作者單位：1.100069北京，首都醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)學(xué)系；2.130021長(zhǎng)春，吉林大學(xué)中日聯(lián)誼醫(yī)院普外科

乳腺癌表皮生長(zhǎng)因子受體與Bcl-2的表達(dá)及其臨床意義

劉光旭1，任圣楠2，房學(xué)東2，何燕1

【摘要】目的探討表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)與B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)在乳腺癌中的表達(dá)狀況及其臨床意義。方法采用免疫組化(二步法)實(shí)驗(yàn)方法檢測(cè)539例乳腺癌組織雌激素受體(estrogen receptor, ER)、孕激素受體(progesterone receptor, PR)、人表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)以及EGFR、Bcl-2的表達(dá)。結(jié)果EGFR的表達(dá)以三陰性乳腺癌最高 (44.4%)；Bcl-2的表達(dá)以管腔型乳腺癌最高(71.7%)。在EGFR的表達(dá)上，三陰性乳腺癌與管腔型乳腺癌(χ2=9.02, P<0.05)、HER-2受體陽(yáng)性組乳腺癌患者(χ2=5.78, P<0.05)相比表達(dá)率更高；在Bcl-2表達(dá)上，管腔型乳腺癌與HER-2受體陽(yáng)性組乳腺癌(χ2=70.73, P<0.0001)、三陰性乳腺癌(χ2=71.76, P<0.0001)的患者相比表達(dá)率更高。兩者的表達(dá)與其他病理特征的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。乳腺癌組織學(xué)分級(jí)越高EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率越高(χ2=11.38，P<0.05)，而B(niǎo)cl-2的陽(yáng)性表達(dá)率越低(χ2=6.92, P<0.05)。PR、Bcl-2與ER表達(dá)呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.712、0.599，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。同時(shí)，PR與Bcl-2間也呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.599，P<0.01)。而ER、PR分別與HER-2、EGFR之間以及HER-2與Bcl-2之間都呈負(fù)相關(guān)，它們的相關(guān)系數(shù)依次為-0.366、-0.133、-0.453、-0.195和-0.392。結(jié)論EGFR與Bcl-2的表達(dá)在乳腺癌不同分子亞型間存在差異； EGFR以及Bcl-2的表達(dá)可以作為乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的評(píng)價(jià)指標(biāo)，有助于評(píng)估乳腺癌的生物學(xué)行為并指導(dǎo)臨床治療以及制定預(yù)后策略。

【關(guān)鍵詞】EGFR; Bcl-2;乳腺癌;臨床病理特征

通訊作者：何燕，E-mail：yanhe118@sina.com

作者簡(jiǎn)介：吳瑤，大專學(xué)歷，主管護(hù)師，E-mail:wyao052791@163.com

【中國(guó)圖書(shū)分類號(hào)】R730.231

Expression of EGFR and Bcl-2 in breast cancer and their relationship with clinicopathological features

LIU Guangxu1，REN Shengnan2，F(xiàn)ANG Xuedong2，and HE Yan1. 1.Department of Epidemiology and Biostatistics, School of Public Health, Capital Medical University, Beijing 100069,China; 2.Department of General Surgery, China-Japan Union Hospital of Jilin University, Changchun 130021, China

Abstract【】ObjectiveTo study the expression of epidermal growth factor receptor (EGFR) and B-cell lymphoma-2 (Bcl-2) in breast cancer subtype and their relationship with clinicopathological features and the expression of ER,PR and HER-2. MethodsImmunohistochemistry was performed to detect the expression of EGFR and Bcl-2 in 539 patients with breast cancer and its correlation with clinicopathological parameters was analyzed. ResultsThe expression rate of EGFR in three negative breast cancer group (χ2=9.78,P=0.008) and Bcl-2 in luminal breast cancer group (χ2=114.11, P<0.0001) were 44.4% and 71.7%, which were the highest in all groups. The expression of EGFR showed a statistically significant difference in histological grade (χ2=11.38,P=0.003), and the expression of Bcl-2 showed a statistically significant difference in histological grade (χ2=6.92, P=0.041) and pathological type (χ2=5.39,P=0.022). No significant difference was found between the expression of both and other clinicopathological features. The expression of PR and Bcl-2 was positively correlated with the expression of Bcl-2, and their correlation coefficients were 0.712(P<0.01) and 0.599(P<0.01), respectively, which was the same with the expression between PR and Bcl-2 (r=0.599，P<0.01). However, there was a negative correlation between ER，PR and HER-2, Bcl-2 respectively, and their correlation coefficient were -0.366,-0.133,-0.453,-0.392 successively. In addition, no correlation was found between EGFR and HER-2, Bcl-2 (P>0.05). ConclusionsThe expression of EGFR and Bcl-2 is different in breast cancer subtypes. Joint detection of the expression of EGFR and Bcl-2 could be used as index of breast cancer occurrence, development, and help to guide clinical treatment and prognosis of strategy.

【Key words】EGFR; Bcl-2; breast cancer; clinicopathological features

乳腺癌是女性最為常見(jiàn)的腫瘤，并且是引起女性死亡的頭號(hào)殺手[1]。2003-2007年，中國(guó)女性乳腺癌的發(fā)病率和死亡率分別為41.64/10萬(wàn)和9.63/10萬(wàn)，在女性腫瘤中分別排名第1位和第6位[2]，給女性身心健康帶來(lái)重大負(fù)擔(dān)。近年來(lái)，乳腺癌的分子亞型及腫瘤標(biāo)志物已經(jīng)有了很多研究。其中，表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor, EGFR)與B淋巴細(xì)胞瘤-2基因(B-cell lymphoma-2, Bcl-2)的表達(dá)與腫瘤的生物學(xué)行為及預(yù)后有密切關(guān)系[3-5]，但在乳腺癌中探討兩者與臨床病理特征及其他蛋白關(guān)系的研究較少。本研究旨在分析腫瘤標(biāo)志物EGFR及Bcl-2在不同分子亞型間的表達(dá)，探討兩者與乳腺癌臨床病理特征與雌激素受體(estrogen receptor, ER)、孕激素受體(progesterone receptor, PR)、人表皮生長(zhǎng)因子受體2(human epidermal growth factor receptor-2，HER-2)表達(dá)的關(guān)系，并將其作為乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的指標(biāo)，以期用它評(píng)估乳腺癌的生物學(xué)行為、指導(dǎo)臨床治療和制定治療策略。

1　對(duì)象與方法

1.1對(duì)象收集吉林大學(xué)附屬中日聯(lián)誼醫(yī)院2009-01至2011-12經(jīng)病理診斷為乳腺癌539例，均具有完整的臨床資料和石蠟包埋的組織標(biāo)本。年齡31～79歲，中位年齡53歲。腫塊位置：左側(cè)280例，右側(cè)259例。腫瘤大?。? 2 cm 244例，2～5 cm 212例，> 5 cm 83例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者309例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者230例。TNM分期：Ⅰ期217例，Ⅱ期229例，Ⅲ/Ⅳ期93例。病理類型：浸潤(rùn)導(dǎo)管癌446例，其他93例(包括浸潤(rùn)性小葉癌38例；導(dǎo)管內(nèi)癌23例，髓樣癌19例，乳頭狀癌13例)。組織學(xué)分級(jí)：Ⅰ級(jí)89例，Ⅱ級(jí)340例，Ⅲ級(jí)110例。患者術(shù)前均未接受過(guò)放療、化療等治療。

1.2試劑EGFR、Bcl-2、 ER、PR及HER-2等抗原的單克隆抗體均購(gòu)自Dako公司。

1.3方法所有切片均在同一條件下同步同時(shí)進(jìn)行免疫組化SP法染色[3]。

1.4結(jié)果判定參照文獻(xiàn)[4-6] 標(biāo)準(zhǔn)對(duì)ER、PR、HER-2、EGFR與Bcl-2蛋白免疫組化陽(yáng)性結(jié)果進(jìn)行判定。

1.5分子亞型定義參照Cheang等[7]的報(bào)道，根據(jù)ER、PR和HER-2的表達(dá)情況，將乳腺癌分為三組亞型：管腔型組(ER+和/或PR+, HER2-)，HER-2受體陽(yáng)性組(ER-,PR-且HER2+)，三陰性組(ER-,PR-且HER2-)。

1.6統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用 SPSS19.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料用χ2檢驗(yàn)，相關(guān)性檢驗(yàn)用Spearman相關(guān)性分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)　　果

2.1EGFR與Bcl-2在不同分子亞型乳腺癌組織中的表達(dá)情況EGFR與Bcl-2在管腔型組、HER-2受體陽(yáng)性組與三陰性組不同分子亞型中的表達(dá)情況見(jiàn)表1。三組間EGFR與Bcl-2的陽(yáng)性表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=9.78,P=0.008;χ2=114.11,P<0.0001)。其中，EGFR的表達(dá)以三陰性組最高(44.4%)；Bcl-2的表達(dá)以管腔型組最高(71.7%)。在EGFR的表達(dá)上，三陰性組與管腔型組(χ2=9.02,P<0.05)、HER-2受體陽(yáng)性組(χ2=5.78,P<0.05)相比表達(dá)率更高；而管腔型組與HER-2受體陽(yáng)性組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在Bcl-2表達(dá)上，管腔型組與HER-2受體陽(yáng)性組(χ2=70.73,P<0.0001)、三陰性組(χ2=71.76,P<0.0001)的患者相比表達(dá)率更高;而在HER-2受體陽(yáng)性組與三陰性乳組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(表1)。

2.2EGFR與Bcl-2表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系乳腺癌組織中EGFR與Bcl-2的表達(dá)率分別為30.6%，56.0%。乳腺癌組織學(xué)分級(jí)越高EGFR的陽(yáng)性表達(dá)率越高，而B(niǎo)cl-2的陽(yáng)性表達(dá)率越低 (χ2=11.38,χ2=6.92),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌在Bcl-2表達(dá)上與其他類型的乳腺癌患者相比有更高的表達(dá)率 (χ2=5.39,P<0.05)。 EGFR與Bcl-2的表達(dá)在不同年齡組、腫瘤直徑、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而且EGFR的表達(dá)在不同病理類型上也無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(表2)。

表1　三組乳腺癌患者表皮生長(zhǎng)因子受體及Bcl-2表達(dá)情況　( n;%)

注：與三陰性組比較，①P<0.05；與管腔型組比較，②P<0.05

表2　表皮生長(zhǎng)因子受體與Bcl-2表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系　( n;%)

注：與Ⅲ級(jí)比較， ①P<0.05；與Ⅰ級(jí)比較，②P<0.05

2.3EGFR、BCl-2、ER、PR、HER-2之間的相關(guān)性PR、Bcl-2與ER間呈正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)分別為0.712(P<0.01)、0.599(P<0.01)。同時(shí)，PR與Bcl-2間也呈正相關(guān)(r=0.599，P<0.01)。而ER、PR 分別與HER-2、EGFR之間及HER-2與Bcl-2之間都呈負(fù)相關(guān)，它們的相關(guān)系數(shù)依次為-0.366、-0.133、-0.453、-0.195和-0.392。此外，HER-2、Bcl-2與EGFR之間均無(wú)相關(guān)性(P>0.05，表3)。

表3　EGFR、BCl-2、ER、PR、HER-2之間的相關(guān)性

注：采用Spearman相關(guān)檢驗(yàn)，①P<0.05，②P<0.01

3　討　　論

乳腺癌的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移是一個(gè)極其復(fù)雜的生物學(xué)過(guò)程，是多因素、多基因、多步驟突變的結(jié)果[8]。

EGFR 是一種分布于組織細(xì)胞膜上的多功能糖蛋白[9]，也屬于表皮生長(zhǎng)因子受體家族成員之一。它的過(guò)度表達(dá)已證明與腫瘤的惡性程度有關(guān)[2-10]。Nicholson 等[11]發(fā)現(xiàn)，在腫瘤患者中EGFR 高表達(dá)的腫瘤更易發(fā)生轉(zhuǎn)移，復(fù)發(fā)時(shí)間短、復(fù)發(fā)率高、存活期短等。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)EGFR在三陰性乳腺癌中有更高的表達(dá)，這符合三陰性乳腺癌具有更高的惡性程度以及更差的預(yù)后的報(bào)道[11-13]。

Bcl-2 是目前公認(rèn)的抗凋亡基因，它可阻斷多種原因?qū)е碌募?xì)胞凋亡過(guò)程。其中一種主要通過(guò)阻斷內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶的DNA 切割活性，從而阻斷細(xì)胞的程序性死亡[12]。Bcl-2在多種腫瘤中都有表達(dá)，但表達(dá)的預(yù)后意義差異很大，在慢性淋巴細(xì)胞白血病、胰腺癌、胃癌患者中，Bcl-2高表達(dá)提示預(yù)后不良；然而在乳腺癌中，多數(shù)報(bào)道Bcl-2高表達(dá)是預(yù)后良好的指標(biāo)。文獻(xiàn)[13,14]研究表明Bcl-2蛋白表達(dá)與組織學(xué)分級(jí)呈負(fù)相關(guān)，在組織學(xué)分級(jí)中I～Ⅱ級(jí)表達(dá)率明顯高于Ⅲ級(jí)，且提示Bcl-2高表達(dá)是預(yù)后良好的指標(biāo)。Hellemans 等[15]研究表明Bcl-2蛋白高表達(dá)與預(yù)后較好有密切關(guān)系，且與組織學(xué)分級(jí)呈負(fù)相關(guān)，同時(shí)Bcl-2蛋白陽(yáng)性表示癌細(xì)胞分化程度高，增殖能力和侵襲力弱。本研究顯示，Bcl-2在預(yù)后較好的管腔型乳腺癌中有高表達(dá)，同時(shí)在組織學(xué)分級(jí)中，級(jí)別越高，Bcl-2的表達(dá)率越高，這與Hellemans等[15]報(bào)道一致。

乳腺癌是激素依賴型腫瘤，它的生長(zhǎng)依賴于體內(nèi)雌孕激素水平，受ER 、PR 的調(diào)控，ER、PR是公認(rèn)的唯一能預(yù)測(cè)內(nèi)分泌治療效果的最可靠生物標(biāo)志物[16,17]，因此了解乳腺癌組織中的ER、PR 的表達(dá)極為重要。Gee 等[18,19]指出，Bcl-2蛋白受雌激素調(diào)節(jié)，且多局限在ER、PR 陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞中，而ER、PR 陽(yáng)性又是內(nèi)分泌治療的必要條件，故認(rèn)為Bcl-2高表達(dá)患者預(yù)后好可能是由于其對(duì)激素治療反應(yīng)好所致。本研究結(jié)果表明，Bcl-2的表達(dá)與ER、PR的表達(dá)呈正相關(guān)的關(guān)系[20]，這也與Rolland P[19]報(bào)道一致。因此，Bcl-2的表達(dá)可能為內(nèi)分泌的治療提供很好的指標(biāo)。臨床研究表明，ER、PR表達(dá)為預(yù)后好的因素，而HER-2表達(dá)為預(yù)后不好的因素[12,21]，EGFR高表達(dá)通常認(rèn)為患者腫瘤惡性度高、預(yù)后不良[23, 24]。本研究結(jié)果顯示，EGFR與ER、PR呈負(fù)相關(guān)，而與HER-2呈正相關(guān)，得到的結(jié)論與上述研究一致。本研究主要對(duì)EGFR、Bcl-2 的表達(dá)及與乳腺癌臨床病理特征之間的關(guān)系進(jìn)行探討，研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，EGFR與Bcl-2的表達(dá)之間無(wú)相關(guān)性，所以對(duì)EGFR與Bcl-2的共表達(dá)未作進(jìn)一步的探討。

綜上所述，乳腺癌出現(xiàn)EGFR表明惡性程度高，預(yù)后差，特別是在三陰性乳腺癌患者表達(dá)最高[23]，而B(niǎo)cl-2在預(yù)后較好的管腔型乳腺癌中表達(dá)更高。兩者的表達(dá)都與組織學(xué)分級(jí)有關(guān)系，組織學(xué)分級(jí)越高EGFR表達(dá)率越高而B(niǎo)cl-2表達(dá)率越低，提示EGFR與Bcl-2的高表達(dá)提示乳腺癌表現(xiàn)了更加惡性的臨床病理特征。而EGFR的高表達(dá)與Bcl-2的低表達(dá)對(duì)預(yù)后的影響需要本研究進(jìn)行預(yù)后的隨訪調(diào)查。另外，本研究還發(fā)現(xiàn)，EGFR表達(dá)與ER、PR呈負(fù)相關(guān)；Bcl-2表達(dá)與ER、PR呈正相關(guān)，與HER-2呈負(fù)相關(guān)，提示EGFR與Bcl-2與激素受體的表達(dá)有密切關(guān)系。因此，檢測(cè)EGFR與Bcl-2表達(dá)可以作為乳腺癌發(fā)生、發(fā)展的指標(biāo)，對(duì)評(píng)估乳腺癌的生物學(xué)行為以及指導(dǎo)臨床治療和預(yù)后策略的制定具有重要的臨床意義。

志謝：吉林大學(xué)中日友誼醫(yī)院普外科提供乳腺癌病理組織標(biāo)本。

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(2014-11-30收稿2015-01-20修回)

(責(zé)任編輯梁秋野)