鎖陽(yáng)三萜咀嚼片的工藝研究

許海燕1，王常喜1，張麟1，馬超美1，楊勇智2

(1.內(nèi)蒙古大學(xué) 生命科學(xué)學(xué)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特010021；2.萬(wàn)銘集團(tuán)，內(nèi)蒙古 呼和浩特010021)

摘要：以富含3種三萜成分的鎖陽(yáng)乙醇提取物為原料，研制鎖陽(yáng)三萜咀嚼片.探討鎖陽(yáng)三萜咀嚼片的加工工藝和相關(guān)技術(shù)，確定出鎖陽(yáng)三萜咀嚼片的配方(質(zhì)量分?jǐn)?shù))為：30%鎖陽(yáng)三萜、15%奶粉、17%糖粉、27%玉米淀粉、10%微晶纖維素、0.22%甘草酸、0.78%檸檬酸等，制得口感好、表面光滑美觀、色澤均勻、硬度好、咀嚼性?xún)?yōu)良的新型鎖陽(yáng)三萜咀嚼片.另外，建立了超高效液相-四極桿質(zhì)譜聯(lián)用方法測(cè)定提取物及咀嚼片中3種三萜的含量.

關(guān)鍵詞：鎖陽(yáng)；三萜；咀嚼片；超高效液相-四極桿質(zhì)譜聯(lián)用

DOI：10.3969/j.issn.1000-1565.2015.05.007

中圖分類(lèi)號(hào)：TS201.1文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A

收稿日期:2015-04-22

基金項(xiàng)目：鎖陽(yáng)三萜的保肝功能食品研發(fā)橫向課題(21400-5156007)

Formulation and evaluation of chewable tablet of

triterpenes fromCynomoriumsongaricium

XU Haiyan1，WANG Changxi1，ZHANG Lin1，MA Chaomei1，YANG Yongzhi2

(1. College of Life Sciences, Inner Mongolia University, Hohhot 010021, China;

2. Wan Ming Industrial (Group) Co., Ltd., Hohhot 010021, China)

Abstract:Triterpene chewable tablets were prepared with an ethanol extract containing the 3 major triterpenoid constituents of Cynomorium songaricium as main material.The formula (mass percent) of the chewable tablet was determined as: 30% ethanol extract of C. songaricium, 15% milk powder, 17% sugar powder, 27% corn starch, 10% microcrystalline cellulose, 0.22% glycyrrhizic acid, 0.78% citric acid and so on. Cynomorium triterpene chewable tablets with good taste, smooth surface, identical color, proper hardness and good chewability have been produced. In addition, an ultra-high performance liquid chromatography-quadrupole mass spectrometry (UPLC-QQQMS) method was developed to quantify the 3 Cynomorium triterpenes in the extract and the tablets.

Key words: cynomorium songaricium; triterpene; chewable tablets; UPLC-QQQMS

第一作者：許海燕(1987-)，女，內(nèi)蒙古呼和浩特人，內(nèi)蒙古大學(xué)在讀碩士生，主要從事天然藥物與功能食品研究.

E-mail：582828746@qq.com

通信作者：馬超美(1962-)，女，陜西三原人，內(nèi)蒙古大學(xué)教授，博士后，主要從事天然藥物與功能食品研究.

E-mail：cmma@imu.edu.cn

鎖陽(yáng)(Cynomoriumsongaricium)又名不老藥，是一種多年生肉質(zhì)寄生草本植物，常寄生于蒺藜科白刺等植物的根上，生長(zhǎng)于內(nèi)蒙古、寧夏、甘肅等地的草原化荒漠地帶，是一種傳統(tǒng)的中藥，用于補(bǔ)腎、助陽(yáng)、益精、潤(rùn)腸等[1].當(dāng)?shù)厝藗冞€把它添加在茶和酒里，或者當(dāng)作蔬菜食用.鎖陽(yáng)中含有世界衛(wèi)生組織公布的7種人體必需的微量元素鐵、銅、鋅、錳、鎳、鉬、鈷，鉬、鐵和鋅含量較高[2].王宗兵等報(bào)道鎖陽(yáng)可以提高小鼠運(yùn)動(dòng)耐力[3].有研究發(fā)現(xiàn)，鎖陽(yáng)具有保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的作用[4].現(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，鎖陽(yáng)具有抗氧化、抗糖尿病、抑制HIV-1蛋白酶活性、提高免疫力等功能.鎖陽(yáng)中主要化合物包括：三萜類(lèi)、甾體類(lèi)、木脂素類(lèi)、黃酮類(lèi)等.鎖陽(yáng)中已有報(bào)道的4種三萜類(lèi)化合物為熊果酸、乙酰熊果酸、熊果酸丙二酸半酯、齊墩果酸丙二酸半酯[5].三萜類(lèi)化合物具有抗HIV和HCV蛋白酶活性，且熊果酸丙二酸半酯的活性強(qiáng)于熊果酸[6].熊果酸可明顯改善慢性乙醇性大鼠肝臟組織病理學(xué)損傷，改善二甲基亞硝胺所致的大鼠肝纖維化，用于臨床治療甲、乙型急性病毒性肝炎治愈率達(dá)89.3%，并且熊果酸可顯著而迅速地降低血清轉(zhuǎn)氨酶的活性，消退黃疸，增進(jìn)食欲和恢復(fù)肝功能[7].從鎖陽(yáng)提取得到的富含熊果酸的活性部位對(duì)肝臟和腎臟具有保護(hù)作用[8].

鎖陽(yáng)可作為藥食兩用的植物，它的醫(yī)用及保健價(jià)值越來(lái)越受到人們的重視，其產(chǎn)品的質(zhì)量控制和規(guī)范化生產(chǎn)也逐漸引起重視[9].本研究以含有鎖陽(yáng)三萜的乙醇提取物為主要原料，選擇適當(dāng)?shù)妮o料，調(diào)整各成分比例，采用濕法制粒的方法，研制出口味酸甜，攜帶方便，具有對(duì)化學(xué)性肝損傷有輔助保護(hù)作用的鎖陽(yáng)三萜咀嚼片.

1材料和方法

1.1　材料

鎖陽(yáng)(Cynomoriumsongaricium)購(gòu)買(mǎi)于內(nèi)蒙古阿拉善盟左旗；玉米淀粉：內(nèi)蒙古玉王生物科技有限公司；奶粉：內(nèi)蒙古金河套乳業(yè)有限公司；糖粉：云南省鳳慶糖業(yè)集團(tuán)有限責(zé)任公司；微晶纖維素：安徽山河藥用輔料股份有限公司；滑石粉：廣西桂林市海達(dá)滑石制品有限公司；聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)：博愛(ài)新開(kāi)源制藥股份有限公司.

1.2　工藝流程

鎖陽(yáng)三萜咀嚼片以鎖陽(yáng)的乙醇提取物為原料，添加甜味劑、黏結(jié)劑、酸味劑、填充劑等輔料，采用楊春梅等人[10]的濕法制粒方法，并在其基礎(chǔ)上進(jìn)行改進(jìn)與優(yōu)化，用于研制鎖陽(yáng)三萜咀嚼片.

鎖陽(yáng)→預(yù)處理→乙醇提取→減壓濃縮→原料

↓

輔料→混合→制軟材→制?！稍铩！鷫浩治鰴z測(cè)→包裝→成品

1.2.1原料的制取

預(yù)處理：將鎖陽(yáng)清理去雜，粉碎成黃豆大小的顆粒.加入4倍量體積分?jǐn)?shù)為95%的乙醇溶液[11]，常溫浸泡24 h，每6 h攪拌1次，連續(xù)提取3次，提取液于減壓濃縮罐中于70 °C減壓濃縮成浸膏.

1.2.2制軟材

1)配方調(diào)試實(shí)驗(yàn)：將幾種主要輔料設(shè)計(jì)成幾組不同的比例，制作鎖陽(yáng)三萜咀嚼片，品嘗后根據(jù)口感、外觀、片質(zhì)量差異、硬度的統(tǒng)計(jì)，確定此實(shí)驗(yàn)的最佳工藝配方. 2)軟材的制作方法：輔料混合攪拌10~15 min至完全均勻，緩慢加入一定比例的原料，制作軟材，制成的軟材軟硬度適中，手握成團(tuán)，輕壓則散，造粒過(guò)篩時(shí)不粘篩網(wǎng)，成均勻的顆粒狀.

1.2.3造粒與干燥

將軟材投入搖擺式顆粒機(jī)中進(jìn)行造粒，顆粒制成后，立即置于60 ℃烘箱中進(jìn)行干燥，以免濕顆粒結(jié)成塊.

1.2.4整粒

將干燥好的軟材過(guò)孔徑0.85 μm篩，成適合壓片的均勻顆粒，以免一些濕顆粒結(jié)成塊，影響壓片效果.

1.2.5壓片

適當(dāng)調(diào)整壓片機(jī)的壓力與物料填充量，避免導(dǎo)致壓力太小、填充量少、成品易碎與壓力過(guò)大、填充量多、成品太硬不易咀嚼的結(jié)果.

1.3　檢測(cè)分析

通過(guò)UPLC-QQQMS，參考馬超美等[11]的色譜條件與質(zhì)譜條件，并在其基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化，檢測(cè)鎖陽(yáng)三萜咀嚼片中的三萜成分及其含量.

1.3.1樣品處理

隨機(jī)取制得的三萜咀嚼片成品，稱(chēng)重(0.619 96 g)粉碎后用甲醇按藥粉：溶劑(1 g: 20 mL)的比例混合，超聲提取10 min，搖晃，連續(xù)提取3次，提取液在3000 r/min的離心力下，離心10 min，上清液用甲醇稀釋20倍后用0.22 μm微濾膜過(guò)濾，濾液由UPLC-QQQMS檢測(cè).

1.3.2色譜條件

色譜柱為Agilent ZORBAX Eclipse Plus C18(2.1 mm×50 mm; particle size: 1.8 μm)，流動(dòng)相分別為體積分?jǐn)?shù)0.1%的甲酸溶液(A)、甲醇溶液(B)，柱溫為30 ℃，梯度洗脫程序如表1所示.

表1　梯度洗脫條件

1.3.3質(zhì)譜條件

電噴霧電離源(ESI)，源霧化電壓為4 000 V，溫度為350 ℃，掃描模式為負(fù)離子.掃描方式為多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM).

2結(jié)果與分析

2.1　乙醇提取條件的確定

乙醇提取鎖陽(yáng)顆粒，將鎖陽(yáng)中脂溶性成分三萜提取出來(lái)[12].

2.1.1乙醇提取時(shí)間及溫度的確定

研究表明，高溫會(huì)降低鎖陽(yáng)中熊果酸(1)、乙酰熊果酸(2)、熊果酸丙二酸半酯(3)(圖1)的含量，且時(shí)間越長(zhǎng)含量越低.本研究組在研究溫度對(duì)鎖陽(yáng)三萜成分的影響中曾發(fā)現(xiàn)鎖陽(yáng)中抑制丙肝病毒蛋白酶活性最強(qiáng)的熊果酸丙二酸半酯對(duì)高溫最敏感[6].因此，本研究采用常溫提取鎖陽(yáng)，為了將三萜成分提取完全提取時(shí)間定為24h，提取次數(shù)定為3次.

1.熊果酸；2.乙酰熊果酸；3.熊果酸丙二酸半酯.

2.1.2乙醇濃度的確定

三萜類(lèi)成分能溶于乙醇.在室溫下，用乙醇溶液提取鎖陽(yáng)三萜，不同體積分?jǐn)?shù)的乙醇提取的鎖陽(yáng)三萜中熊果酸(1)、乙酰熊果酸(2)、熊果酸丙二酸半酯(3)的含量，見(jiàn)表2.

表2　乙醇體積分?jǐn)?shù)對(duì)三萜中熊果酸、乙酰熊果酸、熊果酸丙二酸半酯含量的影響

由表2可知，室溫下，隨著乙醇體積分?jǐn)?shù)的升高，提取物中的熊果酸、乙酰熊果酸、熊果酸丙二酸半酯的含量升高，體積分?jǐn)?shù)95%的乙醇溶液所提取的化合物1、2、3顯著高于體積分?jǐn)?shù)40%乙醇，因此，體積分?jǐn)?shù)95%乙醇適于提取鎖陽(yáng)中的三萜成分.

2.2　乙醇提取物的檢測(cè)

將提取后的乙醇溶液減壓濃縮成浸膏，于超高效液相-四極桿質(zhì)譜(UPLC-QQQMS)分析，與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照檢測(cè)浸膏所含有的熊果酸(1)、乙酰熊果酸(2)、熊果酸丙二酸半酯(3)(圖2).

a.標(biāo)準(zhǔn)品;b.鎖陽(yáng)乙醇提取物.

由圖2可知，乙醇提取物中含有熊果酸 (1)、乙酰熊果酸(2)和熊果酸丙二酸半酯(3)，熊果酸丙二酸半酯與熊果酸的保留時(shí)間相近，分別為2.1,2.4 min，乙酰熊果酸與之相比保留時(shí)間較長(zhǎng)為4.5 min.

2.3　輔料的確定

鎖陽(yáng)三萜咀嚼片是由乙醇提取的浸膏與輔料混合組成，輔料的選擇直接影響咀嚼片的制粒效果、粘牙程度、壓片效果等.

2.3.1黏合劑的選擇

30%的乙醇浸膏加主要輔料——黏合劑，采用不同的黏合劑制粒，觀察制粒效果及壓片后片劑硬度、粘牙程度，不同黏合劑制出粒的效果見(jiàn)表3.

表3　不同黏合劑對(duì)鎖陽(yáng)三萜的制粒效果

由表3可知，質(zhì)量分?jǐn)?shù)20%微晶纖維素+質(zhì)量分?jǐn)?shù)50%玉米淀粉與其他組比較起來(lái)整體效果較優(yōu)，整粒過(guò)程中無(wú)大塊出現(xiàn)，壓出的片劑較硬，不疏松，不粘牙，因此，當(dāng)玉米淀粉的量高于微晶纖維素時(shí)，所制得的粒硬度較好.

2.3.2咀嚼片配方

選取不同的配方(表4)對(duì)咀嚼片的片性、口感進(jìn)行研究，由20人進(jìn)行品嘗分別對(duì)色澤、外觀、口感、質(zhì)地進(jìn)行評(píng)價(jià)，分?jǐn)?shù)均為1~5分，確定出最佳配方，結(jié)果見(jiàn)表5.

感官指標(biāo)為外觀：外形完整、光滑、厚薄均勻、邊緣整齊； 色澤：呈淡棕色且均勻； 口感：酸甜適中、可口；質(zhì)地：內(nèi)質(zhì)結(jié)構(gòu)細(xì)密均勻，硬度適中.

表4　咀嚼片配方

準(zhǔn)確稱(chēng)取上述配方混勻、制粒、干燥后添加潤(rùn)滑劑，選用硬脂酸鎂+滑石粉作為本處方的潤(rùn)滑劑，二者合用可將助流、潤(rùn)滑和抗黏3種特性表現(xiàn)最佳[13].稱(chēng)取質(zhì)量分?jǐn)?shù)3%滑石粉、質(zhì)量分?jǐn)?shù)0.5%硬脂酸鎂.

表5　鎖陽(yáng)三萜咀嚼片感官評(píng)價(jià)

由表4,5得，甘草酸、檸檬酸含量高口感最差，甘草酸太甜，甜度幾乎是蔗糖的200倍，甜味在口腔殘留長(zhǎng)久.因此，配方1太酸太甜，且甜味久久不退；配方2有些酸且偏甜，一部分人不能接受；配方4略偏甜，且藥味較濃；4種配方中配方3是大多數(shù)試食者喜愛(ài)的口味，且其色澤均勻，外觀光滑整齊，硬度適中，酸甜可口.

2.3.3聚乙烯基吡咯烷酮(PVP)的確定

PVP具有良好的食物安全性，在制作片劑時(shí)添加適量PVP對(duì)片劑的硬度會(huì)有一定的影響，上述配方確定后，取一部分制粒干燥后加質(zhì)量分?jǐn)?shù)2%PVP混勻，再加潤(rùn)滑劑壓片，與不加PVP的片子做硬度比較實(shí)驗(yàn).取10片制劑進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表6.

表6　PVP對(duì)片劑硬度的影響

由表6知，不添加PVP所制得的片劑疏松、易裂，添加少量PVP后的片劑較為結(jié)實(shí)，可推測(cè)成品后在搬輸過(guò)程中不易掉渣，不易裂.

2.4　UPLC-QQQMS檢測(cè)鎖陽(yáng)三萜咀嚼片中的三萜成分及其含量

2.4.1UPLC-QQQMS檢測(cè)

優(yōu)化化合物熊果酸(1)、乙酰熊果酸(2)、熊果酸丙二酸半酯(3)的質(zhì)譜條件，見(jiàn)表7.將三萜咀嚼片的提取液于UPLC-QQQMS檢測(cè)，色譜結(jié)果見(jiàn)圖3.

圖3　咀嚼片中熊果酸、乙酰熊果酸、熊果酸丙二酸半酯LC-MS MRM檢測(cè)

化合物相對(duì)分子質(zhì)量母離子(m/z)子離子(m/z)碰撞電壓/V熊果酸(1)456455455135乙酰熊果酸(2)498497497135熊果酸丙二酸半酯(3)542541497135

由表7與圖3可知熊果酸丙二酸半酯碎裂后有負(fù)離子為497的子離子，而熊果酸與乙酰熊果酸不易碎裂.

2.4.2定量分析

采用外標(biāo)法確定每片中化合物1、2、3的含量，將3種化合物的標(biāo)準(zhǔn)品混合由DMSO配成10 μg/mL的初始溶液，之后依次4倍稀釋?zhuān)蚕♂?個(gè)梯度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，定量結(jié)果見(jiàn)表8.

表8　化合物1,2,3的定量結(jié)果

由圖3與表8知，制得的鎖陽(yáng)三萜咀嚼片中含有化合物1、2、3，且熊果酸丙二酸半酯的含量最高為0.145 71%，乙酰熊果酸次之為0.057 65%.

3討論

本實(shí)驗(yàn)研究的鎖陽(yáng)三萜咀嚼片，工藝簡(jiǎn)單、可行、穩(wěn)定、可靠.以鎖陽(yáng)中三萜成分為原料，搭配適當(dāng)?shù)妮o料研制而成.其最佳工藝配方為(質(zhì)量分?jǐn)?shù))：浸膏30%、奶粉15%、微晶纖維素10%、玉米淀粉27%、糖粉17%、甘草酸0.22%、檸檬酸0.78%.制成的咀嚼片顏色均勻，口味酸甜，方便攜帶、服用.在咀嚼片中的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為：0.029 51%，0.057 65%，0.145 71%.因此本研究建立的鎖陽(yáng)三萜成分定量方法，可用于鎖陽(yáng)及其制劑的質(zhì)量控制.

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(責(zé)任編輯：梁俊紅)