腎透明細(xì)胞癌組織中MACC1蛋白的表達(dá)變化及意義

孟杰，張亮，張春煜

(遼河油田總醫(yī)院，遼寧盤(pán)錦124010)

摘要：目的觀察腎透明細(xì)胞癌(RCCC)組織中結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(MACC1)蛋白的表達(dá)變化，并探討其意義。方法采用免疫組化法檢測(cè)80例RCCC組織及其癌旁2 cm正常腎組織中的MACC1蛋白，分析MACC1蛋白表達(dá)與RCCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果RCCC組織及正常腎組織中MACC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別為65.0%、25.0%，二者相比，P<0.05。腫瘤Ⅲ、Ⅳ級(jí)者RCCC組織中MACC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅰ、Ⅱ級(jí)者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者腫瘤組織中MACC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)。結(jié)論 RCCC組織中MACC1蛋白表達(dá)上調(diào)，MACC1蛋白可能與RCCC的發(fā)生發(fā)展有關(guān)。

關(guān)鍵詞：腎腫瘤；腎透明細(xì)胞癌；結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1

doi：10.3969/j.issn.1002-266X.2015.39.021

中圖分類(lèi)號(hào)：R737.11 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

收稿日期：(2015-08-13)

通信作者：張春煜

腎癌是泌尿系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，其中以透明細(xì)胞腎細(xì)胞癌最為常見(jiàn)(RCCC)，占腎癌總數(shù)的70%~80%[1]。目前對(duì)于腎癌的治療方法主要是手術(shù)切除，放療、化療效果并不理想[2]。因此，尋找腎癌新的診斷標(biāo)志物和生物治療分子靶點(diǎn)是提高腎癌患者確診率、生存率的關(guān)鍵。結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移相關(guān)基因1(MACC1)是近年發(fā)現(xiàn)一個(gè)新基因，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。我們觀察了RCCC組織中MACC1蛋白的表達(dá)變化，并分析MACC1蛋白表達(dá)與RCCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系。

1資料與方法

1.1臨床資料2011～2014年行腎癌根治切除術(shù)的RCCC患者80例，男50例、女30例，年齡31~83歲。所有患者術(shù)前未作放、化療。組織核分級(jí)Ⅰ級(jí)35例、Ⅱ級(jí)23例、Ⅲ級(jí)20例、Ⅳ級(jí)2例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移42例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移38例；TNM分期Ⅰ期30例、Ⅱ期16例、Ⅲ期28例、Ⅳ期6例。術(shù)中留取腫瘤組織，并取相應(yīng)癌旁2 cm正常腎臟組織。所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性甲醛溶液固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片，分別做HE染色與免疫組化染色。

1.2MACC1蛋白檢測(cè)采用免疫組化PV-9000二步法。組織蠟塊放置于70 ℃的烤箱內(nèi)烘干2 h，然后進(jìn)行脫蠟脫水處理。滴加3% H2O230min。抗原高溫高壓熱修復(fù)后于室溫下自然冷卻，PBS沖洗3次。滴加3%H2O2溶液，完全覆蓋組織，室溫下封閉放置15 min，PBS沖洗3次。滴加一抗，4 ℃冰箱過(guò)夜。PBS洗3次，滴加試劑1(增強(qiáng)劑)，37 ℃溫箱內(nèi)孵育30 min。PBS沖洗3次，滴加試劑2(辣根酶標(biāo)記的羊抗鼠IgG多聚體)，37 ℃溫箱內(nèi)孵育30 min。PBS沖洗3次，DAB顯色，蒸餾水沖洗，蘇木素復(fù)染，乙醇脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封片。用已知陽(yáng)性組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS緩沖液代替一抗作陰性對(duì)照。在高倍視野下隨機(jī)選取5個(gè)視野，根據(jù)染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞百分比進(jìn)行結(jié)果判定[3]。染色強(qiáng)度為無(wú)著色計(jì)0分、淡黃色計(jì)1分、棕黃色計(jì)2分、棕褐色計(jì)3分；無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0分，陽(yáng)性細(xì)胞百分比≤25%計(jì)1分、26%~50%計(jì)2分，51%~75%計(jì)3分、>75%計(jì)4分；兩項(xiàng)得分相乘，0~4為MACC1蛋白表達(dá)陰性，5~12為MACC1蛋白表達(dá)陽(yáng)性。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件。計(jì)數(shù)資料比較使用χ2檢驗(yàn)或校正的χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1MACC1蛋白表達(dá)情況RCCC組織與正常腎組織中MACC1蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別為65.0%、25.0%，兩組相比，P<0.05。

2.2MACC1蛋白表達(dá)與RCCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系腫瘤Ⅲ、Ⅳ級(jí)者RCCC組織中MACC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅰ、Ⅱ級(jí)者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者腫瘤組織中MACC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P均<0.05)。見(jiàn)表1。

表1　MACC1蛋白表達(dá)與RCCC臨床病理參數(shù)的關(guān)系

注：與有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者相比，*P<0.05；與Ⅲ、Ⅳ級(jí)者相比，#P<0.05。

3討論

MACC1基因位于人類(lèi)第7號(hào)染色體，其編碼的蛋白質(zhì)含有852個(gè)氨基酸[4]，含有3個(gè)特殊功能域：SH3、ZU5和死亡功能域DD[5]。研究[6]證實(shí)，人類(lèi)7號(hào)染色體突變可導(dǎo)致細(xì)胞向惡性轉(zhuǎn)化。7號(hào)染色體上的MET基因、HGF基因分別定位于7P31.2和7q21.1[7]，其編碼的受體基因?yàn)閏-met。c-met也被認(rèn)為是腫瘤轉(zhuǎn)移和腫瘤細(xì)胞早期侵犯的標(biāo)志物。MACC1能與腫瘤細(xì)胞中的c-met啟動(dòng)子相結(jié)合，上調(diào)MET蛋白表達(dá)，激活HGF/MET信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，使腫瘤細(xì)胞增殖、侵襲能力增強(qiáng)[8]，因此MACC1被認(rèn)為是評(píng)價(jià)腫瘤患者預(yù)后的一項(xiàng)指標(biāo)。大量研究[9~13]表明，MACC1在多種惡性腫瘤組織中表達(dá)增高，如肝癌、胰腺癌、卵巢癌、肺癌、胃癌等，并與腫瘤的生長(zhǎng)、浸潤(rùn)和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。

本研究觀察了RCCC組織中MACC1蛋白的表達(dá)變化，發(fā)現(xiàn)RCCC組織中MACC1蛋白表達(dá)上調(diào)，尚超等[14]也發(fā)現(xiàn)腎癌組織中MACC1 mRNA的表達(dá)量高于癌旁正常腎組織，提示MACC1基因及蛋白的過(guò)度表達(dá)可能與腎癌的發(fā)病有關(guān)。Jin等[15]研究發(fā)現(xiàn)，MACC1蛋白高表達(dá)與腎癌遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移能力增強(qiáng)及高TNM分期有關(guān)，且MACC1蛋白高表達(dá)的患者生存率明顯降低，提示MACC1蛋白與腎癌的預(yù)后密切相關(guān)。本研究結(jié)果顯示，腫瘤Ⅲ、Ⅳ級(jí)者RCCC組織中MACC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅰ、Ⅱ級(jí)者，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者腫瘤組織中MACC1蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者，提示MACC1蛋白表達(dá)增高可能在腎癌發(fā)展過(guò)程中起到一定作用，可促進(jìn)腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移。分析原因，可能與MACC1在HGF/MET信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的特殊作用有關(guān)。MACC1與c-met啟動(dòng)子結(jié)合后激活HGF/MET信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，異常激活的HGF/MET信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路則可使細(xì)胞異常增生，發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，并逐漸獲得侵襲及轉(zhuǎn)移能力[16]。

綜上所述，MACC1蛋白高表達(dá)與腎癌的發(fā)病及惡性進(jìn)展有密切聯(lián)系，MACC1有望成為評(píng)估腎癌預(yù)后的新指標(biāo)，并可能成為腎癌分子靶向治療新的靶點(diǎn)。

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