王　財(cái)，張玉霞，陳志余，瞿述根，王曉莉，陳　凡※

(1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院；2.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

?

MMP-9、TIMP-1在放療后乳腺癌患者中的表達(dá)及其臨床意義*

王財(cái)1，張玉霞2，陳志余2，瞿述根2，王曉莉1，陳凡1※

(1.青海大學(xué)附屬醫(yī)院；2.青海大學(xué)醫(yī)學(xué)院)

摘要目的探討MMP-9、TIMP-1在乳腺癌患者放療后的表達(dá)及其臨床意義。方法收集40例乳腺癌患者放療前后的血清，以ELISA法檢測(cè)MMP-9、TIMP-1表達(dá)，并分析其與年齡、TNM分期、腫瘤長(zhǎng)度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況的相關(guān)性。結(jié)果MMP-9、TIMP-1表達(dá)在乳腺癌患者的年齡、TNM分期、腫瘤長(zhǎng)度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；與放療前比較，MMP-9表達(dá)上升，TIMP-1下降(P<0.05)，MMP-9/TIMP-1比值增加(P<0.05)。Kaplan-Meier分析發(fā)現(xiàn)，中位生存期為36.00(95%CI=35.13~36.88)個(gè)月。放療前、后MMP-9/TIMP-1比值高度相關(guān)，R=0.907。結(jié)論乳腺癌患者放療后MMP-9、TIMP-1表達(dá)改變，與患者預(yù)后密切相關(guān)，可作為乳腺癌放療后預(yù)后的重要指標(biāo)。

關(guān)鍵詞乳腺癌放療基質(zhì)金屬蛋白酶-9基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑-1

CLINICAL SIGNIFICANCE OF MMP-9 AND TIMP-1

EXPRESSION IN BREAST CANCER AFTER RADIOTHERAPY*

Wang Cai1，Zhang Yuxia2，Chen Zhiyu2，Qu Shugen2，Wang Xiaoli1，Chen Fan1※

(1.Qinghai University Medical College；2.Qinghai University Affiliated Hospital)

Abstract ObjectiveTo investigate the clinical significance of MMP-9 and TIMP-1 expression after radiotherapy in breast cancer.Methods Serum of 40 breast cancer patients were collected before and after radiotherapy.The expression of MMP-9 and TIMP-1 were measured by ELISA，and analyzed the relationship between age，TNM stage，tumor length，and lymphatic metastasis.Results There was statistics difference in age，TNM stage，tumor length and lymphatic metastasis in patients with breast cancer by means of the expression of MMP-9 and TIMP-1(P<0.05).The expression of MMP-9 was increasing compared with pre-radiotherapy，as to MMP-9/TIMP-1 ratio，the TIMP-1 was decreased(P<0.05).The median survival time was 36.00(95% CI=35.13~36.88) months by Kaplan-Meier.There was high correlation of MMP-9/TIMP-1 ratio before and after radiotherapy with equal to 0.907 of R.Conclusion There is changed expression of MMP-9 and TIMP-1 and has closely correlated with the prognosis of patients，and can be used as an important index of prognosis in breast cancer after radiotherapy.

KeywordsBreast cancerRadiation therapyMMP-9TIMP-1

盡管有許多關(guān)于MMP-9、TIMP-1在腫瘤組織中的表達(dá)研究，但在放療后的乳腺癌研究未見報(bào)道[1，2]。本研究擬就其相關(guān)關(guān)系報(bào)告如下。

1資料與方法

1.1臨床資料

收集40例在青海大學(xué)附屬醫(yī)院行根治術(shù)或保乳術(shù)后首程在放療科住院接受放射治療的女性乳腺癌患者進(jìn)行回顧性研究，年齡34~71(中位年齡為55.1±12.7)歲，均經(jīng)組織病理學(xué)確診。其中I期6例，Ⅱ期21例，Ⅲ期13例，腫瘤長(zhǎng)度<2 cm者10例，2~5 cm者19例，>5 cm者11例，無(wú)局部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者15例，有轉(zhuǎn)移者25例。KPS≥80分，排除其他慢性病(肺心病、糖尿病、高血壓等)。

1.2放療方案

所有患者均仰臥位于X線模擬下用負(fù)壓墊固定體位，CT模擬機(jī)下定位后，行6 MeV電子線胸壁切線野照射，照射范圍：上界與腋鎖野下界接野，內(nèi)界與內(nèi)乳野相接，外界為腋中線，下界為對(duì)側(cè)乳房皺褶下2 cm；模擬機(jī)下觀察切肺邊界不超過(guò)2.5 cm，常規(guī)加300的楔形板，總劑量為50 Gy，常規(guī)分割2 Gy/次，5 次/周。

1.3因子檢測(cè)方法

于放療前、后清晨空腹抽取靜脈血2 mL于依地酸(EDTA)抗凝管中，離心(5000r/min)10 min，收集血清于凍存管中，-80 ℃超低溫保存?zhèn)溆?。用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)法檢測(cè)患者血清MMP-9、TIMP-1含量。嚴(yán)格按照美國(guó)R&D公司提供試劑盒說(shuō)明書操作，用北京朗普酶標(biāo)儀檢測(cè)MMP-9、TIMP-1吸光度值，并繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算表達(dá)含量。

1.4統(tǒng)計(jì)方法

2結(jié)果

2.1MMP-9、TIMP-1在乳腺癌患者中的表達(dá)(表1)

Table 1±s，ng/mL)

注：*與第一組比較P<0.05，#與放療前比較P<0.05.

表1顯示，MMP-9、TIMP-1表達(dá)在乳腺癌患者的年齡、TNM分期、腫瘤長(zhǎng)度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；與放療前比較，MMP-9表達(dá)上升，TIMP-1表達(dá)下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。

2.2MMP-9/TIMP-1與乳腺癌放療后關(guān)系的確定(表2)

Table 2±s)

表2顯示，與放療前比較，放療對(duì)MMP-9/TIMP-1比值的影響較大(P<0.05)，會(huì)增加比值。

2.3放療前、后MMP-9/TIMP-1比值相關(guān)性及生存分析(圖1~2)

圖1　放療前后MMP-9/TIMP-1比值散點(diǎn)圖

圖2　放療后乳腺癌無(wú)進(jìn)展生存期情況

對(duì)乳腺癌患者Pearson相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)(圖1)，放療前、后MMP-9/TIMP-1比值有高度相關(guān)性，R=0.907。對(duì)乳腺癌患者進(jìn)行Kaplan-Meier分析發(fā)現(xiàn)(圖2)，中位生存期為36.00個(gè)月，95%CI為35.13~36.88。

3討論

本研究對(duì)乳腺癌惡性腫瘤患者術(shù)后行放療后顯示，放療會(huì)改變MMP-9、TIMP-1表達(dá)，與患者預(yù)后密切相關(guān)，可作為乳腺癌放療后預(yù)后的重要指標(biāo)。

全世界每年有超過(guò)一百萬(wàn)新發(fā)乳腺癌患者[3]，因無(wú)明確診斷指標(biāo)判斷預(yù)后，造成后續(xù)治療方案設(shè)計(jì)依據(jù)不足。在健康成年人體中，MMP-9水平較低，只有在機(jī)體受到外界刺激時(shí)，其水平才會(huì)發(fā)生改變。有研究顯示血清MMP-9表達(dá)水平差異不僅表現(xiàn)在病人中，在健康人群中也有相關(guān)表達(dá)[4]，但這種表達(dá)含量的差異性在目前許多研究中還沒有統(tǒng)一的定論[5，6]。

據(jù)報(bào)道，乳腺癌患者中乳腺組織及癌旁組織中MMP-9、TIMP-1表達(dá)明顯增加，并且隨著腫瘤組織的擴(kuò)大、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，MMP-9、TIMP-1表達(dá)增加顯著[7-9]。本研究通過(guò)ELISA法檢測(cè)MMP-9、TIMP-1在乳腺癌患者血清中的表達(dá)顯示，MMP-9、TIMP-1表達(dá)在乳腺癌患者的年齡、TNM分期、腫瘤長(zhǎng)度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移之間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)，年齡越大、分期越晚、腫瘤越長(zhǎng)、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者M(jìn)MP-9表達(dá)越多，而TIMP-1表達(dá)減少，與吳正升等[10]研究結(jié)果一致。金誠(chéng)[11]研究發(fā)現(xiàn)，乳腺癌患者在局部6 MVx線50 Gy后局部加量16 Gy電子線照射，18個(gè)月內(nèi)97.5%的患者沒有局部復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，本研究通過(guò)Kaplan-Meier分析發(fā)現(xiàn)，5年乳腺癌患者無(wú)進(jìn)展中位生存期為36.0(95%CI為35.13~36.88)個(gè)月，與其他學(xué)者研究乳腺癌患者術(shù)后中位生存期60.00個(gè)月不一致[12]?？赡苡捎诒狙芯坎捎脽o(wú)進(jìn)展生存期計(jì)算，所以會(huì)降低生存期數(shù)。加之青海高原特殊地理環(huán)境等因素影響，也可能會(huì)影響后程治療，共同導(dǎo)致此生存期結(jié)果差異。

本研究通過(guò)放療前、后MMP-9/TIMP-1比值相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，放療后與放療前比較，MMP-9/TIMP-1比值存在高度相關(guān)性，R=0.907，MMP-9表達(dá)上升，TIMP-1下降(P<0.05)，導(dǎo)致MMP-9/TIMP-1比值總體上升。放射治療通過(guò)破壞組織細(xì)胞結(jié)構(gòu)，MMP-9表達(dá)上升，作用于ECM，導(dǎo)致ECM降解，引起照射區(qū)域損傷增加，可使局部皮膚反應(yīng)上升，但因電子射線對(duì)腫瘤細(xì)胞的殺傷作用較大，從而使腫瘤復(fù)發(fā)率明顯下降，這種MMP-9高表達(dá)與控制率上升存在的矛盾有待進(jìn)一步從流行病和分子生物學(xué)角度進(jìn)行更加深入的研究。

參考文獻(xiàn)

[1]Yousef E M，Tahir M R，St-Pierre Y，et al.MMP-9 expression varies according to molecular subtypes of breast cancer[J].Bmc Cancer，2014，609(14)：1-12

[2]Thorsen S B，Christensen S L，Würtz S O，et al.Plasma levels of the MMP-9：TIMP-1 complex as prognostic biomarker in breast cancer：a retrospective study[J].BMC Cancer，2013，598(13)：1-12.

[3]Ahmedin J，F(xiàn)reddie B，M.C M，et al.Global cancer statistics[J].CA：A Cancer Journal for Clinicians，2011，61(2)：69-90.

[4]Sung H，Choi J Y，Lee S A，et al.The association between the preoperative serum levels of lipocalin-2 and matrix metalloproteinase-9(MMP-9)and prognosis of breast cancer[J].Bmc Cancer，2012，193(12)：1-10.

[5]Provatopoulou X，Gounaris A，Kalogera E，et al.Circulating levels of matrix metalloproteinase-9(MMP-9)，neutrophil gelatinase-associated lipocalin(NGAL)and their complex MMP-9/NGAL in breast cancer disease[J].Bmc Cancer，2009，390(9)：1-7.

[6]Sheng W Z，Qiang W，Hua Y J，et al.Prognostic significance of MMP-9 and TIMP-1 serum and tissue expression in breast cancer[J].International Journal of Cancer，2008，122(9)：2050-2056.

[7]劉輝，呂麗瓊，莫小勤，等.MMP-2、MMP-7、MMP-9、TIMP-1及TIMP-2在乳腺癌組織中的表達(dá)及意義[J]. 現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2015，15(16)：3046-3048.

[8]周士珍，吳強(qiáng)，吳正升，等.乳腺癌中環(huán)氧化酶-2的表達(dá)及其與VEGF、MVD、MMP-9、TIMP-1的關(guān)系[J].臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志，2005，20(4)：442-445.

[9]范松青，魏?jiǎn)⒂?，李美容，?MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2在乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義[J].診斷病理學(xué)雜志，2003，10(2)：99-101.

[10]吳正升，吳強(qiáng)，楊九華，等.乳腺癌患者術(shù)前血清基質(zhì)金屬蛋白酶-9及其抑制因子水平的檢測(cè)及意義[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2006，6(6)：521-523.

[11]金誠(chéng).乳腺癌術(shù)后應(yīng)用放療技術(shù)的系統(tǒng)評(píng)價(jià)[J].醫(yī)學(xué)信息，2013，26(9)：119-120.

[12]田華琴，王艷杰，王斌，等.乳積方對(duì)女性乳腺癌術(shù)后患者生存狀況的影響[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合雜志，2013，33(10)：1336-1340.

收稿日期2015-05-02第36卷第4期

DOI：10.13452/j.cnki.jqmc.2015.04.010

中圖分類號(hào)R735．2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼A

* 青海省衛(wèi)生計(jì)劃生育委員會(huì)項(xiàng)目

王財(cái)(1974~)，男，漢族，青海籍，主管技師.※：通訊作者，主任醫(yī)師，教授，Email-chfa1964@ 126.com