuclear and chloroplast microsatellite amplification and variation in tea，Camelliasinensis[J].Genome，2002，45(6)：1041-1048.

[36] 徐海濱，錢俊，汪波，等.丹參基因組SSR位點的特征分析及引物開發(fā)[J].世界科學技術—中醫(yī)藥現(xiàn)代化，2013，15(3)：367-370.

ApplicationofDNAMolecularMarkersinQualityControlofSalviamiltiorrhiza

LIANGConglian，PUGaobin，LIUQian，LIJia，ZHANGYongqing

(ShandongUniversityofTraditionalChineseMedicine,250355,China)

This paper mainly introduces DNA molecular markers including RAPD，AFLP SRAP，EST-SSR，DNA sequencing and so on in the study of genetic diversity within species，the speciational evolution and the relationship with geographical distribution ofSalviamiltiorrhiza.The analysis result indicates that different DNA molecular markers have merits and demerits，so we think that the combination of different molecular markers or with traditional morphological markers，biochemical markers and cytological markers may provide a theoretical basis for collection，conservation，classification，identification，quality control of medicinal materials，reasonable development，utilization and the variety breeding ofS.miltiorrhiza.

DNA molecular markers；Salviamiltiorrhiza；quality control

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.7.026

2015-07-07)

山東省科技發(fā)展計劃項目(2008GG2NS02022)；山東省現(xiàn)代農業(yè)產業(yè)技術體系中草藥產業(yè)創(chuàng)新團隊建設項目(2015)；山東省高等學?？萍加媱濏椖?(J15LM55)

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張永清，教授，博士生導師，研究方向：中藥資源及其質量控制；E-mail：zyq622003@126.com